大孔树脂富集续断中总皂苷的测定

李 玲，谢 峥

（荆门市第二人民医院，湖北 荆门 448000）

续断又名龙豆、属折、和尚头、川续断等。为川续断科植物川续断DipsacusasperWall.exHenry的干燥根。广泛分布于四川、湖北、云南、西藏等地。资源极为丰富。在《神农本草经》中被列为上品，味苦、辛、微涩，性微温。功能为补肝肾、养筋骨、通关节、和血脉，安胎止血。生品续筋骨、通血脉力胜，多用于风湿痹痛，跌打损伤；炒用补肝肾、安胎止血力强，多用于肾虚腰痛，崩漏胎滑诸症。现代研究已经证明续断中含有生物碱、皂苷类等多种化学成分[1]。本文对续断中总皂苷进行含量测定。

1 仪器与试药

UV-VIS L-7240检测器；UV-754（上海第三分析仪器厂）;RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；AS2060B超声仪（AUTOSCIENCE）；大孔吸附树脂DM101（天津农药股份有限公司树脂分公司）；川续断药材（购自恩施）。

2 实验方法及结果

2.1 总皂苷的提取

精密称取80℃干燥后的川续断药材1 kg，打成粉末，用95%的乙醇回流提取3次，每次加8倍量乙醇，分别提取至沸腾后计时1.5、1、1 h，过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，转入坩埚中水浴挥干，得浸膏，称重702.7 g，比重0.98。

取6.25 g浸膏水浴挥干，称重为1 g，蒸馏水定容至100 mL，后不再进行任何处理，作为样品I；另取50 g浸膏用蒸馏水定容至500 mL，取20 mL作为样品Ⅱ；另取120 mL溶液分别用110 mL、50 mL、50 mL的水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇层（上层），回收正丁醇至干，用蒸馏水定容150 mL作为样品Ⅲ。

2.2 DM101大孔树脂对总皂苷的吸附性能考察

2.2.1 大孔吸附树脂的预处理 称取20 g大孔树脂，用10倍量无水乙醇浸泡24 h，然后用乙醇洗至洗出液∶水=1∶5无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗至无醇，湿法装柱备用。

2.2.2 大孔吸附树脂吸湿率测定 称取3份2 g未处理的树脂，经过预处理后称重分别为2.2、2.1、2.3 g，计算得出吸湿率为10%。

2.2.3 吸附容量的测定 取1 g续断干膏制成100 mL水溶液，准确称取已处理过的大孔树脂6 g加入续断水溶液中，进行摇床，定时取样，进行香草醛反应，测定水溶液中皂苷的含量。根据取样时间和吸附量做吸附曲线，结果见表1、图1。

表1 取样时间和吸附容量

图1 取样时间和吸附量的吸附曲线图

结果表明其吸附时间主要在前9 h，在24 h达到饱和。同时也可以计算出大孔树脂对总皂苷的吸附量为55.6 mg/g。

2.2.4 大孔树脂的用量探索 取50 mL续断的水溶液放入已处理过的4 g大孔树脂中摇床24 h，过滤、将滤液水浴挥干，称重1 g，用甲醇定溶至10 mL。另取50 mL续断的水溶液，水浴挥干，称重1.3340 g，甲醇定容至10 mL，作为对照品。取样品和对照品各5 uL，进行香草醛反应，测定其吸光度，计算得到大孔树脂对总皂苷吸附量为60.2 mg/g，对生药吸附量为1.007 g/g。

2.3 含量测定方法学考察

2.3.1 对照品溶液的配置 精密称取黄芪甲苷标准品2.9 mg，用甲醇溶解并定溶于5 mL容量瓶中作为对照品溶液。

2.3.2 最大吸收波长的测定 分别取对照品溶液40 μL和总皂苷溶液40 μL进行香草醛反应显色后于紫外扫描测定，对照品和样品均在（532±2）nm处呈现最大吸收。

2.3.3 线性关系考察 分别取黄芪甲苷对照品溶液60、80、120、180、360 uL，水浴挥干溶剂，进行香草醛反应，于532 nm处测定吸收度，根据样品量（x）和吸收值（Y）可得回归方程y=15.297x－0.0517，R²=0.999。

2.3.4 精密度考察 精密吸取对照品溶液80 uL，进行香草醛反应，测定吸光度，并重复5次，结果表明精密度良好，RSD为0.75%。

2.3.5 显色稳定性的考察 取同一对照品80 uL，按项下操作显色后每隔20 min测定1次吸光度，结果表明，在显色后60～100 min之间吸收度很稳定（RSD=1.037%），但100 min后随着时间的延长，吸收度逐渐上升。所以测定应在显色后50～100 min之间进行。

2.4 解吸附实验及样品含量测定

将样品Ⅱ、Ⅲ分别加入已处理并填装好的大孔树脂柱中（湿法上样），依次用蒸馏水、30%、50%、70%、90%乙醇洗脱至Lieberman反应为阴性为止，收集不同浓度的乙醇洗脱液，浓缩至干，用甲醇定容。进行香草醛反应，测定结果见表2～3。

测定结果表明Ⅱ、Ⅲ样品的70%、90%乙醇洗脱部分基本不含三萜皂苷成分，而两者30%、50%乙醇洗脱部分共洗脱了91.03%、96.64%的皂苷，反映了其良好的解吸附能力。计算样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中总三萜皂苷的含量。结果见表4。结果表明，大孔树脂能够很好的富集续断中的总三萜皂苷。

3 讨论

续断是常用中药，其有效部分为三萜皂苷，但除三萜皂苷外，还含有较多的糖、蛋白质等杂质，影响皂苷的测定，从样品中除尽又比较困难。因此需要对续断中的总皂苷进行富集来排除其他因素的干扰。通常对于皂苷的富集采用正丁醇萃取法。由于此法的富集程度有限，作者决定探索一种更好的方法来解决该问题。结果找到了DM101型大孔树脂并结合正丁醇萃取来处理样品效果很好，不仅吸附快，解吸也快，对皂苷的吸附具有很好的选择性。

表2 样品Ⅱ不同浓度乙醇洗脱部分总皂苷的量

表3 样品Ⅲ不同浓度乙醇洗脱部分总皂苷的量

表4 样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中总三萜皂苷的含量

在使用树脂的过程中，需要探索乙醇洗脱的最佳浓度。本文通过使用30%、50%、70%、90%4种不同浓度的乙醇溶液洗脱至Lieberman反应为阴性为止，发现30%、50%的乙醇能洗脱掉90%以上皂苷，具有很强的解吸附能力，可作为总皂苷洗脱的最佳浓度。

对洗脱之后的样品挥干甲醇定容后便可进行含量测定。参考了文献资料后对总皂苷的含量通常采用比色法测定，可以消除杂质干扰。实验结果表明该方法精密度、重现性、稳定性均较好。

[1]Zhong JH,Li CS,Li DD.Progress in research of the active chemical components of Cornus off i cinalis[J].Zhongguo Xinyao Zazhi(Chin J New Drugs),2001,10(11):808-812.