HPLC法研究不同产地蔓荆子果实及花萼中蔓荆子黄素含量的差异

赵 媛,石 磊,库德热提·阿吉,刘 艺

乌鲁木齐市中医医院,乌鲁木齐 830000

蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆VitextrifoliaL. var.simplicifoliaCham.或蔓荆VitextrifoliaL.的干燥成熟果实。文献记载,蔓荆子具有疏风散热、清利头目等功效[1-2],临床常用于治疗感冒、头痛、周期性头痛及眼痛等[3]。研究表明,蔓荆子黄素对人体肺癌H322细胞的增殖有抑制作用[4]。经典名方中常使用蔓荆子,2018年国家中医药管理局同国家药品监督管理局制定并公布的《古代经典名方目录(第一批)》中有2个经典名方中含有蔓荆子[5]。

蔓荆子的炮制方法在各类书籍中的记载各不相同,但大致分为5种:生用、清炒、酒蒸、酒煮、蒸炒共用,其中生用、清炒、酒蒸3种方法中均要求去除白膜(花萼)。但通过查阅文献发现,去除花萼是否合理及花萼中是否含有效成分均未见相关研究。为确保药材药理作用和临床疗效,合理控制药材质量,用高效液相色谱法(high perfomance liquid chromatography,HPLC)对江西、云南、安徽等5地15个批次蔓荆子花萼及果实(去除花萼)中蔓荆子黄素的含量进行分析,进一步讨论了是否应该去除花萼,为蔓荆子的合理应用提供一定的科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agelint 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Sartorius BP 110 S型电子天平(德国赛多利斯);DZKW-型电热恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂);101A-8型电热鼓风干燥箱(上海实验仪器厂有限公司)。

1.2 试药

蔓荆子黄素对照品(批号111554-201705,中国食品药品检定研究院);磷酸(分析纯,批号20200504,天津市大茂化学试剂厂);水为超纯水。本实验中所用药材均由安徽济善堂中药科技有限公司提供,并由乌鲁木齐市中医医院主任药师刘艺鉴定[符合《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)标准]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(60∶40);检测波长为258 nm;柱温为30 ℃;流速为1.0 mL·min-1;进样量为10 μL。同时要求理论板数按蔓荆子黄素峰计算应不低于2 000。在此条件下,蔓荆子黄素与其他组分的分离度较好。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定蔓荆子黄素对照品适量,置于10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,得质量浓度为0.29 mg·mL-1的对照品溶液。

2.3 样品的收集

蔓荆子:采集不同地区的蔓荆子,晾干,备用。

蔓荆子果实:取上述蔓荆子适量,去除花萼,收集果实备用。

蔓荆子花萼:取上述去除的花萼适量,备用。

2.4 供试品溶液的制备

取药材粉末(过3号筛)约2 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定质量,加热回流1 h,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.5 线性考察

分别精密吸取2.2项下制备的对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,稀释得系列对照品溶液。精密吸取系列对照品溶液各10 μL,按2.1项下色谱条件测定,以对照品质量浓度为横坐标(x)、峰面积为纵坐标(y),进行线性回归,回归方程为y=13 001x-3.59(r=0.999 6),结果表明蔓荆子黄素在14.5～72.5 μg·mL-1范围内,药物质量浓度与其峰面积线性关系良好。

2.6 样品含量测定

精密吸取0.029 mg·mL-1对照品溶液10 μL,注入高效液相色谱仪,进行测定,得到色谱图。同样方法测定供试品溶液,得到供试品的色谱图。按照2.1项下色谱条件测定,2种溶液的色谱图见图1,结果见表1、表2。

表1 5个省份所产蔓荆子中蔓荆子黄素含量测定的结果 (n=3)

表2 蔓荆子果实及花萼中蔓荆子黄素含量的测定结果(n=3)

注:A. 蔓荆子黄素对照品;B.蔓荆子供试品;1.蔓荆子黄素。

3 讨论

蔓荆子在过往医书中记载分为生品和炮制品2种。生品使用最早可追溯到宋代,如宋代医书《圣济总录》和《太平惠民和剂局方》记载:“(蔓荆子)去白皮”。其后又有诸多蔓荆子生用的记载,如《集验背疽方》记载:“去蒂并白膜”;另外在《汤液本草》和《用药法象》记载方法为“拣净,杵碎用”;《奇效良方》记载:“去萼”;《本草纲目》记载:“寻常只去膜打碎用之”。由此可见,蔓荆子生品的主要处理方法是净制后去膜(皮),打碎用[5-6]。2015年版及2020年版《中国药典》收载的蔓荆子饮片均为“除去杂质”使用,张卫等[7]认为《中国药典》收载的“除去杂质”即为除去花萼,但迄今为止,花萼是否作为杂质除去,尚无科学统一的说明及规定。本次实验结果表明,蔓荆子花萼中蔓荆子黄素的含量较高,对整体药材含量的贡献值最多可达26%,若除去花萼,则较大程度地损失了有效成分。因此蔓荆子生品在使用时不建议将其花萼作为杂质去除。

蔓荆子历代的炮制方法有酒蒸、酒炒、清炒等[8],其中炒制法沿用至今。炒制大致有2种:①清炒,打碎用,如《太平圣惠方》中记载:“(蔓荆子) 炒熟”[9],《本草蒙筌》记载:“依时采收,阴干、炒研去衣才用”等;②加酒拌炒,现代以微炒居多。上述炮制时皆为除去花萼,使饮片易碎制、净制,达到易于煎出有效物质,从而提高蔓荆子饮片疗效的目的。关于蔓荆子加酒拌炒及清炒工艺,本课题组前期做了初步研究,结果显示,经炮制后,蔓荆子中蔓荆子黄素的含量有所上升[10-12],但是该研究是在除去花萼的基础上进行的,因此,蔓荆子炮制过程中是否应该除去花萼同样存在疑问,后续将进一步研究。

本研究结果显示,产地不同的蔓荆子中蔓荆子黄素含量的差异较大,江苏及江西产蔓荆子中蔓荆子黄素的含量较高,而山东和云南所产品种中的含量较低,广西居中,本次实验结果与现有文献结果基本一致[13]。蔓荆子花萼的多少与产地、采收时间均有较大的关系。实验结果表明,蔓荆子花萼占比高达14.58%(江苏),最低也占4.88%(云南)。而花萼中蔓荆子黄素的含量高达26.13%。对于花萼占比较高的蔓荆子,去除花萼则对有效成分含量的影响较大。

综上所述,除去花萼对蔓荆子中蔓荆子黄素的含量测定结果有较大的影响,同时对蔓荆子的质量控制也有影响,故建议蔓荆子在使用过程中应保留花萼。