氧化还原分光光度法测定针剂中头孢他啶含量

杜申道 孙双姣 黄增妍 邝思群

邵阳医学高等专科学校，湖南 邵阳 422000

头孢他啶（CAZ）是第三代头孢菌素，与第一、二代头孢菌素相比，其抗菌谱进一步扩大，对β-内酰胺酶高度稳定。对革兰阴性菌的作用较强，对大肠埃希菌、肠杆菌属、克雷伯杆菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、流感嗜血杆菌脑膜炎球菌等有良好的抗菌效果。高效液相色谱法[1-3]是现已报道的测定CAZ含量的主要方法，其次有流动注射化学发光法[4]、毛细管区带电泳法[5]、单扫描示波极谱法[6]、荧光光度法[7-8]、紫外可见分光光度法[9-11]，但这些方法往往存在仪器昂贵、操作繁琐、时问长等不足。本实验利用KMnO4氧化CAZ而褪色，建立了高锰酸钾褪色分光光度法测定针剂中CAZ含量的新方法。该方法采用普通的可见分光光度计，简单的常规试剂，操作简单方便，精密度好，准确度高，在针剂CAZ的定量测定中，效果较好。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

日本岛津UV-2450紫外可见分光光度计。CAZ标准品购自于中国药品生物制品检定所，储备液为500 mg/L；浓H2SO4购自邵阳市化学试剂厂，工作液为6 mol/L；KMnO4购自国药集团化学试剂公司，储备液为0.02 mol/L，工作液为0.001 0 mol/L，实验所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

1.2 实验方法

在比色管中分别加入1.20 mL H2SO4工作液，1.20 L KMnO4工作液、适量CAZ标准液后用二次蒸馏水定容至5 mL，摇匀。反应温度为室温，反应时间为15 min。取反应后适量溶液至1 cm比色皿中，空白试剂为二次蒸馏水，于分光光度计上波长扫描得吸收光谱，吸光度（A）测定波长为525 nm。

2 结果

2.1 工作曲线和检出限

分别取不同浓度的CAZ标准液，在试验得出的最佳条件下，按照“1.2”项下实验方法以CAZ浓度ρ与其525 nm处对应的吸光度（△A525）作图。 在 0.80～40.00 μg/mL 范围内，CAZ浓度与△A525之间具有较好的线性关系，相关系数r为0.998 7，回归方程为△A525=0.01ρ+0.051 4，检出限为 0.64 μg/mL。

2.2 样品分析

在分析天平上称取3个不同厂家CAZ针剂各0.200 0 g，溶解后，转移至100 mL容量瓶并定容摇匀。样品溶液不用时须置冰箱中4℃保存。使用时准确移取1.00 mL至25 mL容量瓶，定容至刻度后摇匀，再准确移取1.00 mL稀释溶液按照“1.2”项下实验方法测定回收率，测定结果见表1。

表1 样品回收率的测定（n=5）

2.3 吸收光谱的选择

按照“1.2”项下实验方法，对体系在400～700 nm波长范围内进行扫描，即得体系吸收光谱（图1）。KMnO4溶液本身呈紫红色，有两个较强吸收峰位于545、525 nm处。当CAZ加入后，CAZ与KMnO4发生氧化还原反应而使紫红色变淡，400～700 nm波长范围内的吸光度均降低。由于最强吸收峰位于525 nm处，且△A525变化最大，所以本实验测定波长选定为525 nm。

图1 各体系吸收光谱

2.4 酸的选择及用量影响

HNO3是氧化性酸，HCl是还原性酸，酸性KMnO4本身具有强氧化性，CAZ具有还原性，在该体系中，硝酸或盐酸的加入必然导致副反应的发生，故本实验调节酸度选择H2SO4，H2SO4用量的影响见图2。当H2SO4的用量为1.2 mL，浓度为1.44 mol/L时体系△A525最大且较稳定。故本实验选择最佳浓度为1.44 mol/L。

图2 硫酸用量的影响曲线

2.5 高锰酸钾用量的影响

KMnO4用量的影响见图 3。CAZ 没加入时（图 3a），A525随KMnO4浓度的增加而增强。加入CAZ 5.00 μg/mL后（图3b），A525相对降低，但也随着KMnO4浓度的增加而增强，当KMnO4溶液使用体积为1.2 mL，对应浓度为0.24 nmol/L时，△A525达到最大值，本实验KMnO4浓度选择为0.24 nmol/L。

2.6 体系的稳定性

当 CAZ的浓度分别为 2.00、5.00、10.00 μg/mL时， 反应时间对A525的影响实验表明，在室温时，反应进行较快，12 min后反应完全且A525比较稳定，在60 min内A525无明显变化。本实验选择在室温下反应15 min。

2.7 体系的抗干扰性

当 CAZ浓度为 10.00 μg/mL时，按照“1.2”项下实验方法，考察了共存物质对CAZ测定的影响。当相对误差在±5.0%之间，可允许 6.00 mg/mL 的 Zn2+、Cl-、Na+、NO3-、K+、果糖、Ca2+和Mg2+的存在，4.00 mg/mL的NO3-和1.00 mg/mL的葡萄糖、酒石酸、柠檬酸、尿素存在；以F-做掩蔽剂，可允许0.40 mg/mL的Fe3+存在，故该法抗干扰性较好。

3 讨论

高锰酸钾是氧化还原滴定分析中测定还原性物质的常用标准溶液，由于本身为紫红色溶液，在滴定分析中不需另加指示剂。本实验以高锰酸钾为显色剂，通过其氧化具有还原性的头孢他啶导致颜色褪色，对CAZ测定建立了新的分光光度法，该方法所用仪器为简单分光光度计，试剂种类少，操作快、简便且迅速，通过对3个不同厂家的样品进行测定并测定了试验回收率，RSD为0.44%～0.90%，回收率为97.70%～100.70%，实验方法可靠，结果满意，适合于医院制剂质量控制。

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