胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究

李笃军，苏维奇，朱元祺

（1.烟台经济技术开发区医院 检验科，山东 烟台 264006；2.青岛市市立医院；3.青岛大学医学院 附属医院）

胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究

李笃军1，苏维奇2，朱元祺3

（1.烟台经济技术开发区医院 检验科，山东 烟台 264006；2.青岛市市立医院；3.青岛大学医学院 附属医院）

目的 了解胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的耐药情况。方法采用VITEK2compact微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验；头孢西丁Kirby-Bauer法和青霉素结合蛋白2a胶乳凝集（PBP2a）试验对分离出的金黄色葡萄球菌进行MRSA确认；酸测定法和D试验测定MRSA产β-内酰胺酶和红霉素诱导克林霉素耐药实验。结果头孢西丁纸片扩散法与PBP2a胶乳凝集法对MRSA检出率无统计学上差别（P＞O.05）；331株MRSA产β内酰胺酶率和克林霉素诱导试验阳性率分别为91.14%和16.62%；全部菌株对万古霉素、替加环素和利奈唑胺敏感，但对红霉素、克林霉素耐药率高达82.19%和77.34%。结论MRSA耐药机制复杂，呈现多重耐药，应根据药敏结果选用抗生素。

甲氧西林；金黄色葡萄球茵；头孢西丁；β-内酰胺酶

（ChinJLabDiagn，2012，16：0290）

近年来，由金黄色葡萄球菌所致医院感染的发病率呈上升趋势，其耐药性也逐年增加，尤其耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）已经成为医院感染的主要致病菌［1，2］，并且对大多数抗菌素耐药，给临床治疗带来极大困难。因此，我们对本地区金黄色葡萄球菌临床分离株进一步进行β-内酰胺酶和D试验，以了解其耐药特点，为合理应用抗生素和控制MRSA的传播奠定理论基础。

1 材料和方法

1.1 材料实验菌株：收集经血平板分离纯培养物，结合菌落形态，色素、溶血特性，血浆凝固酶（＋）和经VITEK2compact自动微生物分析仪确定为金黄色葡萄球菌且对甲氧西林耐药，共331株（其中烟台经济技术开发区医院56株，青岛大学医学院附属医院180株，青岛市市立医院95株）。金黄色葡萄球菌敏感株 ATCC29213（MIC），ATCC25923（K-B）和耐药株ATCC43300由青岛大学医学院微生物教研室馈赠。

实验器材：VITEK2compact微生物分析仪和细菌鉴定及药物敏感试验卡（GP／AST-GP），DENSIMAT浊度仪均为生物梅里埃公司产品；头孢西丁（FOX，30μg）、克林霉素（DA，2μg）、红霉素（ERY，15μg）药敏纸片及PBP2a胶乳凝集试剂盒均为0XOID公司生产；酚红、枸椽酸钠、pH试纸等由本室保存。

1.2 方法PBP2a胶乳凝集试验严格按照试剂盒说明书操作，以PBP2a胶乳凝集试验作为检测标准，以 ATCC 43300为阳性对照，ATCC29213（MIC）和ATCC25923（K-B）为阴性对照。β-内酰胺酶测定采用酸测定法，按有关文献方法操作。红霉素诱导克林霉素耐药的D实验和头孢西丁纸片扩散药敏试验（K-B）操作方法以及判定标准按文献说明进行，同时用ATCC25923做质量控制。统计比较用配对χ2检验。

2 结果

2.1 头孢西丁纸片扩散法与PBP2a胶乳凝集检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的比较三家医院分离的经VITEK2compact自动微生物分析仪鉴定为金黄色葡萄球菌且对甲氧西林耐药共331株。经PBP2a胶乳凝集实验确证为MRSA共331株，头孢西丁纸片扩散法则为328株。两法对MRSA检出率统计学上无显著性差异（P＞0.05），详见表1。

表1 头孢西丁纸片扩散与PBP2a胶乳凝集检测MRSA（n＝331）

2.2 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对临床常用抗生素耐药结果

分离的331株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌除了对万古霉素、利奈唑胺和替加环素全部敏感外，对喹诺酮类、大环内酯类和氨基糖苷药物呈现较高的耐药率，达50%以上，其中红霉素和克林霉素耐药率已经超过75%。详见表2。

表2 MRSA对临床常用抗生素耐药结果（n＝331）

2.3 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶及D试验结果

实验显示331株 MRSA产β-内酰胺酶率达91.14%，表明MRSA对β内酰胺抗生素耐药并非产β内酰胺酶单一作用所致，而是多种机制共同作用结果。D试验是检测克林霉素诱导型耐药简便易行的方法，本试验的阳性率为16.62%，见表3。

表3 MRSA产β-内酰胺酶及D试验结果

3 讨论

随着广谱抗菌药物的大量应用，金黄色葡萄球菌的感染及耐药菌株日益增多，已成为医院感染的重要病原菌之一。研究表明，MRSA的耐药分别是由质粒介导的获得性耐药和由耐药基因介导的固有耐药［3，4］。β-内酰胺类抗生素通过与细菌的青霉素结合蛋白（PBPs）结合，抑制细菌细胞壁的合成而发挥抗菌作用。MRSA能产生一种特殊的PBP，即PBP2a，表现对大多数β-内酰胺类抗生素亲和力低，且可替代高亲和力的正常PBPs催化肽聚糖交联，使细菌表现耐药。PBP2a由mecA基因编码，只存在于耐药菌株中。从理论上讲，菌株存在mecA将对全部的青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类及内酰胺类抗生素／酶抑制剂产生耐药性［5］。本实验331株MRSA产β-内酰胺酶率达91.14%，表明它对β-内酰胺抗生素耐药并非产β-内酰胺酶单一因素作用所致，而是存在多种机制的共同作用。

D试验是检测克林霉素诱导型耐药简便易行的方法。红霉素、克林霉素均耐药，菌株可能携带erm结构型基因；红霉素耐药，克林霉素敏感，D试验阳性，此菌株可能携带的erm诱导型基因；D试验阴性，菌株可能携带mrsA基因。本文实验诱导耐药率为16.62%，表明本地区菌株中存在erm诱导型基因。因此，如仪器药敏卡不带有克林霉素诱导实验，应补加D试验用于金葡常规药敏检测，并在报告中注明：“通过可诱导性克林霉素耐药试验，推测此菌株对克林霉素耐药，克林霉素可能对某些患者仍然有效”。

氟喹诺酮类药物对细菌作用的靶位酶是DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ。对于金葡菌，氟喹诺酮类药物主要靶位酶为DNA拓扑异构酶Ⅳ，该酶通过作用于DNA磷酸二酯键酪氨酸残基，打断DNA两条链，杀灭细菌。本实验331株MRSA对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星耐药率为61.93%，39.27%和26.58%，如中敏也算为耐药，则均超过了40%的耐药率，提示对感染者应慎重经验用药。

分离的331株MRSA除了对万古霉素、利奈唑胺和替加环素全部敏感外，对大环内酯类和氨基糖苷药物也呈现较高的耐药率，达50%以上，其中红霉素和克林霉素耐药率已经超过75%。按照卫生部办公厅2009年关于抗菌药物临床应用管理的通知中的规定：对主要目标菌耐药率超过50%的药物，应参照药敏实验结果选用；对主要目标菌耐药率超过75%的药物，应暂停该类抗菌药物的临床应用。

总之，本地区MRSA耐药机制复杂，呈现多重耐药特点，提示临床医生应根据药敏结果选用抗生素，以减少抗生素选择性压力。

［1］苏维奇，朱元祺，孔繁荣.青岛地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶检测及耐药性分析［J］.中华医院感染学杂志，2009，19（2）：205.

［2］赵金英，路 娟，罗文涛，等.2007-2009年神经外科耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌耐药性分析［J］.中国实验诊断学，2011，15（2）：298.

［3］张连芝，王 欣，周 密，等.医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染现状的分析［J］.中国实验诊断学，2011，14（6）：892.

［4］SW Olarte NM，Valderrama IA，Reyes KR，et al.Methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonization in a Colombian hospital intensive care unit：phenotypic and molecular characterization［J］.Biomedica，2010，30（3）：353.

［5］Yamada K，Yanagihara K，Hara Y，et al.Clinical features of bacteremia caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a tertiary hospital［J］.Tohoku J Exp Med，2011，224（1）：61.

Study on multi-drug resistance of clinical methicillin-resistant staphylococcus aureusin isolates in Jiaodong distrcit

LIDujun，SUWei-qi，ZHUYuan-qi.（Dep.ofClinicalLaboratory，theHospitalofEconomicTechnologicalDevelopment AreaofYantai，Yantai264006，China）

ObjectiveTo study the situation of methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）resistant to multi-antibiotics in the local area，Methods The identification and drug susceptibility test were performed by VITEK2 compact automatic microbial analysis system.The MRSA were verified by cafoxitin disk diffusion and penicillin binding protein 2alatex agglutination.The erythromycin inducible clindamycin resistanc was tested by D-test.ResultsThere are no significance（P＞0.05）between cafoxitin disk diffusion and penicillin binding protein 2alatex agglutination for verified MRSA.β-lactamase producing rate and the ratio of erythromycin inducible clindamycin resistance were 91.14%，16.62%，respectively.All S.aureus isolates were susceptible to vancomycin，tigecycline and linezolid，but the majority were resistant to erythromycin（82.19%）clindamycin（77.34%）.ConclusionMRSA isolates were resistant to multiple antibiotics.And there is an urgent needs on antibiotics be adopted according to antimicrobial susceptibility tests.

methicillin；staphylococcus aureus；cefoxitin；β-lactamase

R378.5＋1

A

1007－4287（2012）02－0290－03

山东省科技发展计划项目（2009GG10002057）

李笃军，男，副主任检验师，科主任，主要研究方向为医院感染病原菌耐药机制。

2011－01－19）