EZH2和PTEN蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌的相关性研究

宋大平，方仔羽

（1.湖北省武汉市蔡甸区中医院妇产科 430100；2.广西医科大学附属第四医院妇产科，广西柳州545005）

恶性肿瘤中普遍存在表观遗传学的改变，EZH2是表观遗传学中重要的因子［1］。有研究表明EZH2在卵巢癌组织中高表达，与卵巢浆液性囊腺癌的进展与转移密切相关，但具体机制不清［2］。PTEN基因是一种抑癌基因，对细胞生长和凋亡有重要调控作用。有研究表明EZH2和PTEN基因在膀胱癌和前列腺癌中存在负相关，且与癌症的不同病理分级和临床分期有关［3－4］。本研究拟通过采用免疫组化SABC法检测卵巢浆液性囊腺癌标本中EZH2和PTEN蛋白的表达水平，探讨其在卵巢浆液性囊腺癌早期诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2006年8月至2011年7月武汉市江夏区第一人民医院和广西医科大学附属第四医院妇产科行卵巢浆液性囊腺癌手术切除且临床资料完整的标本73例（观察组），所有病例术前均未接受放疗或化疗，术后均经病理确诊，年龄20～70岁，平均（47.2±5.2）岁。按国际妇产科联盟（FICO）2000年标准进行临床分期，Ⅰ～Ⅳ期分别13、16、34、10例；病理分化程度：低分化35例，中分化21例，高分化17例；其中44例伴有腹水，16例伴有淋巴结转移，32例伴有癌瘤播散；全子宫和双附件切除16例，行肿瘤细胞减灭术57例。选择同期在两院行手术治疗的卵巢浆液性囊腺瘤标本39例作为对照（对照组），年龄23～68岁，平均（48.5±6.1）岁。

1.2方法

1.2.1检测方法 免疫组化检测方法（SABC法）按常规方法染色，先经固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、脱水、灭活、修复等步骤后，分别滴加1∶200兔抗人EZH2多克隆抗体（美国Cell Signaling公司）和1∶100鼠抗人PTEN多克隆抗体（北京中山生物技术有限公司），在4℃冰箱中存放24h，再分别滴加生物素二抗，最后经DAB显色、脱水、透明、封片。用PBS代替抗体作阴性对照，用已知的阳性标本作阳性对照。

1.2.2判定结果 每张切片由两位病理学专家分别读片，存在争议的经两位专家讨论后决定。EZH2主要以细胞核和细胞质均无着色或只有细胞质着色者判为阴性；细胞核内出现棕褐色、棕黄色或黄色颗粒者判为阳性。PTEN蛋白则以细胞质内出现棕褐色、棕黄色或黄色颗粒者判为阳性。每张切片随机选取5个高倍视野（×400），计数1 000个细胞，计算着色细胞所占百分比，若小于25%为阴性（－）；25%～50%为弱阳性（＋）；＞50%～75%为阳性（＋＋）；＞75%为强阳性（＋＋＋）。

1.3统计学处理 采用SAS9.2软件进行统计分析。2组间EZH2或PTEN蛋白表达阳性率比较用χ2检验，EZH2或PTEN蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理特征的关系用Spearman等级相关分析，EZH2和PTEN蛋白阳性表达率相关性用直线相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组患者EZH2和PTEN蛋白的表达情况 EZH2在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达阳性率为71.2%，高于卵巢浆液性囊腺瘤组织的阳性率12.8%（P＜0.01）；而PTEN蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达阳性率为46.2%，低于卵巢浆液性囊腺瘤组织的阳性率76.9%（P＝0.0013），见表1。

2.2EZH2和PTEN蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理特征的关系 EZH2的总表达阳性率在高、中、低分化患者中分别为58.8%、71.4%、77.1%，随着病理分级的增加而升高（rs＝0.246，P＝0.036）；在临床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分别为53.8%、68.8%、73.5%、90.0%，随着临床分期的增加而升高（rs＝0.251，P＝0.032）。PTEN蛋白的总表达阳性率在高、中、低分化患者中分别为64.7%、57.1%、28.6%，随着病理分级的增加而降低（rs＝－0.330，P＝0.035）；在临床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分别为61.5%、56.2%、41.2%、20.0%，随着临床分期的增加而降低（rs＝－0.247，P＝0.004）。具体见表2。EZH2和PTEN蛋白在不同临床分期和病理分级患者中的阳性表达率存在负相关（r＝－0.903，P＝0.005）。

表1 两组患者EZH2和PTEN蛋白的表达比较［n（%）］

表2 EZH2和PTEN蛋白表达与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理特征的关系

3 讨 论

卵巢恶性肿瘤早期症状常不明显，发现时多为晚期，是病死率最高的妇科恶性肿瘤，其中最常见的是卵巢浆液性囊腺癌［5－7］。EZH2是表观遗传学中的重要成员，具有多潜能性［8－9］，PTEN蛋白是近年来发现的一种具有磷酸酶活性抑癌基因，大量研究表明，EZH2在肺癌、乳腺癌、宫颈癌等多种恶性肿瘤中明显高表达［10－12］，在脑癌、前列腺癌、子宫内膜腺癌等组织中PTEN蛋白呈现低表达［13－15］。本研究同样发现EZH2在卵巢浆液性囊腺癌组织中存在高表达，表达阳性率约是卵巢浆液性囊腺瘤组织5.6倍，PTEN蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中存在低表达，说明EZH2和PTEN蛋白可能在卵巢浆液性囊腺癌发生过程中起一定作用。

李海波等［16］的研究发现EZH2和PTEN蛋白在肾癌中的表达存在负相关，且EZH2的表达随肾癌的临床分期升高而增加，PTEN蛋白的表达随肾癌的临床分期及病理分级的升高而降低，与本研究结果基本一致。本研究发现，EZH2的表达随卵巢浆液性囊腺癌患者的临床分期和病理分级的升高而升高，PTEN蛋白的表达随卵巢浆液性囊腺癌患者的临床分期和病理分级的升高而降低，说明EZH2和PTEN蛋白的表达可能与卵巢浆液性囊腺癌发展有关，有望作为卵巢浆液性囊腺癌早期诊断和判断预后的指标。二者存在负相关（r＝－0.903，P＝0.005），说明它们在卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展过程中可能存在协同作用，具体作用机制还有待于进一步研究。

总之，EZH2和PTEN蛋白作为卵巢浆液性囊腺癌相关因子，对EZH2和PTEN蛋白的检测有助于早期发现卵巢浆液性囊腺癌并判定病情进展，同时也为卵巢浆液性囊腺癌的基因治疗提供了新思路。

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