乳结散的急性及慢性毒理实验研究※

徐 巍 韩媛媛 王金艳 于海荣

(河北省唐山市中医医院普外科，河北 唐山 063000)

乳结散的急性及慢性毒理实验研究※

徐 巍 韩媛媛 王金艳1于海荣2

(河北省唐山市中医医院普外科，河北 唐山 063000)

动物，实验;毒理学;毒性试验;中药，毒性

乳腺增生病是当代女性的常见疾病，其发病率逐年增高，且复发率高，临床治疗尚无规范的方案，中医中药治疗有其独到的疗效。我们自1999年以来应用中药乳结散治疗乳腺增生病取得了良好的临床疗效［1］，为确保乳结散临床应用的安全性，我们进行了乳结散的实验研究，以期为临床进一步推广应用提供毒理学证据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级健康SD雌性大鼠40只，体质量(200±10)g，用作慢性毒理实验;清洁级健康昆明雌性小白鼠30只，体质量(20±2)g，用作急性毒理实验。均由河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证编号:SCXK(冀)904038。在河北联合大学动物实验室喂养，喂以普通饲料(由河北联合大学动物实验室按标准配制)，普通饮水。室温控制在(24±3)℃，湿度(50±10)%，自然光照。

1.1.2 实验药物 乳结散由河北省唐山市中医医院制剂室提供，药物组成:柴胡15 g，丹参 15 g，香附 15 g，白术15 g，白芍药 15 g，茯苓 15 g，当归 12 g，海藻 12 g，夏枯草12 g，昆布 12 g，生牡蛎 12 g，川芎 9 g，青皮 9 g，穿山甲珠9 g，三棱9 g，莪术 9 g，瓜蒌 9 g，桃仁 6 g。浓缩醇提为10 g/袋，相当于生药量210 g。

1.1.3 实验仪器 高速台式离心机GT16－3(原LG16－3)(北京时代北利离心机有限公司)，日本Carton光学显微镜(南京高辉机电贸易有限公司)，迈瑞BC－5500全自动血细胞分析仪(深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，全自动生化分析仪(济南汉方医疗器械有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 急性毒理实验 根据《中药、天然药物研究注册工作手册》［2］，选用清洁级健康昆明雌性小白鼠30只，随机分为2组，中药组和空白对照组各15只。中药组按正常成人口服10 g/d(相当于生药210 g)折算成小白鼠的剂量，每日灌服中药1次，给药容积为1 mL/20 g体质量，小鼠用药量相当于生药量1.037 g。空白对照组予1 mL/20 g体质量0.9%氯化钠注射液灌服。

1.2.2 慢性毒理实验 清洁级健康SD雌性大鼠40只，随机分为4组，正常对照组及乳结散小、中、大剂量组各10只。正常对照组予1 mL/20 g体质量0.9%氯化钠注射液，乳结散小、中、大剂量组药物剂量是成人正常用量的5、15、50 倍，即 0.17 g、0.51 g、1.70 g。均为灌胃给药，每日1次，实验周期为3个月。

1.3 观察指标

1.3.1 急性毒理实验 观察并记录给药7 d内小白鼠的活动、摄食、排泄及死亡等情况，7 d后处死小白鼠，解剖观察小白鼠各脏器有无异常变化，计算小白鼠的最大耐受倍数。最大耐受倍数=(小白鼠的耐受量×成人平均体质量)/(小白鼠平均体质量×成人每日用量)［3］。

1.3.2 慢性毒理实验 ①一般性指标:观察并记录大鼠的外观、毛色，社会行为(躁动、冷漠、探究活动)，刺激性(好斗)等和对周围环境、食物、水的兴趣等，体质量变化。记录有无中途死亡。②给药结束次日，颈动脉采血，分析各血液细胞学指标［白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hgb)、血小板计数(PLT)］及血液生化学指标［丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)、肌酸激酶(CK)］。③处死大鼠后测量心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑的脏器系数(脏器湿质量/体质量×100%)④病理学检查:重要脏器进行病理切片，光学显微镜下40倍观察。

1.4 统计学方法 应用 SPSS 11.5统计软件包进行统计学分析，计量资料用均数±标准差()表示，采用t检验。

2 结果

2.1 急性毒理实验 小白鼠在给药7 d内无死亡，给药后观察小鼠外观、毛色、光泽正常，社会行为、反应均正常，摄食、排泄正常。7 d后人工处死解剖，观察其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、卵巢、子宫均未见异常。病理学检查:苏木精－伊红(HE)染色，中药组脏器表面光滑，组织结构排列有序，细胞大小、形态正常，胞浆、胞核染色清晰，与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。计算结果显示小白鼠对乳结散的最大耐受倍数为成人的250倍。

2.2 慢性毒理实验

2.2.1 一般性指标 乳结散小、中、大剂量组和正常对照组大鼠的外观、毛色，社会行为、刺激性等和对周围环境、食物、水的兴趣等比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。4组大鼠实验后体质量均较本组实验前增加(P＜0.05)，但4组实验后体质量比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.2.2 4组大鼠实验后血液细胞学指标比较 见表1。

表1 4组大鼠实验后血液细胞学指标比较±s

表1 4组大鼠实验后血液细胞学指标比较±s

组 别 n WBC(×109/L) RBC(×1012/L) Hgb(g/L) PLT(×109/L)正常对照组 10 7.32 ±1.12 6.65 ±0.67 143.21 ±10.65 446.45 ±51.27乳结散小剂量组 10 7.54 ±1.45 6.89 ±0.59 149.54 ±11.27 412.57 ±63.12乳结散中剂量组 10 7.44 ±1.29 6.39 ±0.72 146.86 ±12.26 462.88 ±47.83乳结散大剂量组 10 7.92 ±1.18 6.19 ±0.83 143.35 ±10.17 471.89 ±39.21

由表1可见，4组大鼠实验后血液细胞学指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.2.3 4组大鼠实验后血液生化学指标比较 见表2。

表2 4组大鼠实验后血液生化学指标比较±s

表2 4组大鼠实验后血液生化学指标比较±s

组 别 n ALT(U/L) AST(U/L) TP(g/L) Alb(g/L)BUN(mmol/L)Cr(μmol/L)LDL－C(U/L) CK(U/L)正常对照组 10 67.32 ±8.12 146.65 ±41.27 60.53 ±8.56 39.36 ±2.56 5.32 ±1.02 60.36 ±9.34 1546.43 ±421.32 2054.68 ±648.12乳结散小剂量组 10 61.18 ±9.45 163.45 ±47.52 64.31 ±6.45 40.53 ±1.54 6.11 ±1.34 64.75 ±11.62 1288.62 ±358.82 2446.51 ±721.32乳结散中剂量组 10 60.22 ±8.83 159.61 ±29.25 67.92 ±7.16 38.78 ±1.92 5.48 ±1.21 57.12 ±12.19 1473.71 ±371.68 2246.68 ±558.94乳结散大剂量组 10 65.58 ±5.68 171.14 ±56.78 67.82 ±3.98 38.28 ±2.16 6.46 ±1.52 59.79 ±10.27 1593.57 ±415.182347.95 ±681.57

由表2可见，4组大鼠实验后血液生化学指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.2.4 4组大鼠实验后各重要脏器系数比较 见表3。

表3 4组大鼠实验后各重要脏器系数比较%，±s

表3 4组大鼠实验后各重要脏器系数比较%，±s

组 别 n 心脏 肝脏 脾脏 肺脏 肾脏 脑正常对照组 10 1.32 ±0.12 10.65 ±1.27 0.56 ±0.06 1.46 ±0.162.32 ±0.11 2.01 ±0.07乳结散小剂量组 10 1.18 ±0.45 10.45 ±1.24 0.61 ±0.05 1.53 ±0.11 2.11 ±0.09 2.12 ±0.03乳结散中剂量组 10 1.22 ±0.36 9.61 ±1.12 0.62 ±0.06 1.78 ±0.09 2.24 ±0.12 2.09 ±0.05乳结散大剂量组 10 1.17 ±0.31 10.11 ±1.09 0.67 ±0.08 1.56 ±0.122.46 ±0.12 2.05 ±0.06

由表3可见，4组大鼠实验后各重要脏器系数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.2.5 4组大鼠实验后病理学检查 4组大鼠处死后重要脏器行病理切片染色检查，HE染色。乳结散组大鼠脏器组织结构排列有序，细胞大小、形态正常，胞浆、胞核染色清晰，与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

疏肝健脾、活血散结中药乳结散是我们临床总结的方剂，此方集“疏肝解郁、散结祛瘀消癥、活血行气止痛”为一体，行散结合共奏疗效，临床观察对乳腺增生有良好的治疗效果［4］，为了对该方剂的安全性进行验证，我们进行了急性和慢性毒理学研究。急性毒理实验研究证实了小白鼠对乳结散的最大耐受剂量是成人常用量的250倍，慢性毒理实验研究证实了大鼠在接受正常成人乳结散用量5、15、50倍的给药剂量下，各血液细胞学指标、血液生化学指标与正常对照组比较差异均无统计学意义，证实了乳结散药物的安全性。从急性毒理实验来看，2组小白鼠均无1例死亡和中毒，小白鼠的最大耐受量为成人剂量的250倍，一般认为小鼠最大耐受量相当于成人的临床常用量的100倍以上即为安全［5］，本实验表明乳结散对小白鼠无急性毒性作用。慢性毒理实验研究表明，连续3个月的给药，4组大鼠均健康成长，体质量增加，毛色光滑，饮食良好，活动自如，对外界环境反应良好。在对实验大鼠的体质量的观察中，4组大鼠实验后体质量均较本组实验前增加(P＜0.05)，但4组实验后体质量比较差异无统计学意义(P＞0.05)，表明乳结散对大鼠的成长无明显影响。4组大鼠实验后血液细胞学指标和生化学指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，各脏器系数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，表明乳结散对实验大鼠成长期重要脏器无明显影响。同时，病理学检查未见乳结散组显示出明显的病理形态学改变，也证实了乳结散的安全性。本实验结果表明，乳结散口服安全性大，无明显的急、慢性毒副作用，可以在临床进一步推广使用。

［1］李霞.乳结散治疗乳腺增生病65例［J］.河北中医，2001，23(10):754.

［2］张淑秀，华玉琴.中药、天然药物研究注册工作手册［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:117.

［3］张喜平，程琪辉，张宇.黄芩苷胶囊小鼠急性毒性试验［J］.医学研究杂志，2006，35(9):16－19.

［4］徐巍，窦淑荣，陈永平，等.乳痛消乳结散治疗乳腺增生106例［J］.陕西中医，2006，27(4):438－439.

［5］钱海兵，吴毅伟，韩媛媛，等.滋肾填精益髓类中药的毒理实验研究［J］.陕西中医，2010，31(7):918－920.

R－331;R－332;R259.95;R287

A

1002－2619(2012)11－1707－03

※项目来源:河北省中医药管理局2009年度中医药、中西医结合科研计划课题(编号:2009214)

1 唐山开滦总医院赵各庄医院内三科，河北 唐山 063000

2 河北省滦县榛子镇中心卫生院，河北 滦县 063000

徐巍(1975—)，男，副主任医师，硕士。从事普外科临床工作。

2012－05－31)