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食管癌发生发展过程中COX-2蛋白表达的研究

2012-07-04

河南外科学杂志 2012年6期
关键词:鳞状孵育腺癌

李 彬

山东泰安市中医医院外科 泰安 271000

环氧合酶(COX)是PGS(前列腺素类)生物合成的限速酶。近年来发现COX-2在肿瘤发生、发展、分化、转移和预后等方面可能有重要作用,本文就COX-2蛋白在食管癌中的表达及在食管癌发生、发展中的作用进行研究。

1 材料和方法

1.1 标本 取自山东省泰安市中医医院2008-06-2010-06食管癌患者的活检组织和术后标本,正常食管黏膜鳞状上皮6例,单纯增生8例,轻、中、重度不典型增生分别6、4、4例,食管鳞状细胞癌43例。

1.2 试剂 鼠抗人环氧化物酶2单克隆抗体工作液与SPStrepavidin/Peroxidase Kit均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 方法 辣根过氧化酶标记的SP法:(1)石蜡切片,常规脱蜡至水。(2)3%过氧化氢孵育5~10 min。(3)蒸馏水冲洗,PBS(pH 7.2)浸泡5 min。(4)置枸酸盐缓冲液(pH 6)中,微波炉抗原修复5~10 min,冷却至室温。(5)滴加正常山羊血清工作液,室温孵育10~15 min。(6)滴加一抗,37℃孵育1~2 h。(7)PBS冲洗,3 min×3次。(8)滴加二抗,37℃孵育10~15 min。(9)PBS冲洗,3 min×3次。(10)辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃孵育10~15 min。(11)PBS冲洗,3 min×3次。(12)DAB显色。(13)自来水充分水洗,苏木素复杂,脱水,透明,封片。

2 结果

COX-2蛋白表达定位于细胞浆,>10%病变细胞的细胞浆出现棕黄色的颗粒者判定为阳性(+),25% ~50%判定为阳性(++),>50%判定为阳性(+++)。不同病变食管组织COX-2蛋白免疫组化染色结果及统计分析见表1。

正常组和单纯增生组为对照组。对照组中未发现COX-2蛋白表达;50%(1/4)中度不典型增生有COX-2蛋白表达,食管鳞状细胞癌组为74%(32/43)。COX-2蛋白表达与淋巴转移、浸润深度、肿物大小及临床分期关系见表2。

经x2检验,COX-2蛋白表达,在食管癌临床分期I~II期和III~IV期间,二者差异有统计学意义(P<0.05)。COX-2蛋白表达,与淋巴转移、浸润深度、肿物大小无关。

表1 不同病变食管组织中COX-2蛋白免疫组化染色结果

表2 COX-2蛋白表达与淋巴转移、浸润深度、肿物大小及临床分期关系 [n(%)]

3 讨论

环氧合酶(cyclooxgease,COX)又名前列腺素过氧化物合成酶,通过COX活性催化花生四稀酸(AA)转化为前列腺素G2(PGG2),通过过氧化酶活性催化PGG2转化成PGH2。PGH2被单个的合成酶或还原酶作用才能转化成具有活性的终产物如PGE2、PGF2等。COX-2 mRNA及蛋白质在组织中表达水平增高很可能是肿瘤发生的早期标志。许多实验者在活体肿瘤标本中发现有COX-2的表达。Zimmerman等[1]检测了食管癌中COX-2表达,发现91%(n=172)的食管鳞状细胞瘤、78%的食管腺癌中COX-2免疫组化染色阳性。Uefuji等[2]检测了23例胃腺癌标本,其中19例有COX-2蛋白表达,占83%。诸多结果提示,COX-2过度表达在消化系肿瘤中起重要作用。

免疫组化染色COX-2的蛋白质发现绝大多数腺癌和几乎全部鳞癌均为阳性,并且腺癌的染色密度强于鳞癌。Tsujii等[6]用COX-2表达载体永久性转移鼠肠上皮细胞(RIE)发现COX-2过表达,细胞对基质黏附性增加,E-钙粘连素水平下降,有证据支持后者可能是侵袭抑制因素。增加的黏附性、下调的E-钙粘连素与瘤细胞的局部浸润有关。Murata等[7]发现在人的食管癌组织中,COX-2过表达与食管壁淋巴管浸润、区域淋巴转移程度明显相关,与病理参数如解剖部位、原位肿瘤浸润深度、远处转移、组织病理分级或食管壁静脉浸润无关。以上实验均提示COX-2过表达在增加肿瘤发生的同时,也增加其转移的潜能。因此,COX-2蛋白的表达与食管癌的发生发展关系密切,是食管癌发生发展中的一个重要指标,可作为食管癌可疑病例定期随访的指标之一。

[1]Zimmermann KC,Sarbia M,WeberAA,et al.COX - 2 espression in human esophageal carcinoma.Cancer pancreatic cancer[J].Res,1999,59(1):198.

[2]Uefuji K,Ickikura T,Mochizuki H,et al.Expression of COX -2 protein in gastric adenocarcninma[J].J Surg Oncol,1998,69(3);168.

[3]Tsujii M,DuBois RN,Alterations is cellulaiadhesion and apoptos is in epithelial cells overexpression COX - 2[J].Cell,1995,83:493.

[4]Murata H,Kawano S,Tsuji S,et al.Cyclooxygenase -2over esprission enhanxes lymphatic lymphatic invasion and metastas is in human gastric carcinoma[J].Am J Gastroenterology,1999,4(2):451.

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