CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床研究

任 庆，熊锐华，田秀荣，罗克品，周 欣

(中国人民解放军第181医院肿瘤治疗中心，广西 桂林541002)

恶性肿瘤患者就诊时多数病情已达晚期，且体质虚弱，无法进行手术、放、化疗等治疗。细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是近年来逐渐崭露头角的生物治疗手段，对预防肿瘤复发、清除患者体内残留的肿瘤细胞，改善晚期肿瘤患者的生活质量提供了新的治疗途径。我中心自2009年2月至2009年10月采用该方法治疗无手术以及放、化疗指征的晚期恶性肿瘤患者42例，取得了一定疗效，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本中心2009年2月1日至2009年10月31日，共治疗42例病理学或细胞学确诊的恶性实体瘤，Ⅲ期20例，Ⅳ期22例，KPS评分50～60分，均存在可测量病灶，预计生存期≥3个月，治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常；男性24例，女性18例，年龄35～80岁，中位年龄56.9岁；非小细胞肺癌10例，小细胞肺癌4例，乳腺癌8例，胃癌5例，结肠癌2例，肝癌6例，胰腺癌2例，卵巢癌2例，鼻咽癌3例；患者本人或法定代理人知情并签署《知情同意书》，通过医院伦理委员会同意后才能接受治疗。所有病例均能记录真实的联络方式，以便随访。

1.2 CIK细胞的制备

采用异体外周血淋巴细胞分离液50 mL，分离并收集患者外周血单个单核细胞，用PBS洗涤细胞3次，将细胞按2×106个/mL的密度悬浮于RPMI1640完全培养液中，加入干扰素-γ1000 μ/mL，置于37℃、CO2体积分数为5%的条件下培养24 h，再加入抗CD3单克隆抗体100 ng/mL，白细胞介素-21000 μ/mL继续培养，每隔2～3 d分瓶1次，并补加完全培养液及IL-2。培养至10～14 d经检测无污染后，收集CIK细胞（数量约为1×109个），离心并用0.9%NaCL溶液洗涤细胞3次，最后以0.9%NaCL溶液20 mL重悬细胞。

1.3 治疗方法

患者给予CIK细胞静脉输注，每次输注细胞数量近似于1×109个，总体100 mL，每天1次，连续10 d为1个疗程，治疗1个月为1个疗程。每个患者进行3～4个疗程治疗。若患者在治疗过程中病情进展则停止治疗。在开始上述治疗后，患者即正式进入随访期。

1.4 疗效评价

（1）于治疗前、治疗结束后行CT检查，并进行比较以评价疗效，1个月后复查确认疗效。此后每3个月复查1次。近期疗效评价参照 “实体瘤疗效评价标准（RECIST）”进行评价，分为完全缓解（CR），部分缓解（PR），疾病稳定（SD），疾病进展（PD），客观缓解率（ORR）即CR+PR的例数占所有病例的百分率。（2）PFS：是指患者从首次用药至疾病进展或任何原因死亡的时间。OS：是指患者首次用药至任何原因死亡的时间。（3）采用流式细胞仪检测患者治疗前后CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+等细胞免疫指标，分析T淋巴细胞亚群变化情况。（4）生活质量评分主要记录精神情绪、睡眠、食欲及体力状况，以数字0～5分表示，0分为无干扰，2～4分为一般干扰，5分为严重干扰。根据受干扰的程度分别记录。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 近期疗效

42例患者均可评价疗效。其中1例CR（鼻咽癌患者），6例PR（非小细胞肺癌1例，乳腺癌2例，胃癌1例，结肠癌1例，鼻咽癌1例），30例SD，5例PD（肝癌3例，小细胞肺癌1例，胰腺癌1例），ORR为16.7%。

2.2 治疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化

患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD8+等免疫指标均明显降低，显示晚期恶性肿瘤患者存在着严重细胞免疫功能缺陷。经CIK治疗后上述指标数值显著提高（P＜0.05）。结果见表1。

2.3 生活质量对比

CIK治疗后，25例（60%）患者精神状态好转，27例（64%）患者睡眠质量改善，20例（48%）患者食欲增加，26例（62%）患者体力状况提高。

表1 患者治疗前后外周血免疫指标变化

2.4 远期疗效

所有患者均以电话形式进行随访，随访时间从2009年3月1日至2011年10月31日，随访率100%，随访资料完整。本组患者中位PFS为8.1个月，中位OS12.8个月。见图1。

2.5 不良反应观察

绝大部分患者输注CIK过程中无明显不良反应，仅5例出现一过性发热，体温最高为38.8℃，经处理后很快缓解，未影响治疗。

3 讨论

图1 Kaplan-Meier患者总生存期生存曲线（随访时间单位：月）

晚期恶性肿瘤患者由于机体一般状态差，KPS评分低，无法耐受手术、放疗、化疗等治疗手段，而单纯的姑息治疗效果又不理想，因此寻找更有效、安全的治疗手段成为目前研究关注的焦点。在众多的治疗手段中，生物治疗凭借其独特的作用逐渐发展成为肿瘤综合治疗的第四大模式，作为手术、放疗、化疗的有益补充。在这其中以CIK细胞治疗最具代表性，临床应用也最广泛。

CIK全称为细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cell），其本质是人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞[1]，具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和非主要组织相容性复合体（MHC）限制性杀瘤的优点。

鉴于上述特点，也为了寻求新的抗肿瘤治疗手段，近年来国内外的许多研究机构开展了CIK细胞基础与临床应用的探索、研究。比如基础研究方面，Hongeng等[2]用CIK细胞对多种肿瘤细胞株进行体外杀伤实验，结果表明CIK细胞对这些肿瘤细胞株的溶瘤活性显著高于外周血淋巴细胞。另外其他的实验也提示CIK细胞本身能活化肿瘤细胞凋亡基因，使得FLIP、DAD1和survivin基因表达上调，从而诱导肿瘤细胞凋亡[3]。受到基础研究结果的鼓舞，临床上对CIK细胞的使用也逐渐进入实质性阶段，从血液系统肿瘤到实体瘤，从辅助治疗到姑息性治疗，应用范围越来越广，其增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点也得到较充分的体现。例如Chen等[4]学者用CIK细胞治疗63例晚期恶性肿瘤患者，结果总体疾病控制率（disease control rate，DCR）为44.46%，与化疗疗效相近，且患者生活质量得到明显改善，疗效显著。其他的一些机构同样也有类似的报道[5-6]。在本研究中，42例患者ORR为16.7%，接近于化疗疗效，与国内外文献报道水平相似，体现了CIK细胞具有一定的临床应用价值。

我们的实验结果还表明，通过CIK回输治疗晚期恶性肿瘤患者，与单纯、常规姑息性治疗相比，在远期疗效的观察指标比较中也表现出一定的优势，其原因可能与患者机体免疫功能提高有密切关系。Hernberg等[7]发现恶性肿瘤患者外周血CD4+/CD8+比值升高是一项独立的预后因素，CD4+绝对数目增加，比值升幅越大，诱导患者产生特异性抗肿瘤免疫反应越强烈，预后也越好。我们这一临床研究恰恰与此吻合，经CIK治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD56+等数量以及CD4+/CD8+比值均明显升高，提示机体免疫功能显著增强。同时生存分析数据也显示患者的PFS和OS分别为8.1个月与12.8个月，与国内外文献报道的水平相当。

在本研究中，60%以上的患者经CIK细胞治疗1个疗程后出现食欲增强、睡眠质量改善、体力增加、精神状态好转的征象。值得一提的是我们纳入的研究对象多为中、老年患者，体质普遍较虚弱，通过CIK治疗不仅延长了生存期，改善了生活质量，还避免了因放、化疗的严重不良反应所导致的痛苦，Liu等[8]专家的临床研究结果也证实相同的观点。CIK治疗的主要反应是发热，多数出现在治疗后4～6 h，但人数较少，仅5例，体温最高为38.8℃，经消炎痛栓处理后退热，不影响治疗。

综上所述，CIK细胞是一种安全可靠、无明显不良反应的肿瘤治疗方法，具有一定的应用前景和推广价值。但怎样与其他治疗手段结合以提高疗效，如何更深入挖掘CIK细胞的抗肿瘤作用机制，提高杀瘤活性等，仍需作进一步深入的研究。

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