卡介菌多糖核酸对小鼠腹腔单核巨噬细胞吞噬功能的影响

余曦明，杨胜梅，蔡明建，余望贻

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410007；2.湖南斯奇生物制药有限公司，湖南 长沙 410000）

卡介菌多糖核酸（BCG-Polysaccharides nucleic acid，BCG-PSN）是从卡介菌中经热酚法提取多糖、核酸混合而制成的新型免疫调节剂，含有多糖及核酸等多种免疫活性物质。BCG-PSN注射液是目前临床上常用的免疫调节剂，具有调节机体免疫水平，增强机体抗感染和抗过敏的能力，多应用于病毒感染性疾病、自身免疫性疾病等的辅助治疗。本研究以BALB/c裸鼠及KM小鼠作为研究对象，系统检测了BCG-PSN对裸鼠及正常小鼠的腹腔单核巨噬细胞吞噬功能的影响，以探讨BCG-PSN对小鼠免疫功能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

BALB/c裸鼠，雄性，体质量18～22 g；KM小鼠，雄性，体质量18～22 g，年龄6～8周龄，均购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号为SCXK（湘）2009-0004。

1.2 药物及试剂

BCG-PSN注射液（商品名：斯奇康注射液，湖南斯奇生物制药有限公司，批号：S20100410，规格：0.5 mg/mL，以0.5 mgBCG-PSN干粉溶于1 mL生理盐水制成；BCG-PSN主要含质量分数为75.1%的核酸，质量分数为7.76%的多糖，质量分数为0.66%的蛋白质；临用时用生理盐水配制成相应浓度的溶液）；注射用胸腺肽（西安迪赛生物药业有限责任公司，产品批号：1105281-7，规格：40 mg/支）；生理盐水（湖南中医药大学第一附属医院）；5%鸡红细胞混悬液；1%淀粉自制。

1.3 方法

1.3.1 动物分组 将50只裸鼠按照随机数字表法分为5组：BCG-PSN高、中、低剂量组，裸鼠阳性药物（胸腺肽）对照组，裸鼠正常对照组，每组10只；KM小鼠，空白对照组10只。

1.3.2 给药 BCG-PSN高、中、低剂量组：根据成人用药量按体表面积换算成小鼠的等效剂量为中剂量（6.25 mg/kg），低剂量为中剂量的1/2倍，高剂量为中剂量的2倍；阳性对照组：予注射用胸腺肽给药，按成人用药量换算成小鼠的等效剂量（10 mg/kg）；裸鼠正常对照组和KM空白对照组：生理盐水。各组用生理盐水调整药物浓度后均按0.5 mL/只腹腔注射，隔日1次，连续21 d。

1.3.3 指标测定 药物对免疫缺陷的动物腹腔单核巨噬细胞吞噬功能的影响：采用半体内法，于停药后的第1天动物腹腔注射无菌的1%淀粉2 mL，20 h后腹腔注射5%RBC鸡红细胞悬液2 mL，30 min后颈椎脱臼处死动物，轻揉腹部，然后剖开腹腔，取出腹腔洗液分别滴于两张载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30 min。孵毕，置生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇固定，瑞氏染色、镜检，计算吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100、吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 BCG-PSN对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的影响

裸鼠正常对照组腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬百分率下降，与KM对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。与裸鼠正常对照组相比，BCG-PSN高剂量组能显著提高裸鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表1。

表1 药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的影响（±s）

表1 药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的影响（±s）

注：与KM空白对照组比较*P＜0.05；与裸鼠正常对照组比较#P＜0.01；与阳性对照组比较△P＜0.01。

BCG-PSN高剂量组 12.5 42.40±6.55#△BCG-PSN中剂量组 6.25 38.00±4.19△BCG-PSN低剂量组 3.125 35.90±4.93裸鼠阳性对照组 0.5mL 31.67±4.87裸鼠正常对照组 0.5mL 35.22±5.65*KM空白对照组 0.5mL 40.50±5.17

2.2 BCG PSN对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率的影响

裸鼠正常对照组腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬指数下降，与KM对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。与裸鼠正常对照组相比，BCG-PSN高、中、低剂量组能明显提高裸鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数，差异有统计学意义（P＜0.01）。结果见表2。

表2 药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数的影响（±s）

表2 药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数的影响（±s）

注：与KM空白对照组比较*P＜0.05；与裸鼠正常对照组比较#P＜0.01；与阳性对照组比较△P＜0.01。

组别 给药剂量（mg/kg）吞噬指数BCG-PSN高剂量组 12.5 0.74±0.14# △BCG-PSN中剂量组 6.25 0.76±0.12# △BCG-PSN低剂量组 3.125 0.72±0.11#裸鼠阳性对照组 0.5 0.58±0.14裸鼠正常对照组 0.5 0.53±0.08*KM空白对照组 0.5 0.64±0.09

3 讨论

BCG-PSN系经热酚法从灭活的卡介菌提取而来，主要成分包括脂多糖和核酸。关于BCG-PSN的作用机理，通常认为可能是：通过调节机体内的细胞免疫、体液免疫、刺激网状内皮系统，激活单核 巨噬细胞功能，增强自然杀伤细胞功能来增强机体抗病能力；通过稳定肥大细胞，封闭IgE功能，减少脱颗粒细胞释放活性物质，以及抗乙酰胆碱所致的支气管痉挛作用，达到抗过敏功能；增强体内巨噬细胞的自然细胞毒效和诱导干扰素形成，因而还具有增强抗感染和抗肿瘤细胞生长的作用。

巨噬细胞是一类参与免疫反应的细胞，在调节淋巴细胞和免疫应答过程中起着重要作用[1-2]。巨噬细胞的主要功能有：直接吞噬和杀灭多种病原微生物；加工和递呈抗原，激活特异性免疫反应；合成和分泌多种生物活性物质，调节免疫应答[3]。巨噬细胞不仅参与机体的特异性免疫反应与非特异性免疫反应，而且还是两种免疫反应建立相互联系的“桥梁细胞”，并作为效应细胞起作用。单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一，它具有吞噬、加工和处理抗原物质，并把抗原传递给淋巴细胞，使其产生抗体或淋巴因子，加强杀伤靶细胞的能力。其吞噬功能不仅是免疫系统维持自身内环境稳定的重要手段，也是机体产生免疫应答的基础，大多数抗原经巨噬细胞处理后，免疫原性都大大增加。

裸鼠是随着近代医学发展，特别是免疫学和肿瘤学研究的需要，在近十几年中发展起来的动物模型。它是先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠由于无胸腺，因此缺乏免疫反应，是免疫缺陷动物。本实验以BALB/c裸鼠作为免疫抑制小鼠模型，裸鼠正常对照组腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数均比KM空白对照组显著降低，可认为裸鼠的免疫能力低于正常小鼠；而BCGPSN高剂量组能显著提高裸鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率，BCG-PSN高、中、低剂量组均能显著提高裸鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数，说明BCG-PSN能够增强裸鼠的吞噬功能，通过增强其表达提高裸鼠的免疫功能。本研究结果提示BCG-PSN有较好的免疫增强作用，其研究结果为临床进一步用药奠定了良好的实验基础。

[1]何 慧,潘育芳.甘露聚糖肽片对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响[J].国际医药卫生导报,2006,12(11):12-13.

[2]李淑莲,付 克,刘睿姝.柴芩清肝胶囊对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响[J].中医药信息,2009,26(1):88.

[3]Nomura M,Kaji A,Ma W,et al.Suppression of cell transformation and induction of apoptosis by caffeic acid phenethyl ester[J].Mol Careinog,2001,1(2):83-93.