舒血通络胶囊对动脉粥样硬化大鼠AngⅡ、NO表达及血液相关指标的影响1）

李子斌，甘照儒

舒血通络胶囊具有抗氧化、清除自由基、改善血液流变性、减轻微循环障碍、改善组织或器官的血液循环作用。为进一步探讨舒血通络胶囊对动脉粥样硬化（AS）的防治作用及其机制，现对AS模型大鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）、一氧化氮（NO），腹主动脉壁中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）等指标观察如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 健康雌性SD大鼠60只，体重200g～250 g，由广西中医学院实验动物中心提供。

1.1.2 药物及试剂 舒血通络胶囊（当归、生地、桃仁、红花、三七、川芎、黄芪、郁金、石菖蒲、山楂、熟地、香附、木香、甘草）由广西中医学院附属瑞康医院药剂室提供；维生素D3晶体粉末，由山东东营天润生物科技有限公司提供；TC、TG、LDL－C试剂盒由上海复星长征医学科学有限公司提供；大鼠AngⅡ定量检测试剂盒，由上海百沃科技有限公司提供。

1.1.3 主要仪器 微量台式高速离心机，美国生产；日立7150全自动生化分析仪，日本生产；病理组织漂烘仪，中国常州市华利电子有限责任公司生产；全自动彩色图像处理系统，德国生产；显微图像分析系统，美国生产。

1.2 动物分组与给药 健康雌性SD大鼠60只随机分组。空白组（标准饮食组20只）；模型组（灌服生理盐水组20只）；方药组（灌服舒血通络胶囊组20只）。大鼠自由饮食，光照每日12h（08：00～20：00），标准环境饲养，温度23.0 ℃±0.5 ℃，湿度（50.0±0.5）%。根据雌性SD大鼠的体重，在0、24h和48h分别给予维生素D34×105U／kg灌胃，然后继续喂以标准饲料（重量比为碳水化合物60%，粗蛋白20%～21%，粗脂肪5%）9周，造成大鼠AS模型，成功率90%，造膜时间连续9周。然后给模型对照组、方药组分别灌服生理盐水每日每次3mL和舒血通络胶囊25g／（kg·d），相当于成人每天口服剂量的10倍量，连续灌胃15d。

1.3 标本采集及处理 造模成功后，将空白组、模型组、方药组大鼠腹主动脉采血各3mL，并取腹主动脉壁各5mm。在全自动生化分析仪检测大鼠动脉血血脂情况。摘取腹主动脉壁5 mm，标本冷冻后，行5μm厚的连续冠状切片，每隔10张抽取1张，粘于玻片上室温保存留用作AngⅡ致炎症细胞免疫组化染色。HE染色后观察腹主动脉壁斑块沉积及炎症细胞增生情况。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示。

2 结 果

2.1 3组大鼠血脂比较（见表1）

表1 3组大鼠血脂比较（x±s） mmol／L

2.2 AngⅡ在3组AS大鼠腹主动脉血管壁中的变化（见表2）用免疫组化法测定AngⅡ，模型组中大鼠腹主动脉血管壁中AngⅡ含量明显较空白组和方药组增高。

2.3 重氮化反应法测定各组血清NO浓度（见表3）

2.4 3组大鼠腹主动脉血管切片HE染色结果 光镜下对照组大鼠腹主动脉管腔不规则，内膜和中膜均增厚，斑块明显隆起于管腔内，斑块内含有大量炎症细胞。而空白组与方药组管腔较规则，内膜中膜未见明显增厚未见斑块明显隆起。

表2 AngⅡ在3组AS大鼠腹主动脉血管壁中的变化（x±s）

表3 各组大鼠血清中NO浓度（x±s）

3 讨 论

实验表明［1］，单纯使用维生素D3连续灌胃的方法可以成功造出大鼠AS模型，方法简单易行，成功率高。AngⅡ可刺激多种细胞分泌多种炎症因子，炎症与AS存在高度相关性。多种细胞因子可诱导产生炎症标志物，炎症因子与炎症标志物直接参与AS的形成，同时也介导甚至加强AngⅡ的致AS作用［2］。其中巨噬细胞表达与AngⅡ关系密切，且在AS形成过程中起着重要作用，具体表现：巨噬细胞具有吞噬胆固醇、参与炎症和免疫反应、参与增值反应促进血管平滑肌细胞的迁移和增值，同时还可表达多种金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶类，使细胞外基质退化，斑块不稳定甚至有破裂的趋势［3］。

NO具有抗氧化、清除自由基、抑制低密度脂蛋白在血管壁被氧化，防止氧化低密度脂蛋白（ox－LDL）的产生，而影响脂质浸润［4］；能抑制NF－κB的激活和核内迁移，阻抑激活的内皮细胞表达黏附分子，减少嗜中性粒细胞和单核细胞的黏附和活化，减少血管壁的炎症反应；能抑制血小板黏附、聚集，抑制凝血酶诱导的血小板活性因子的表达以减少血栓形成；能阻止凋亡，保持内皮细胞的完整性；还能有效地抑制血管平滑肌细胞（SMC）增殖、迁移和细胞外基质的合成，对AS病理形成和发展具有阻抑作用［5］。

近年来关于AS的研究颇多，现代医学研究认为，AS的形成主要是由于脂质浸润、血小板黏附聚集、炎症反应、血管内皮受损、免疫功能失调、血管平滑肌细胞的增殖、迁移，自由基损伤等原因。中医学认为AS的形成是痰、浊、瘀、虚共同作用的结果。从药物的组分来看，舒血通络胶囊具有活血化瘀、行气化痰、补肾益精的功效，故可以起到抗AS的作用。本研究结果表明，舒血通络胶囊可以显著降低AS大鼠升高的血脂水平，降低AS大鼠腹主动脉壁中AngⅡ含量，升高血清中NO的含量。提示舒血通络胶囊抗AS的作用机制可能是通过抑制AS大鼠血管壁AngⅡ的生成、升高血清中NO的含量来实现的。

本研究提示舒血通络胶囊具有抗氧化、清除自由基、改善血液流变性、减轻微循环障碍、改善组织或器官的血液循环等作用，对动脉粥样硬化有改善作用。

［1］ 沈丽，卢维晟.不同方法建立动脉粥样硬化大鼠模型的比较［J］.心脏杂志，2005，17（1）：18－20.

［2］ Boyle JJ.Macrophage actuation in atherosclerosclerosis：Pathogenesis and phyarmacology of plaque repture［J］.Curr Vasc Pharmacol，2005，3（1）：63－68.

［3］ Ferraric CM，Strawn WB.Role of the rennin angiotensin aldosterone system and proinflammatory mediators in cardiovascular dis－ease［J］.Am J Cardiol，2006，98（1）：121－128.

［4］ 武宏敏，张建新.一氧化氮与心肌缺血再灌注损伤［J］.河北医药，2008，30（6）：836－838.

［5］ 周京红.一氧化氮和动脉粥样硬化［J］.生物技术通讯，2007，18（5）：879－881.