IL-17、IL-22与乙型病毒性肝病的相关性分析

刘家秀，许国莹，徐 彬，王莉娟，潘继承

(1淮阴卫生高等职业技术学校，江苏淮安 223300;2淮安市传染病医院;3江苏省省级机关医院)

长期以来，在乙型病毒性肝病(HB)的发病机制中，免疫应答及细胞因子的作用一直受到国内、外学者的广泛关注。Th17细胞(Thelp cell 17)是一类新发现的效应性CD+4Th细胞亚群，独立于Th1和Th2［1］。其发现弥补了传统的Th1/Th2模式在解释疾病免疫病理机制中的局限性，成为近年来研究的热点。研究发现，Th17细胞分泌的 IL-17、IL-17F、IL-21、IL-6、IL-22 和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子参与了肝脏损伤及再生过程，在脂肪肝、自身免疫性肝病及肝脏肿瘤中发挥重要作用［2］。2010年1月～2011年6月，我们检测了HB患者外周血IL-17、IL-22变化，并分析其与肝纤维化指标的关系，旨在为HB的诊疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 84例HB患者为2010年1月～2011年6月淮安市传染病防治院门诊和住院患者，男52例，女32例;年龄26～78岁，平均42.5岁。急性肝炎18例(急性肝炎组)，慢性肝炎26例(慢性肝炎组)，肝硬化24例(肝硬化组)，肝癌16例(肝癌组)。所有病例均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会制定的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准［3］，并排除合并感染其他病毒性肝炎，排除心、脑、肾、肺等器官疾病及高血压、糖尿病等。健康组为40例健康体检者，其中男28例，女12例，年龄26～67，平均39.3岁。各组性别及年龄有可比性。

1.2 相关指标检测 各组均取空腹静脉分离血清，于－80℃保存，行以下指标检测。

1.2.1 IL-17及 IL-22水平 IL-17检测采用单克隆抗体夹心ELISA法，由全自动酶免分析仪测定结果，试剂盒由Sigma公司提供，严格按试剂说明书操作。血清IL-22检测采用IL-22抗体(Santa Cruz，美国)包被于反应板微孔，于4℃过夜;用含10 g/dL BSA的封闭液37℃封闭2 h，于每孔中加入待检样本并于37℃孵育2 h，洗涤后加入HRP标记的羊抗人IgG(Zymed Laboratories，美国)于37℃孵育1 h，加人TMB显色液，采用酶联仪450 nm波长进行比色分析，读取A值，并与标准曲线比较进而获取IL-22血清表达水平。

1.2.2 透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)和Ⅳ型胶原蛋白(ⅣC)水平采用ELISA法测定，试剂盒由中科院上海细胞生物研究所提供。

1.2.3 总胆红素(TBIL)和 γ-谷氨酰转移酶((γ-GT)水平 采用常规自动生化分析仪测定。

1.2.4 相关性分析 对IL-17及IL-22水平与ⅣC、LN和HA及肝癌组IL-22水平与TBIL、γ-GT水平的相关性进行分析。

1.3 统计学方法 采用SPSS14.0软件进行统计学处理。计量资料采用±s表示，均数间比较采用方差分析和t检验，相关性分析采用Spear-man线性相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-17及IL-22水平 见表1。

表1 各组IL-17、IL-22水平比较(±s)

表1 各组IL-17、IL-22水平比较(±s)

注:与健康组比较，▲P ＜0.01;与急性肝炎组比较，#P ＜0.05;与慢性肝炎组比较，*P ＜0.05;与肝硬化组比较，△P ＜0.05

组别 n IL-17(ng/mL) IL-22(pg/mL)急性肝炎组 18 123.32±32.62▲△ 450.68±43.26▲△慢性肝炎组 26 106.63±35.21▲△ 530.14±24.23▲△肝硬化组 24 401.41 ±25.27▲#* 683.42 ±76.28▲#*肝癌组 16 1462.58 ±10.02▲#＊△ 824.53 ±64.20▲#＊△健康组 40 35.24±11.25#＊△ 384.32±86.83#＊△

2.2 ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平 见表2。

2.3 相关性分析 IL-17、IL-22分别与HA、LN和ⅣC水平呈正相关，见表3;肝癌组 IL-22水平与TBIL、γ-GT 水平均呈正相关，r分别 =0.384、0.358，P 均 ＜0.05。

表2 各组ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平比较(±s)

表2 各组ⅣC、LN、HA及TBIL、γ-GT水平比较(±s)

注:与健康组比较，▲P ＜0.05，与急性肝炎组比较，#P ＜0.05，与慢性肝炎组比较，*P ＜0.05，与肝硬化组比较，△P ＜0.05

组别 n ⅣC(ng/mL) LN(ng/mL) HA(ng/mL) TBIL(μmol/L) γ-GT(IU/L)急性肝炎组 18 106.21±21.70＊△ 98.46±10.12＊△ 98.54±31.25＊△ 112.31±15.34＊△ 76.14±21.02＊△慢性肝炎组 26 265.56 ±32.21▲#△ 122.24 ±12.10#△ 148.42 ±22.10▲#△ 68.64 ±22.13# 246.54 ±20.32#肝硬化组 24 450.68 ±52.27▲#* 348.20 ±76.28▲#* 368.39 ±13.27▲#* 70.28 ±31.22# 269.36 ±41.16#肝癌组 16 786.91 ±16.28▲#＊△ 753.45 ±20.15▲#＊△ 743.19 ±58.03▲#＊△ 116.46 ±32.24▲＊△ 501.26 ±42.38▲#＊△健康组 40 94.42 ±56.21 92.43 ±13.22 85.12 ±12.24 14.26 ±6.31 34.26 ±12.23

表3 IL-17、IL-22与ⅣC、LN和HA的相关性

3 讨论

Th17细胞是2005年新发现的第三种效应性Th细胞亚群［4］。Thl7细胞的提出是对Th1和Th2细胞介导的组织损伤假说的第一次修订，具有里程碑意义［5］。在肝脏相关疾病中，Th17细胞分泌的IL-17、IL-17F、IL-21、IL-6、IL-22 等细胞因子通路与肝脏损伤的密切关系得到越来越多的证据支持。

IL-17是Th17细胞分泌的重要细胞因子之一。具有促炎症作用，可诱导促炎细胞因子(如IL-6、TNF)、趋化因子和基质金属蛋白酶表达，引起组织细胞浸润和破坏;亦参与中性粒细胞的增殖、成熟和趋化，对T细胞的活化起协同刺激作用。IL-22是Th17细胞分泌的另一重要细胞因子，属IL-10家族成员。在Th17细胞中，IL-22与IL-17一起分泌，有研究显示，IL-22与IL-17共同表达可以认为是自身攻击性T细胞的标志，两者协同作用促进炎性发生造成组织损伤［6］;但另有研究显示，IL-22在急性肝损伤中起保护作用［7］。Th17细胞正是通过其分泌的多种细胞因子参与宿主防御、感染、肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥等病理过程。

本研究结果显示，随着肝病的进展、肝损害严重程度加重，外周血IL-17及IL-22水平依次增高，以肝癌患者表达水平最高。肝纤维化或肝硬化是由于胶原和其他细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡、在肝内过量沉积所致。近年来细胞外基质HA、LN和ⅣC用于临床纤维化的辅助诊断。有文献报道，肝组织内Thl7细胞主要集中于汇管区及纤维化区［8］，本研究结果显示，随肝病进展，HA、LN 和ⅣC水平逐渐升高，且IL-17、IL-22分别与HA、LN和ⅣC水平呈正相关;IL-22与TBIL、γ-GT均呈正相关。不仅提示Thl7细胞分泌的IL-17、IL-22在病毒感染后引起的免疫反应与组织损伤有关，也进一步提示IL-17、IL-22可能参与了肝纤维化的发生，尤其是IL-22在肝癌的形成中起重要作用。有报道，急性肝组织损伤时IL-22有限制肝细胞损伤的作用，此可能与IL-22可保护肝细胞免遭活化T细胞的破坏作用有关，具体机制有待进一步研究。

目前，临床上对各种肝病，尤其是肝纤维化、肝癌的诊断主要根据影像及肝组织活检。虽然已开展血清学相关免疫指标及ECM检查，但尚未能建立全面反映肝病全貌的血清学指标。本研究结果提示，检测IL-17、IL-22结合相关指标对慢性肝炎、肝纤维化和肝癌流行病学调查、临床诊断、病情分析及预后判断均具有重要价值;对IL-17、IL-22等细胞因子通路与肝脏损伤机理的深入研究，将为各类肝病的免疫干预治疗提供新的靶点。

［1］Park H，Li I，Yang Xo，et al.A distinct lineage of CD4 T cells regulates tissue inflammation by producing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6(11):1133-1141.

［2］Ge J，Wang K，Meng QH，et al.Implication of Th17 and Th1 cells in patients with chronic active hepatitis B［J］.J Clin Immunol，2010，30(1):60-67.

［3］病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，2001，19(1):56-62.

［4］Harrington LE，Hatton RD，Mangan PR，et al.Interleukin 17 producingeffector T cells develop via a lineage distinct from the The helper type1 and 2 lineage［J］.Nat Immunol，2005，6(11):1123-1132

［5］Bettelli E，Oukka M，Kuchroo VK.Th17 cells in the circle of immunity and autoimmunity［J］.Nat Immunol，2007，8(4):345-350.

［6］Zheng Y，Danilenko DM，Valdez P，et al.Interleukin-22，a T(H)17 cytokine，mediates IL-23-induced dermal inflammation and acanthosis［J］.Nature，2007，445(7128):648-651.

［7］Zenewicz LA，Yancopoulos GD，Valenzuela DM，et al.Interleukin-22 but not interleukin-17 provides protection to hepatocytes during acute liver inflammation［J］.Immunity，2007，27(4):647-659.

［8］张耿林，高志良.Th17细胞在肝脏疾病的研究进展［J］.中国病毒病杂志，2011，1(3):227-230.