大管的化学成分研究

黄永中，张 偲，黄 升，罗雄明*，王建华*

1重庆大学生物工程学院，重庆400044;2中国科学院南海海洋研究所，广州510301

大管Micromelum falcatum(Lour.)Tan.为芸香科(Rutaceae)小芸木属植物，在我国主要分布于海南岛、广东西南部、广西合浦至东兴一带和云南东南部。在中国传统医学中主要用于治疗创伤感染、风湿、咳嗽、发热等。文献报道其主要化学成分为香豆素、生物碱和苯丙酸类衍生物等［1-4］。本实验对大管的化学成分进行了较为系统的研究，分离得到12个化合物，包括6个香豆素和6个芳香类化合物。其中化合物1为新的天然产物;除5和6外，其余化合物均首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

NMR谱用Bruker DRX-500MHz核磁共振波谱仪测定，TMS为内标;高效液相色谱仪为半制备型Waters 600(phenomenex OOG-4252-NO，250 mm×10 mm i.d.，5 μm);ESI-MS用岛津 API2000 LC/MS/ MS型液相色谱-质谱仪联用仪测定;凝胶Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品;柱层析用硅胶(200～300目)为青岛海洋化工厂产品。高效液相用试剂为色谱纯，其他所用试剂均为分析纯。

大管茎皮于2009年采集于海南省三亚市，材料由中国科学院南海海洋研究所罗雄明助理研究员鉴定为 Micromelun falcatum(Lour.)Tan.，样品标本(No.DAJIAN020)存放于中国科学院南海海洋研究所标本馆。

2 提取和分离

干燥的大管约10 kg，用95%的乙醇浸提3次，每次7 d。提取液减压浓缩，用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯部分140 g，首先采用硅胶(200～300目)层析柱，以石油醚-丙酮(9∶1→1∶2)进行梯度洗脱，共接收120个流分，经TLC检测，合并成A-J共10个粗组分，其中A组分先过凝胶Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)柱色谱，然后上硅胶柱(200～300目)，氯仿-丙酮(60∶1)洗脱，所得部分再用凝胶Sephadex LH-20(甲醇)进一步纯化，得化合物5(114.8 mg)和6(26.5 mg);B组分先过凝胶Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，然后上硅胶柱(200～300目)，氯仿-丙酮(10∶1～2∶1)梯度洗脱，所得部分再过凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，然后用HPLC(MeOH/H2O 45∶55)纯化，得到化合物1(12.3 mg)、4(12.9 mg)、10(8.8 mg)、11 (6.2 mg);D组分先过凝胶Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，然后上硅胶柱，氯仿-丙酮(3∶1～1∶1)梯度洗脱，所得部分用HPLC(MeOH/H2O 45∶55)纯化，得到化合物9(11.2 mg)。

正丁醇萃取物42.0 g溶于水中，过滤，得到水不溶部分10.0 g和水溶解部分30.0 g，后者过D101大孔吸附树脂，依次用水、20%、40%、60%、95%的乙醇洗脱，得五组馏分。经TLC检测，20%和40%乙醇洗脱得到的馏分斑点较相似，故将其合并进行分离纯化。水不溶部分10.0 g过硅胶(200～300目)柱分段，依次用石油醚-丙酮(6∶4)、氯仿-丙酮(20∶1)洗脱，所得部分再过凝胶 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1)进一步纯化，得到化合物3(36.3 mg)和12(12.0 mg);20%和40%部分的浸膏合并过硅胶(200～300目)柱分段，用氯仿-甲醇(8∶2)洗脱，所得部分过凝胶 Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，再通过HPLC(MeOH/H2O 50∶50)纯化，得到化合物2(7.2 mg)、7(11.7 mg)和8(9.7 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:黄色晶体，ESI-MS m/z:257［M+ Na］+，结合1H NMR谱和ESI-MS数据推断分子式为C12H10O5。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:9.83 (1H，s，5-CHO)，7.92(1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，6.83 (1H，s，H-8)，6.36(1H，d，J=9.5Hz，H-3)，3.82 (3H，s，6-OMe)，3.77(3H，s，7-OMe)。13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:193.2(5-CHO)，161.6(C-2)，148.4(C-6)，147.2(C-7)，143.9(C-10)，143.5(C-4)，121.6(C-9)，118.8(C-5)，113.7(C-3)，109.1 (C-8)，56.5(6-OMe)，56.2(7-OMe)。根据HMBC谱信号，从δH9.83(s，5-CHO)与δC118.8(C-5)、121.6(C-9)和148.4(C-6)相关，表明醛基在C-5上;从δH3.82(s，6-OMe)与δC148.4(C-6)相关，表明甲氧基在C-6上;从δH6.83(s，H-8)与143.9(C-10)147.2(C-7)和109.1(C-8)相关，表明氢信号在C-8上;从δH3.77(s，7-OMe)与δC147.2(C-7)相关，表明C-7上有甲氧基。以上波谱数据与文献对照基本一致［5］，故鉴定化合物1为5-formyl-6，7-dimethoxycoumarin。

化合物2:白色粉末，ESI-MS m/z:377［M+ Na］+，结合1H NMR和13C NMR谱数据推断分子式为 C16H18O9。UV(CH3OH):λmax(log ε)226.4 (1.70)，288.9(0.75)，337.5(1.00)nm;1H NMR (500 MHz，CD3OD)δ:7.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，7.21(1H，s，H-8)，7.19(1H，s，H-5)，6.32(1H，d，J =9.5 Hz，H-3)，5.08(1H，d，J=7.5 Hz，H-1')，3.94(1H，d，J=2.5 Hz，H-5')，3.92(3H，s，7-OMe)，3.72(1H，m，H-6')，3.55(3H，m，H-2'，3'，6')，3.43(1H，d，J=8.5 Hz，H-4');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ:163.6(C-2)，151.8(C-7)，150.7 (C-10)，148.3(C-4)，145.7(C-6)，114.6(C-3)，114.6(C-9)，110.8(C-5)，105.3(C-1')，102.1(C-8)，78.4(C-5')，77.9(C-3')，74.8(C-2')，71.3(C-4')，62.5(C-6')，57.1(7-OMe)。根据HMBC谱信号，从δH7.19(s，H-5)与δC110.8(C-5)、114.6(C-9)和145.7(C-6)相关，表明氢在C-5上;从δH5.08 (1H，d，J=7.5 Hz，H-1')与δC145.7(C-6)相关，表明葡萄糖分子连接在C-6上;从δH7.21(s，H-8)与δC151.8(C-7)，102.1(C-8)和150.7(C-10)相关，表明C-8上有氢;从δH3.92(s，7-OMe)与δC151.8 (C-7)相关，表明C-7上有甲基。以上波谱数据与文献对照基本一致［6］，故鉴定化合物2为isoscoploletin-β-D-glucoside。

化合物3:黄色晶体，ESI-MS m/z:267［M+ Na］+，分子式为 C14H12O4。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.80(1H，d，J=16.5 Hz，H-1')，7.65(2H，dd，J=3.0，9.5 Hz，H-4，H-5)，6.84(1H，s，H-8)，6.75(1H，d，J=16.5Hz，H-2')，6.30(1H，t，J=3.0，9.5Hz，H-3)，3.97(3H，s，7-OMe)，2.40(3H，s，H-4');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:198.6(C-3')，161.1(C-2)，160.5(C-7)，157.0(C-10)，143.1(C-4)，136.8(C-1')，128.4(C-2')，127.6(C-5)，121.1 (C-6)，114.1(C-3)，112.5(C-9)，99.6(C-8)，56.3 (7-OMe)，27.4(C-4')。根据HMBC谱信号，从δH2.40(s，H-4')与δC198.6(C-3')和128.4(C-2')相关，从δH7.80(1H，d，J=16.5 Hz，H-1')与δC127.6 (C-5)，121.1(C-6)，160.5(C-7)，198.6(C-3')和128.4(C-2')相关，表明丁烯支链在C-6上。以上波谱数据与文献对照基本一致［7］，故鉴定化合物3为6-(trans-1-buten-3-only)-7-methoxycoumarin。

化合物4:黄色晶体，ESI-MS m/z:215［M+ Na］+，结合1H NMR和13C NMR谱数据推断分子式为C10H8O4。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.86 (1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，7.11(1H，s，H-8)，6.78 (1H，s，H-5)，6.21(1H，d，J=9.0 Hz，H-3)，3.92 (3H，s，7-OMe)。13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ: 161.2(C-2)，151.8(C-7)，150.5(C-10)，148.7(C-4)，148.2(C-6)，114.5(C-3)，113.6(C-9)，110.2 (C-5)，102.5(C-8)，56.4(7-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［8］，故鉴定化合物4为异莨菪亭(6-羟基-7-甲氧基香豆素，isoscopoletin)。

化合物5:白色粉末，ESI-MS m/z:399［M+ Na］+，分子式为 C20H24O7。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.56(1H，d，J=9.5Hz，H-4)，7.35(1H，d，J=8.5Hz，H-5)，6.81(1H，d，J=9.0Hz，H-6)，6.16(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，6.08(1H，m，H-1')，5.58(1H，d，J=5.5 Hz，H-2')，5.26(1H，dd，J= 2.5，3.0 Hz，H-4')，5.20(1H，dd，J=1.5，3.5 Hz，H-4')，4.67(1H，dd，J=2.0 Hz，H-5')，4.56(1H，dd，J=1.5，2.0 Hz，H-5')，3.85(3H，s，7-OMe)，2.14(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'')，2.02(1H，m，H-3'')，0.86(6H，d，J=7.0 Hz，3''-CH3);13C NMR (125 MHz，CDCl3)δ:172.8(C-1'')，161.0(C-7)，160.4(C-2)，153.5(C-10)，147.0(C-3')，143.7(C-4)，129.2(C-5)，114.6(C-8)，113.1(C-3)，113.0 (C-9)，108.8(C-4')，108.0(C-6)，77.2(C-2')，76.7(C-1')，71.2(C-5')，56.1(C-7-OMe)，43.4(C-2'')，25.8(C-3'')，22.2(C-4'')，22.2(C-5'')。以上波谱数据与文献对照基本一致［9］，故鉴定化合物5为microfalcatin isovalerate。

化合物6:无色晶体，紫外灯下有蓝色荧光，ESIMS m/z:311［M+Na］+，分子式为 C15H12O6。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.94(1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，7.67(1H，s，H-5)，7.08(1H，s，H-6)，6.26 (1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，5.55(1H，d，J=6.5 Hz，H-1')，4.03(1H，d，J=6.5 Hz，H-2')，3.92(3H，s，7-OMe)，1.67(3H，s，H-5');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:172.3(C-4')，160.4(C-2)，159.9(C-7)，156.6(C-10)，142.9(C-4)，127.6(C-5)，120.2 (C-6)，114.2(C-3)，112.4(C-9)，99.8(C-8)，77.3(C-1')，63.5(C-2')，57.3(C-3')，56.5(7-OMe)，11.2(C-5')。以上波谱数据与文献对照基本一致［10-12］，故鉴定化合物6为小芸木宁micromelin。

化合物7：白色针晶，ESI-MS m/z:395［M+ Na］+，分子式为C17H24O9。UV(CH3OH):λmax(log ε)231.1(2.88)，272.3(2.00)，337.5(1.42) nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:6.77(2H，s，H-2，6)，6.56(1H，d，J=15.5Hz，H-7)，6.35(1H，m，H-8)，4.90(1H，s，H-1')，4.24(2H，dd，J=1.0，5.5Hz，H-9)，3.88(6H，s，3-OMe，5-OMe)，3.79 (1H，m，H-6')，3.68(1H，dd，J=5.0，12.0 Hz，H-6')，3.49(1H，m，H-2')，3.43(1H，m，H-3')，3.43 (1H，m，H-4')，3.23(1H，br m，H-5');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ:154.4(C-3，5)，135.9(C-4)，135.3 (C-1)，131.3(C-7)，130.1(C-8)，105.5(C-2，6)，105.4(C-1')，78.4(C-5')，77.9(C-3')，75.8(C-2')，71.4(C-4')，63.6(C-9)，62.6(C-6')，57.1(3-OMe，5-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［13］，故鉴定化合物7为丁香苷。

化合物 8：白色晶体，ESI-MS m/z:365［M+ Na］+，结合1H NMR和13C NMR谱数据推断分子式为 C16H22O8。UV(CH3OH):λmax(log ε)214.7 (1.45)，257.0(1.20)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.20(1H，d，J=14.0 Hz，H-5)，7.08 (1H，d，J=8.5 Hz，H-2)，6.96(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6)，6.56(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，6.30(1H，m，H-8)，4.90(1H，s，H-1')，4.23(2H，dd，J=1.5，6.0 Hz，H-9)，3.88(1H，m，H-6')，3.87(3H，s，3-OMe)，3.70(1H，m，H-6')，3.50(2H，m，H-2'，5')，3.43(2H，m，H-3'，4');13C NMR(125 MHz，CD3OD) δ:150.9(C-4)，147.7(C-3)，133.7(C-1)，131.3(C-7)，128.9(C-8)，120.8(C-6)，118.0(C-5)，111.4 (C-2)，102.8(C-1')，78.3(C-3')，77.9(C-5')，75.0 (C-2')，71.4(C-4')，63.7(C-9)，62.6(C-6')，56.8 (3-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［14］，故鉴定化合物8为coniferin。

化合物9：褐色针状晶体，ESI-MS m/z:337［M+ Na］+，分子式为C14H18O8。UV(CH3OH):λmax(log ε)230.0(2.60)，286.5(0.90)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.78(1H，t，J=1.0，7.5，8.0 Hz，H-7)，7.55(1H，t，J=7.0，7.5 Hz，H-6)，7.41(1H，d，J =8.5 Hz，H-4)，7.14(1H，t，J=7.5，15.0 Hz，H-5)，4.90(1H，d，J=7.5 Hz，H-1')，3.93(1H，m，H-6')，3.91(3H，s，1-OMe)，3.74(1H，m，H-6')，3.54(1H，m，H-2')，3.52(1H，m，H-3')，3.50(1H，m，H-4')，3.44(1H，m，H-5');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ: 168.6(C-1)，158.8(C-3)，135.2(C-5)，132.1(C-7)，123.7(C-6)，122.4(C-2)，119.1(C-4)，104.1 (C-1')，78.5(C-5')，77.6(C-3')，75.0(C-2')，71.3 (C-4')，62.6(C-6')，52.9(1-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［15］，故鉴定化合物9为methyl 2-O-β-D-glucopyranosylbenzoate。

化合物10：褐色油状物，ESI-MS m/z:217［M+ Na］+，结合1H NMR谱和ESI-MS数据推断分子式为 C10H10O4。UV(CH3OH):λmax(log ε)215.9 (0.85)，319.7(0.90)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.59(1H，d，J=15.5 Hz，H-1')，7.19 (1H，d，J=1.5Hz，H-3)，7.07(1H，dd，J=1.5，1.5 Hz，H-6)，6.82(1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，6.34(1H，d，J=16.0 Hz，H-2')，3.92(3H，s，5-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［16］，故鉴定化合物10为2-hydroxy-5-methoxy-trans-cinnamic acid。

化合物11：白色粉末，ESI-MS m/z:205［M+ Na］+，结合1H NMR谱和ESI-MS数据推断分子式为C9H10O4。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:9.82(1H，s，H-7)，7.15(2H，s，H-2，6)，6.09(1H，s，2-OH)，3.97(6H，s，3-OMe，5-OMe)。以上波谱数据与文献对照基本一致［17］，故鉴定化合物11为3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲醛。

化合物12：褐色晶体，ESI-MS m/z:151［M+ H］+，结合1H NMR和13C NMR谱数据推断分子式为C10H14O。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.15(1H，dd，J=1.5，1.5 Hz，H-6)，7.06(1H，ddd，J=6.5，1.5 Hz，H-5)，6.91(1H，t，J=8.0，15.5 Hz，H-4)，6.75(1H，d，J=8.0 Hz，H-3)，2.96(1H，m，H-1')，1.64(2H，m，H-2')，1.24(3H，d，J=7.0 Hz，H-4')，0.87(3H，t，J=7.5，15.0 Hz，H-3');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:153.0(C-2)，133.2(C-1)，127.1(C-4)，126.6(C-6)，120.9(C-5)，115.3(C-3)，33.9(C-1')，29.8(C-2')，20.5(C-4')，12.2(C-3')。以上波谱数据与文献对照基本一致［18］，故鉴定化合物12为邻仲丁基苯酚。

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