老年胃癌患者区域转移淋巴结中COX-2与多药耐药因子相关性分析

安 波 檀碧波 李 勇 范立侨 赵 群 张志栋 赵雪峰 贾 楠 王 冬

(河北医科大学第四医院，河北 石家庄 050011)

目前研究证实环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)已成为胃癌生物治疗的重要靶目标，逆转COX-2表达可有效逆转肿瘤耐药性、提高化疗药物效果〔1〕，说明COX-2与胃癌细胞的多药耐药性(Multidrug resistance，MDR)关系密切。前期研究已证实，老年人消化道肿瘤有其特征〔2〕，应根据其特点进行治疗;其他前期研究也发现肿瘤进展过程中淋巴结转移灶的COX-2和MDR因子存在与原发灶不同的异质性表达〔3，4〕，而关于COX-2在老年胃癌患者转移淋巴结中表达特征及其与MDR因子的关系尚未见报道。因此，本研究检测了老年胃癌患者原发灶、淋巴结转移灶COX-2、MDR因子中P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、拓扑异构酶(TopoⅡα)的表达，并对其关系进行了比较。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择2007年10月至2009年9月在河北医科大学第四医院外科住院手术并经病理证实的老年胃癌患者33例(≥60岁)，其中男 22例，女 11例，年龄 60～80〔平均(65.2±4.5)〕岁。取同期住院手术并经病理证实的低龄消化道肿瘤患者32例(＜60岁)作为对照组。所有病例术前均未接受放化疗。每例肿瘤组织标本均经中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片，经苏木素-伊红(H-E)染色病理诊断。

1.2 方法 免疫组化染色测定 COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα的表达。鼠抗人COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα单克隆抗体及免疫组化试剂盒均购自北京中杉生物技术公司(美国ZYMED公司产品)，采用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(SP法)对肿瘤进行上述指标免疫组化染色，染色步骤严格按试剂盒说明书进行操作。结果判断由两位病理医师双盲法对切片进行观察，每张切片随机取5个(×400)高倍视野，每视野计数100个细胞。COX-2、P-gp、GST-π、TopoⅡα 以细胞膜及(或)胞质呈棕黄色着染为染色阳性。按肿瘤细胞着色强度和阳性细胞率分别计分。着色强度计分:无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。肿瘤细胞阳性细胞率计分标准:阳性细胞≤5%为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，≥76%为4分;两种计分标准所得分值的乘积为0或1表示阴性(－)，2～3为弱阳性(+)，4～7阳性()，≥8强阳性()。

1.3 统计学方法 应用SAS8.0统计软件，等级资料使用Wilcoxon配对秩和检验、双变量相关分析并计算Spearman等级相关系数。

2 结果

2.1 老年胃癌患者原发灶、转移淋巴结COX-2和MDR因子的表达情况 检测的4种蛋白质中，P-gp在淋巴结转移灶的表达强于原发灶(S=88，P＜0.01)，而TopoⅡα在转移灶中表达则明显降低(S=－65，P＜0.05);COX-2、GST-π在原发灶和转移灶中表达强度无明显差异(均P＞0.05)。TopoⅡα表达在原发灶、转移灶间存在正相关关系(r=0.4993，P＜0.01);其他三种蛋白在老年患者两种组织中的表达则未见相关性(均P＞0.05)。见表1。

2.2 COX-2与三种MDR因子表达的关系 老年患者原发灶组织中COX-2与TopoⅡα呈负相关(r=－0.5889，P＜0.01)，P-gp与TopoⅡα呈正相关(r=0.3820，P＜0.05);其他因子之间未发现相关关系(均P＞0.05)。转移灶各因子表达未发现相关关系(均P＞0.05)。

2.3 老年胃癌患者与对照组COX-2、MDR因子在原发灶及淋巴结转移灶中表达的比较 原发灶中，老年组COX-2、P-gp和GST-π表达高于对照组(均P＜0.05);转移灶中老年组COX-2、P-gp表达强于对照组(均P＜0.05)。其他因子表达比较未见明显差异(均P＞0.05)。见表2。

表2 老年胃癌患者与对照组COX-2、MDR因子的表达情况(n)

3 讨论

COX-2是一种诱导酶，在胃癌组织中表达增高，与肿瘤的侵袭、进展、转移关系密切。研究发现，COX-2与MDR1/P-gp、TopoⅡα等MDR相关因子关系密切，可以调节其表达〔5，6〕。进展期胃癌淋巴结转移率达60%～80%，已成为影响预后的独立因素，而肿瘤切除后复发的根源是残留和/或转移灶〔7〕，因此明确胃癌淋巴结转移灶COX-2表达与MDR因子的关系较原发灶研究意义更大。与低龄患者相比，老年胃癌患者具有分化程度高、凋亡率较高、预后较好等特征〔8〕。而迄今关于老年胃癌患者淋巴结转移灶COX-2和MDR因子表达特征及相互关系的研究尚未见报道。本结果显示，老年患者COX-2在原发灶、转移灶间均有较高的阳性表达率，提示COX-2可作为老年胃癌生物治疗的靶目标;结果同时显示COX-2表达强度在原发灶和转移灶中虽无明显差异，但并无相关性，提示老年胃癌细胞在转移过程中，COX-2已发生了异质性变化。对老年患者MDR因子表达的分析也得出类似结论。在对COX-2与各种MDR因子的关系分析中发现，原发灶、转移灶中COX-2表达均与TopoⅡα呈负相关关系，但与P-gp无明显相关性，与其他报道不同〔5，9〕。说明老年胃癌COX-2与各MDR因子的调控更为复杂，这种调控是多因素、网络式调节共同作用的结果，故各种因子表现出的相关性在肿瘤转移过程中随大分子异质性变化而发生改变。

P-gp、GST-π、TopoⅡα被视为经典MDR相关因子。由P-gp介导的耐药途径通过药泵作用将包括多种药物外排而产生MDR〔10〕;GST-π可通过酶结合方式(解毒作用)将多种化疗药物从体内排出而导致MDR〔11〕;TopoⅡα是肿瘤化疗的重要靶点，其表达上调可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性〔12〕。本研究结果显示这些MDR因子在老年胃癌转移过程中出现了异质性变化，这种变化使肿瘤的MDR调控更为复杂，导致肿瘤的生物治疗也因此难以实现。在对老年胃癌患者进行研究时，应充分考虑这种异质性变化的影响，了解转移灶中COX-2、MDR因子的表达特征及变化规律，从而为逆转胃癌细胞的MDR、抑制肿瘤恶性生物学行为奠定基础。

1 Liu H，Huang P，Xu X，et al.Anticancer effect of celecoxib via COX-2 dependent and independent mechanisms in human gastric cancers cells〔J〕.Dig Dis Sci，2009;54(7):1418-24.

2 檀碧波，韩 杰，吕炳蓉，等.p53、P-gp、GST-π 和TopoⅡα 在老年消化道肿瘤中的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(7):850-2.

3 檀碧波，孙丽君，耿 玮，等.胃癌淋巴结转移灶COX-2和Bcl-2表达及其与体外化疗敏感性的关系〔J〕.中华普通外科杂志，2009;24(11):930-3.

4 韩 杰，檀碧波，王安峰，等.消化道肿瘤淋巴结转移灶P-gp、GST-π和凋亡抑制蛋白表达的特点〔J〕.中华外科杂志，2009;47(2):106-8.

5 Patel VA，Dunn MJ，Sorokin A.Regulation of MDR1(P-glycoprotein)by cyclooxygenase-2〔J〕.J Biol Chem，2002;277(41):38915-20.

6 Segawa E，Sakurai K，Kishimoto H，et al.Expression of cyclooxygenase-2 and DNA topoisomeraseⅡalpha in precancerous and cancerous lesions of the oral mucosa〔J〕.Oral Oncol，2008;44(7):664-71.

7 Chen XL，Su BS，Sun RQ，et al.Relationship between expression and distribution of cyclooxygenase-2 and bcl-2 in human gastric adenocarcinoma〔J〕.World J Gastroenterol，2005;11(8):1228-31.

8 Zheng H，Takahashi H，Murai Y，et al.Pathobiological characteristics of intestinal and diffuse-type gastric carcinoma in Japan:an immunostaining study on the tissue microarray〔J〕.J Clin Pathol，2007;60(3):273-7.

9 檀碧波，李 勇，韩 杰，等.胃、大肠癌COX-2、多药耐药相关因子表达与体外化疗药敏性的关系及意义〔J〕.四川大学学报医学版，2010;41(1):128-31.

10 Hao Z，Li X，Qiao T，et al.CIAPIN1 confers multidrug resistance by upregulating the expression of MDR-1 and MRP-1 in gastric cancer cells〔J〕.Cancer Biol Ther，2006;5(3):261-6.

11 Wang LS，Chow KC，Wu YC，et al.Inverse expression of dihydrodiol dehydrogenase and glutathione-S-transferase in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Int J Cancer，2004;111(2):246-51.

12 Salvatore C，Camarda G，Maggi CA，et al.NF-kappaB activation contributes to anthracycline resistance pathway in human ovarian carcinoma cell line A2780〔J〕.Int J Oncol，2005;27(3):799-806.