大麦虫虫草人工培育试验

2012-08-07徐正华沈金德沈娟丽

食药用菌 2012年4期

徐正华沈金德徐窕沈娟丽

(1.上海市农业科学院,上海 201403;2.桐乡市中泰虫草专业合作社,浙江桐乡 314500)

蛹虫草 (Cordyceps militaris(Fr.)Link)又名北冬虫夏草,为麦角菌目、麦角菌科真菌,是我国医药学宝库中一类珍稀药用菌,经医药科学工作者多年研究与实践证明,蛹虫草所含虫草素、虫草多糖、虫草酸、SOD酶等生理活性物质和营养成分的含量都高于或接近冬虫夏草,现已被国家卫生部批准为新资源食品。

大麦虫隶属鞘翅目,被誉为 “蛋白质宝库之首”,营养丰富。以大麦虫幼虫为寄主的蛹虫草子实体是真正的活体虫草,其外观与冬虫夏草极为相似,包括昆虫幼虫和生长于幼虫头部的1～2根、长度大于2 cm的活体虫草子实体。蛹虫草培养过程包括虫草菌侵染活体昆虫幼虫、菌丝在活体昆虫幼虫体内生长、幼虫僵化和头部长出虫草子实体等环节,所得虫草的营养成分与野生冬虫夏草基本一致。桐乡市中泰虫草专业合作社经过多年研究,成功获得人工大麦虫虫草。迄今,用昆虫幼虫来培养虫草是一个普遍性的难题。因为幼虫虫体杂菌多,难以控制,一般蛹虫草菌极难感染昆虫幼虫。为了探索蛹虫草菌感染昆虫幼虫的有效途径,我们通过大量大麦虫幼虫培育蛹虫草子实体试验,总结获得蛹虫草菌感染大麦虫幼虫的较好方法。

1 材料与配方

1.1 供试材料供试菌株为蛹虫草菌株,由上海市农业科学院虫草课题组提供。大麦虫幼虫由南通市周氏生物科技公司提供。

1.2 固体培养基配方 1000 mL培养基中,蔗糖15 g,土豆 200 g,磷酸二氢钾 2 g,维生素B10.01 g,硫酸镁1.5 g,蛋白胨8 g,琼脂20 g。土豆去皮后称重,切小条,烧开后煮30 min,过滤。1000 mL无菌水与以上材料混合后烧开分装三角瓶,高压灭菌30 min,倒入平皿。

1.3 液体培养基配方 1000 mL培养基中,蔗糖30 g,土豆200 g,磷酸二氢钾3 g,维生素B10.01 g,硫酸镁1.5 g,蛋白胨10 g。土豆去皮后称重,切小条,烧开后煮30 min,过滤。1000 mL无菌水与以上材料混合后烧开分装三角瓶,高压灭菌30 min后备用。

1.4 大麦虫幼虫饲料配方 80%麦麸,15%玉米粉,5%虫草菌液和复合维生素B。其中每千克虫草菌液当中加入10片复合维生素B。

2 试验方法

2.1 菌种分离分别取新鲜蛹虫草菌株、子座部分及子囊孢子进行反复分离。在培养皿上得到一级母种虫草菌。

2.2 母种培养将母种接种到液体培养基中,培养成菌悬液。在恒温床上培养 4～5天,温度20 ℃,转速130 r/min。

2.3 单一喂养法培养虫草子实体试验当大麦虫幼虫长至2 cm长时,将 “1.4”节所述大麦虫幼虫饲料配方与5%虫草菌液混合后开始喂养,试验处理分为3组,每组30条大麦幼虫。喂养15天后,保持温度在20～30℃,空气相对湿度为60%～70%,继续饲养至幼虫呈呆滞状态;然后放入经过消毒的培养瓶中,培养温度为18～23℃,空气相对湿度80%～90%,光照强度150～200 lx,每天光照12 h。培养30～40天,子实体长度达3～5 cm,幼虫僵化率 (即虫草菌的感染率)为30%,子实体生长率为15%。各处理在相同管理条件下培养、观察,计算平均感染率与出草率。

2.4 喂养结合喷淋法培育虫草子实体试验喂养阶段的时间和方法与单一喂养法相同。喂养大麦虫幼虫15天后,将虫草菌液喷淋于大麦虫幼虫身体上,继续饲养至幼虫呈呆滞状态后将其放入经过消毒的培养瓶中,出草管理同单一喂养法。采用喂养结合喷淋法培养,幼虫的僵化率达85%,子实体生长率为75%。各处理在相同管理条件下培养、观察,计算平均感染率与出草率。

3 结果与分析

3.1 单一喂养与结合喷淋喂养所培育的虫草子实体的生长情况从 “2.3”和 “2.4”节不同虫体培养方法的试验结果可知,单一喂养的大麦虫幼虫僵化率 (菌体感染率)较低,仅为30%,子实体生长率低至15%;而采用喂养与喷菌液相结合的方法,幼虫僵化率为85%,子实体生长率达 75%,子实体长,感染率高,所得虫草外观与野生冬虫夏草相同。此结果表明,喂养与喷菌液相结合培育大麦虫虫草子实体方法的效果远较单一喂养法好。

3.2 大麦虫幼虫雌雄小鼠急性经口毒性试验结果将15000 mg/kg大麦虫幼虫样品剂量分别注射到10只雌性和雄性两组小鼠体内,试验期间,各组小鼠活动均正常,毛色光泽度好,未见任何中毒体征和死亡现象出现;到期处死小鼠,解剖小鼠躯体,肉眼观察各脏器,未见异常。

样品对雌雄小鼠急性经口毒试验的最大耐受剂量 (MTD)均大于15000 mg/kg,属无毒级。以上检测由上海市疾病预防控制中心进行,检定结果说明大麦虫的食用安全性高、无毒。