针对Survivin靶向治疗大肠癌的研究

唐武平

湖南省邵阳市中医医院，湖南邵阳 422000

大肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，全世界大约每年有近100万的新发病例，至少有1/2以上的患者因其而死亡。目前，大肠癌的靶向治疗已经成为临床研究的热点和争论较多的问题。近年来，临床研究发现Survivin与肿瘤细胞的凋亡障碍密切相关。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，既往的研究证实Survivin在大肠癌中上调表达，过度表达则预后不良，提示该基因在大肠癌发生发展中起重要作用[1]。因而，该研究筛选自2006年5月—2008年10月Survivin基因的siRNA以蔓病毒为载体，在大肠癌细胞导入Survivin的siRNA，期望靶向抑制Survivin活性，诱导肿瘤细胞凋亡并促进CPT-11等化疗的敏感性，探讨大肠癌基因治疗与化疗相结合的新方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料

前期试验中构建表达并扩增纯化的蔓病毒载体pSIHl一H1.copGFP shRNA Vector(7.2 kbp)购于 SBI公司，Survivin siRNALentivirus重组体购自SBI公司，人大肠癌细胞株LOVO购自中国科学院北京细胞研究所。

1.2 方法

1.2.1 肿瘤细胞的培养 将人大肠癌细胞株LOVO细胞培养于10%胎牛血清及1×105U/L青链霉素的RPMI1640培养液中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

1.2.2 伊立替康 (CPT-11)的配置 将CPT-11均匀溶解于DMSO中，置于-20℃冰箱保存备用。

1.2.3 细胞分组 肿瘤细胞对照组、Survivin siRNA-Lentivirus重组体组、CPT-11组、Survivin siRNA-Lentivirus重组体联合CPT-11组。

1.3 统计方法

采用SPSS16.0统计学分析软件进行统计处理。计量资料用（±s）表示，行 t检验。

2 结果

2.1 人大肠癌细胞株LOVO细胞抑制情况分析

人大肠癌细胞株LOVO细胞培养组细胞未受到抑制，而加入Survivin siRNA-Lentivirus重组体培养后，细胞抑制率为（11.42±2.15）%，加入 CPT-11 后抑制率为（13.51±2.06）%，重组体联合CPT-11培养后，细胞抑制率为（47.62±3.17）%，经统计学分析，重组体联合CPT-11组抑制率显著高于重组体组及CPT-11组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结果见表1。

表1 人大肠癌细胞株LOVO细胞抑制情况分析（%）

2.2 各组肿瘤细胞凋亡率比较分析

对照组肿瘤细胞无凋亡，重组体组肿瘤细胞凋亡率为（3.21±2.13）%，CPT-11 组肿瘤细胞凋亡率为（3.27±2.05）%，重组体联合CPT-11组肿瘤细胞凋亡率为（62.34±3.56）%，联合组细胞凋亡率明显高于其他组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结果见表2。

表2 各组肿瘤细胞凋亡率比较分析（%）

3 讨论

目前，大肠癌在全球的发病率呈逐年上升趋势，提高治疗效果、延长生存时间是目前亟待解决的问题。随着肿瘤分子生物学和基因工程技术的发展，肿瘤的治疗，已不再仅仅局限于传统的手术、放射及化学治疗。目前靶向治疗为大肠癌1种治疗的新手段，靶向治疗药物能够特异性地作用于肿瘤发生，它为大肠癌的治疗提供了新的手段。靶向治疗是21世纪抗肿瘤治疗的重大进展方向。虽然分子靶向药物本身有一些疗效的局限性和毒性反应，但与传统的细胞毒药物相比，靶向性好、毒性低、特异性强。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，药物作用机制将会进一步阐明，靶向药物在大肠癌未来的综合治疗中将会扮演更加重要的角色。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，与肿瘤细胞的凋亡障碍密切相关。目前，survivin已成为靶向治疗恶性肿瘤的研究的新热点[2]。国际癌症组织在筛选抗肿瘤药物程序中，研究了survivin在体外培养细胞中的表达作用，结果显示：人类肿瘤细胞株中均有survivin蛋白的表达，从而说明survivin与肿瘤的发生、发展以及肿瘤的预后不良密切相关。既往的研究也证实Survivin在大肠癌表达上调，过度表达则预后不良，提示该基因在大肠癌发生发展中起重要作用[3]。

该研究结果显示，加入Survivin siRNA-Lentivirus重组体和CPT-11培养后，肿瘤细胞均受到抑制，而加入两者联合重组体联合CPT-11培养后，细胞抑制率为明显提高；重组体联合CPT-11组肿瘤细胞凋亡率为明显高于重组体组和CPT-11组；说明Survivin siRNA-Lentivirus重组体和CPT-11均能抑制细胞增殖、促进其凋亡，而Survivin siRNA-Lentivirus重组体可增强肿瘤细胞对化疗药物CPT-11的敏感性。

[1]Kappler M,Rot S,Taubert H,et al.The effects of knockdown of wildtype survivin,survivin-2B or survivin-delta3 on the radiosensitization in a soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions[J].Cancer Gene Ther,2007,14(12):994-1001.

[2]吕元景,苗素生,贾深汕,等.重组survivin腺病毒对喉癌细胞抗凋亡作用的体外实验[J].肿瘤防治研究,2011,38(6):615-616.

[3]Xi RC,Biao WS,Gang ZZ.Significant elevation of sur-vivin and livin expression in human colorectal cancer:in-verse correlation between expression and overall survival[J].Onkologie,2011,34(8/9):428-432.