人绒毛膜促性腺激素对实验性大鼠乳腺癌化学预防作用的分析

刘 艺，王 菡，陆 迪

(牡丹江医学院药学院中心实验室，黑龙江牡丹江157000)

通过人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadochopin，hCG)仿照妊娠可使乳腺组织结构更充分分化，从而预防乳腺癌的发生。类似于他莫昔芬(tamoxifen，TAM)的抗雌激素药已确定为能够有效预防乳腺癌［1］。本实验对于各个时段采用hCG来预防乳腺癌进行讨论研究，将hCG和TAM所产生的预防作用进行对比分析。

1 材料与方法

1.1 对象 选取未经产的SD雌性大鼠50只，在动物实验室饲养，国标鼠料饮食，湿度40%～50%，温度(22±2)℃。50只大鼠随机分为hCG早干预组，hCG晚干预组，TAM组，暴露组，空白对照组各10只。

1.2 方法 hCG早干预组:自50 d龄开始，向腹腔内每天注射 hCG 100 U，共注射 21 d，在 134、141、217、262日龄向腹腔中注射甲基亚硝脲50 mg/kg的致癌剂。hCG晚干预组:从92日龄开始，每天向腹腔中注射 100 U hCG，共注射 21 d，在 134、141、217、262日龄开始向腹腔中注射50 mg/kg致癌剂甲基亚硝脲。TAM组:自92 d开始，每天在大鼠皮下注射1 mg/kg的 TAM，共注射 21 d，在 134、141、217、262 日龄分别向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亚硝脲致癌剂。暴露组:于134、141、217、262日龄向腹腔中注射50 mg/kg的甲基亚硝脲致癌剂。空白对照组:不进行药物治疗。于276日龄将5组大鼠全部处死。

1.3 病理学检查 将空白对照组所处死的大鼠，从颈部到腹股沟进行备皮以后，取下全块颈部到腹股沟中皮肤的皮下乳腺组织，用甲醛(10%)对其进行固定3 h后，将梯度乙醇进行脱水处理，二甲苯透明，包埋，浸蜡，切成厚度大致为 4 μm片状，然后进行HE染色，最后将其进行封片。将其于100倍的显微镜下进行观察，将5组中全部大鼠乳腺通过随机选择的方法取3个视野，与常用的标准进行对照，对成熟小叶(lobule，Lob)、泡状芽苞(alvedar buds，AB)、终末导管(terminalduct，TD)以及终末芽苞(terminal end buds，TEB)的结构数目进行分别计量。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计处理，大鼠成癌情况比较采用Fisher确切概率法，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 5组大鼠成癌情况比较 各组均有乳腺肿瘤发生，肉眼可见的肿瘤最大直径约1.8 cm，最小直径约0.5 cm。hCG早干预组与暴露组的成癌率比较差异有统计学意义(P＜0.05)，与TAM组的成癌率相比差异无统计学意义(P＞0.05)。hCG晚干预组与暴露组的成癌率相比差异无统计学意义(P＞0.05)(表1)。

表1 5组大鼠成癌情况比较

2.2 5组大鼠乳腺的 TEB、TD、AB、Lob 构成比较5组大鼠乳腺TEB、TD、AB和Lob构成比较差异有统计学意义(χ2=6.04，P ＜0.05)。hCG 早、晚干预组与暴露组比较差异有统计学意义(χ2=4.65、5.29，P ＜0.05)，Lob、AB 比例高于暴露组，而 TD、TEB 比例低于暴露组(表2)。

表2 5组大鼠乳腺的TEB、TD、AB、Lob构成情况

3 讨论

在临床、流行病学和通过实验而取得的数据都表明，人类患乳腺癌离不开机体中内分泌的环境以及生育情况。与未经产的女性相比，经产女性发生乳腺癌的概率较小，而且早期的妊娠与晚期的妊娠女性相比发生的概率也较小，妊娠的次数与发生乳腺癌概率呈反比［2］。这种早期足月妊娠保护乳腺的效果不仅在人类中有所体现，而且实验性的动物模型同样具有该特征。

本组资料显示，hCG早干预组与暴露组的成癌率相比差异有统计学意义(P＜0.05)，说明较早进行hCG干预是可以预防大鼠乳腺癌的发生，并且hCG早干预组与TAM组的成癌率相比差异无统计学意义(P＞0.05)，说明hCG的预防作用与TAM是相当的。hCG晚干预组与暴露组的成癌率相比差异无统计学意义(P＞0.05)。从数据上可以看出，hCG晚干预组相对于暴露组，仍然有降低大鼠乳腺癌发生的趋势。

本研究对大鼠的乳腺组织的类型进行了深层次的观察，hCG的早、晚干预组与暴露组大鼠的乳腺组织中的TD、TEB、AB以及Lob结构比例相比，差异有统计学意义，大鼠患乳腺癌的概率与乳腺组织中期分化成熟的程度密切相关。

hCG的早、晚干预组中，大鼠的乳腺组织在分化上已经完全成熟，其与暴露组相比，在AB以及 Lob的结构上比例更大，而TEB以及TD的比例更小，Lob结构的比例显著增加，TD结构的比例显著降低，这说明hCG的早、晚干预组中，乳腺的发育已经十分成熟，造成其对致癌剂相对不敏感，这样hCG的早、晚干预组与暴露组比较患乳腺癌的概率更低。

TAM组大鼠的乳腺的结构比率近似于暴露组，其TD结构都十分高，而Lob结构都十分低，TAM乳腺癌出现的比例与暴露组相比明显较低，其可能原因是hCG和TAM对乳腺癌进行预防的机制不同，在TAM下乳腺结构并未达到成熟阶段，竞争性将雌激素的受体进行控制进而将患乳腺癌的概率降低。空白对照组中大鼠乳腺并没有完全发育，TD结构的比例仍然很高，Lob的结构比例较少，如致癌剂对其进行攻击，癌变的概率仍然很大。

hCG将乳腺最后变为成熟的手段，至今还没有确定。常规乳腺癌细胞、乳腺组织和卵巢中均有hCG受体，而乳腺作用中hCG直接作用或hCG作用于卵巢后提高了雌、孕激素的指标，在孕激素以及雌激素作用下将乳腺变成熟的机制至今还不明确［3］。有进行体外细胞的实验表明，hCG对乳腺的癌细胞将产生直接的作用，将增殖的概率降低。另外，关于动物的实验表明，大鼠进行短时间、低剂量的使用孕、雌激素将对患乳腺癌的可能性起到直接降低的作用，而大剂量、长时间内的使用孕、雌激素可使大鼠患乳腺癌概率增高。

hCG结合hCG受体共同作用下可使乳腺的癌细胞凋亡。另外，有文献报道，妊娠或者hCG就是分支乳腺组织，并在发育上朝着小叶的方向，而单纯的孕激素与雌激素就是增殖乳腺末端结构TEB，而且孕激素+雌激素与hCG对大鼠分别作用后其乳腺组织中具有不同的基因表型［4］。这些实验都证实了hCG将直接保护乳腺组织，并非全部靠孕、雌激素，且在对乳腺癌进行预防时，hCG作为其预防药物为最佳选择。

虽然大鼠乳腺与人类乳腺在发展上不能完全进行统一，但是应视大鼠的各个发育阶段中成癌状况对人类乳腺进行进一步分析，很多小型临床试验在hCG应用方面进行探索与研究。hCG的使用在预防乳腺癌方面应该是一种值得推广的措施，与传统预防的措施相比，优势更加明显。hCG是由自体产生的，具有微小的不良反应，在分化乳腺法上所用的时间更短，可以对腺癌的发生进行有效地预防［5］。hCG对乳腺癌的预防要有合适人群，其用量以及作用时间的确定对开展乳腺癌的一级预防有重要作用。

［1］陈中扬，李文萍，王颀.甲基亚硝脲快速诱导大鼠乳腺原位癌模型的实验研究［J］.中华肿瘤防治杂志，2007，14(9):657-659.

［2］Lopez D，Sekharam M，Coppola D，et al.Purified human chorionic gonadotropin induces apoptosis in breast cancer［J］.Mol Cancer T-her，2008，7(9):2837-2844.

［3］Pourhoseingholi MA，Mehrabi Y，Alavi-Majd H，et al.Association between risk of breast cancer and fertility factors—a latentvariable approach［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2008，9(2):309-312.

［4］Jacobson HI，Lemanski N，Agarwal A，et al.A proposed unified mechanism for the reduction of human breast cancer risk bythe hormones of pregnancy［J］.Cancer Prev Res，2010，3(2):212-220.

［5］Kocdor H，Kocdor MA，Russo J，et al.Human chorionic gonadotropin(hCG)prevents the transformed phenotypes induced by17 betaestradiol in human breast epithelial cells［J］.Cell BiolInt，2009，33(11):1135-1143.