复方水飞蓟素－丹参素滴丸溶出度测定方法的研究

祝冬青

江苏食品职业技术学院医药与健康管理系，江苏 淮安 223003

水飞蓟素是从菊科药用植物水飞蓟 (Silybum marianum(L．)Gaertn．)种子的种皮中提取出来的有效成分，主要由水飞蓟宾、水飞蓟宁等黄酮木脂素类化合物组成，具有抗氧化、抗肝纤维化、保护肝细胞膜、降血脂等药理活性，临床上常用于急慢性肝炎、肝纤维化、肝硬变和代谢中毒性肝损伤的治疗［1，2］。丹参素是从唇形科植物丹参 (Salvia miltiorrhiza Bge．)的干燥根及根茎中提取的水溶性有效成分之一，具有抑制血小板聚集、抗动脉粥样硬化、抗肝纤维化、降血脂等药理作用［3～5］。近年来，有临床研究报道［6～8］，采用水飞蓟素制剂配合丹参制剂，在治疗脂肪肝、肝纤维化、慢性肝炎、酒精性肝病等方面具有很好的协同作用，疗效提高，提示了水飞蓟素－丹参素复方制剂的可能性。但是，由于水飞蓟素难溶于水，在普通制剂中溶出速度慢，吸收量低，影响生物利用度和疗效［9，10］。为了提高其溶出，笔者采用固体分散技术，研制了复方水飞蓟素－丹参素滴丸。为了解滴丸的释药特点及规律，建立质控标准，进行了复方水飞蓟素－丹参素滴丸溶出度的研究，为生产上的质量控制奠定基础。

1 仪器、药品与溶剂

DWJ－2000S多功能滴丸试验机 (烟台百药泰中药科技发展有限公司)，RC－3型智能溶出度测试仪 (天津市新天光分析仪器技术有限公司)，UV765紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，FA2004电子天平 (上海精密仪器仪表有限公司)。

水飞蓟素 (江苏天士力帝益药业有限公司，含水飞蓟宾80%，批号200808001)，丹参素提取物 (西安鸿生生物技术有限公司，含丹参素20%，批号20090502)，水飞蓟宾、丹参素钠标准品 (中国药品生物制品检定所，批号分别为110856－200604、110855－200809)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶出度测定方法

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取60℃减压干燥至恒重的水飞蓟宾标准品12.52mg和丹参素钠标准品10.75mg，分别置于100ml容量瓶中。水飞蓟宾标准品加70 ml甲醇，超声处理使溶解，放冷，加甲醇定容，摇匀，作为水飞蓟宾标准储备液 (0.1252 mg·ml－1)。丹参素钠标准品加适量水，振摇使溶解，加水定容，摇匀，作为丹参素钠标准储备液 (0.1075 mg·ml－1)。

2.1.2 供试品溶液的制备 取复方水飞蓟素－丹参素滴丸20粒，研细，取适量 (约相当于水飞蓟宾10 mg)，精密称定，置100 ml量瓶中，加溶出介质约70m l，超声处理15 min，放冷，加溶出介质至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.3 最大吸收波长的确定及干扰试验 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各3.0ml，分别置于25 ml容量瓶中，各加溶出介质至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液测定;另取不含水飞蓟素和丹参素空白滴丸，按“2.1.2”项下方法制得空白溶液。以溶出介质为参比，在紫外可见分光光度计中于200～500 nm范围内扫描。结果，以水为溶出介质时，水飞蓟宾对照品溶液在330 nm处有最大吸收，丹参素钠对照品溶液在280 nm处有最大吸收，供试品溶液在280 nm和330 nm处均有较强吸收。以0.1 mol·l－1盐酸溶液、pH 4.5缓冲盐溶液和人工胃液为溶出介质时，水飞蓟宾对照品溶液、丹参素钠对照品溶液分别在288 nm和280 nm处有最大吸收，供试品溶液在280 nm和288nm处均有较强吸收。空白溶液均无吸收。参考中药水飞蓟的含量测定方法［11］，选择288 nm和280 nm为分别为水飞蓟素、丹参素的检测波长。

2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取水飞蓟宾标准储备液和丹参素钠标准储备液各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分别置于25 m l容量瓶中，加0.1 mol·l－1盐酸溶液至刻度，摇匀，制成对照品系列浓度溶液。以溶出介质为空白对照，水飞蓟宾、丹参素钠的对照品溶液分别在288 nm、280 nm波长处测定吸光度。以吸光度A对浓度C进行线性回归，得水飞蓟宾的回归方程为A1=0.0311 C1+0.0016(r=0.9999)，线性范围为5.01 ～30.05 μg·ml－1;丹参素钠的回归方程为A2=0.0365 C2+0.0021(r=0.9999)，线性范围为4.30～25.80μg·ml－1。结果表明，在检测范围内，水飞蓟宾、丹参素钠的检测浓度与吸光度均呈现良好线性关系。

2.1.5 精密度试验 分别精密吸取水飞蓟宾、丹参素钠标准储备液3.0 ml，照2.1.4项下标准曲线的操作，测定吸收度，重复6次。结果，RSD分别为0.65%(水飞蓟宾)、0.43%(丹参素钠)，表明本试验所采用的定量方法精密度可靠。

2.1.6 重复性试验 精密吸取同一供试品溶液5份，每份3.0 ml，按2.1.4项下“分别置于25 m l容量瓶中”起依法操作。结果，RSD分别为0.72% (水飞蓟素)、0.90%(丹参素)，表明该方法重现性良好。

2.1.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液5.0 m l，按2.1.4项下“分别置于25 ml容量瓶中”起依法操作，分别于0，15，30，60，90，120 min测定吸光度，结果，RSD分别为0.75%(水飞蓟素)、2.67%(丹参素)，表明供试品溶液在120 min内基本稳定。

2.1.8 加样回收率试验 精密吸取同一供试品溶液6份，每份3.0 ml，分别置于25 m l容量瓶中，精密加入对照品溶液适量 (相当于供试品溶液所含水飞蓟素、丹参素含量一半的80%、100%、120%)，按2.1.4项下“加0.1 mol·l－1盐酸溶液至刻度”起依法操作，测定其含量，计算回收率和RSD值。结果，水飞蓟素的回收率为99.95%，RSD为0.83%;丹参素的回收率为101.15%，RSD为1.38%。结果表明，溶出度测定方法回收率高，方法准确，可用于本品溶出度的测定。

2.2 溶出条件的选择

2.2.1 溶出方法的选择 采用《中国药典》2010年版2部附录XC第一法进行溶出度试验12，采用紫外分光光度法检测。由于本品规格小，要使吸收度达到0.3以上，溶液需有一定的浓度，因此每个容器中投入10粒。

2.2.2 溶出介质的选择 根据2.1.3项试验结果，排除水为溶出介质，分别以0.1 mol·l－1盐酸溶液、pH4.5缓冲盐溶液和人工胃液为溶出介质，以100 r·min－1转速进行溶出试验 (对同一批供试品)，溶出结果见表1。试验结果表明:供试品中水飞蓟素在0.1 mol·l－1盐酸溶液和人工胃液中溶出效果相近，且溶出效果较好;在pH4.5缓冲盐溶液中的溶出较慢。由于供试品中丹参素易溶于水，其在3种溶出介质中的溶出效果都很好，且在15 min时就已经溶出约100%。为节约试剂，简化操作，故选用0.1 mol·l－1盐酸溶液为本品溶出度测定的溶出介质，并且以水飞蓟素的溶出效果作为复方水飞蓟素－丹参素滴丸的溶出度控制因素。

表1 供试品在不同溶剂同一转速 (100 r·min－1)下的溶出量

2.2.3 转速和取样时间的选择 取本品10粒，以0.1mol·l－1盐酸溶液为溶剂，分别以50，75，100，120 r·min－1进行溶出试验，测定供试品中水飞蓟素的溶出度，试验结果见表2。

表2 供试品在同一溶剂不同转速下的溶出量

结果表明:50，75 r·min－1时，供试品溶出较慢;100 r·min－1时溶出效果较好，120 r·min－1时溶出效果与100 r·min－1时相同，故确定转速为100 r·min－1。40 min时溶出量已超过95%，因此取样时间定为40 min。

2.2.4 溶出曲线的均一性 从同一批供试品取6份样，每份10粒，按上述确定的条件进行溶出度试验，6份溶出结果见表3。试验结果表明，供试品溶出度均一性良好。

表3 溶出曲线的均一性

2.3 供试品溶出度测定 取试制的供试品3批，每批6份，每份10粒，按上述确定的溶出度测定方法依法操作，计算每份供试品的溶出度。结果表明，3批样品在40 min时，累积溶出度在95%左右 (见表4)。考虑到大生产情况，暂定本品40min时溶出度为不低于标示量的80%为宜。

表4 3批供试品溶出度测定结果 (%，n=3)

3 讨论

许多中药有效成分难溶于水，在固体制剂中存在一定的溶出吸收障碍。固体分散技术可通过增大药物的表面积使药物溶解加快，从而提高溶出速率和累积溶出度，促进药物的溶出和吸收［13］。近年来，固体分散体技术在中药剂型改革中的应用发展很快，取得了较好的经济和社会效益。

药物的体外溶出度是评价其内在质量的重要指标。采用固体分散技术制备的滴丸，可以采用溶出度指标进行质量控制。研究表明，研制的复方水飞蓟素－丹参素滴丸，采用紫外分光光度法测定水飞蓟素、丹参素含量，按《中国药典》2010年版2部附录XC第一法进行溶出度试验，以 0．1 mol·l－1盐酸溶液为溶剂，转速 100 r·min－1，溶出时间40 min，溶出量限度为标示量的80%。通过干扰试验、标准曲线、精密度、重复性、稳定性、加样回收率的考察，结果表明，该方法简便易行，准确度高，稳定可靠，可以用于复方水飞蓟素－丹参素滴丸溶出度的测定。

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