应用细胞DNA倍体定量分析联合HR－HPV检测筛查宫颈癌

贾咏存

(宁夏回族自治区人民医院妇产科 宁夏 银川 750021)

据统计，我国每年新发宫颈癌病例13.15万，约有8万人死于宫颈癌，在妇科恶性肿瘤中病死率居第2位。高危型人乳头状瘤病毒(high－risk types human papillomavirus，HR－HPV)慢性持续感染是宫颈癌发生的主要因素[1]。目前，在宫颈癌的筛查中，细胞DNA倍体定量分析技术由于具有较高的检出率而被认为是筛查的金标准。为了探讨应用细胞DNA倍体定量分析联合高危型人乳头状瘤病毒(HR－HPV)检测筛查宫颈癌能否降低漏诊率，提高准确率，我们对同时行宫颈液基细胞学检查、细胞DNA倍体定量分析及HPV－DNA分型检测的2153例患者的临床资料进行分析总结。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例来源于2009年5月～2011年5月在我科同时行宫颈液基细胞学检查、细胞DNA倍体定量分析及HPVDNA分型检测的2153例患者，年龄20～65岁，平均(38.59±7.93)岁。

1.2 宫颈液基细胞学检查 采用TBS分级诊断系统。鳞状细胞可概括为4级:良性、不典型性鳞状上皮细胞(ASC)、鳞状上皮内病变(SIL);包括低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)。腺细胞分为不典型腺细胞(AGC)、倾向肿瘤的不典型腺细胞(AGC－fn)、宫颈管原位癌、腺癌。

1.3 HPV－DNA分型检测 采用HybriMax技术检测21种HPV亚型。实验步骤:样本HPV－DNA提取，PCR扩增，核酸分子快速导流杂交，结果判读，按芯片上HPV亚型分布的相应着色位点判断。HPV高危型(HR－HPV)15种，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68;低危型(LR －HPV)6 种，包括 HPV6、11、42、43、44 和 CP8304。

1.4 细胞DNA倍体定量分析 所有Feulgen染色片用AcCell全自动细胞图像分析系统进行扫描处理。以同张玻片上的100个正常上皮细胞为标准对照细胞，所测出的平均光密度(IOD)为2倍体的参考值，其变异系数(CV)值小于5%。根据诊断系统软件所做出的细胞DNA倍体定量分析结果，有4种情况:①以正常2倍体细胞为主(DNA指数为1)，未见异倍体细胞及异倍体细胞峰，诊断正常。②当DNA指数在1～2之间时，为少数处在增值周期的细胞，这些细胞多为炎症细胞或HPV感染细胞。③当DNA指数大于2.5时及2倍体与4倍体之间的细胞数超过被测细胞总数的10%时，诊断异常，建议活检。④当DNA指数大于等于4.5时，为肿瘤细胞。凡是有DNA指数大于2.5细胞的玻片，都要在显微镜下逐一对指数大于2.5的细胞进行核实，需要跟踪复查。

1.5 组织病理学检查 对上述3项检查任意1项或几项同时有异常者行电子阴道镜检查下多点活检，在正常转化区内3、6、9、12点行多点活检;在异常转化区(因致病因子的激发而形成的区域)内病变处多点活检，做出病理诊断。

1.6 统计学处理 使用SPSS 10.0软件，组间率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 2153例患者中，液基细胞学检查异常者98例(4.6%)，细胞DNA倍体定量分析异常和(或)HPV－DNA分型检测HR－HPV阳性者197例(9.2%)，两者相比较，差异无统计学意义(P＞0.05);其中有59例患者液基细胞学检查异常，其细胞DNA倍体检查也异常，占60.2%。

2.2 HPV－DNA分型检测结果 2153例患者的HPV－DNA分型检测中，结果为HPV－DNA阴性者1269例(58.9%)，LR－ HPV阳性者756例(35.1%)，HR －HPV阳性者128例(5.9%);其中有HR－HPV感染同时细胞DNA倍体检查异常者121例，占94.5%，可见HR－HPV感染可能是导致细胞DNA倍体异常的一个重要因素。

2.3 细胞DNA倍体定量分析联合HR－HPV检测与液基细胞学检查的病理诊断结果比较 对236例液基细胞学异常者、或检出DNA异倍体和(或)有HR－HPV感染的病例行电子阴道镜下宫颈活检，病理学检查结果见表1。

表1 细胞DNA倍体分析、HPV－DNA分型检测与液基细胞学检查的病理诊断结果比较(例，%)

以宫颈活检病理学诊断宫颈上皮内瘤变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)和宫颈癌，检出DNA异倍体和(或)有HR－HPV感染者共197例，其中有164例病理诊断异常，占83.2%;液基细胞学异常者共98例，其中有41例病理诊断异常，占41.8%，两者比较，差异具有统计学意义(P ＜0.05)。

3 讨论

正常人体的体细胞具有较恒定的DNA含量，为二倍体。当细胞受到致癌因素的影响后，染色体上的基因发生突变，导致DNA含量的改变，从而出现异倍体细胞。细胞DNA倍体定量分析技术通过对细胞核内DNA的含量进行测定，掌握正常细胞周期变化特征，以此及早地发现恶性增殖的肿瘤细胞。用细胞DNA倍体定量分析系统进行宫颈癌及癌前病变的诊断在国外已有大量报道[2，3]。本研究中，检出率从液基细胞学检查的41.8%提高到83.2%。而传统的宫颈癌检查技术，如液基细胞学检查，只有在细胞形态发生改变时才能检测出宫颈癌，会有漏诊的情况。此外，采用细胞DNA倍体定量分析技术的优越性还体现在，一般妇科医师认为宫颈光滑者无需检查宫颈癌，只有出现重度宫颈糜烂才会引起重视。但是，宫颈癌前病变的发生与宫颈糜烂的程度是不成比例的。

HR－HPV的持续性感染能够干扰有丝分裂，导致染色体数量和结构的异常，即异倍体的产生，而异倍体又是宫颈癌前病变中一项显著的标志[4]。本研究结果显示，HR－HPV感染患者中有94.5%的细胞DNA倍体检查异常，说明两者在宫颈癌前病变的进展过程中存在着内在联系。如这些患者的HRHPV感染不能得到有效地阻断，则加大了进展为宫颈浸润癌的风险。

总之，细胞DNA倍体定量分析系统采用显微分光光度原理与图像处理分析技术相结合，能快速对大量细胞核的结构和DNA含量进行分析，如结合HPV－DNA分型检测，能对癌前病变的性质和发展趋势做出评估，有助于癌变的早期诊断。特别是对于细胞学诊断为ASCUS或LSIL的患者，仅检测HR－HPV可能会引起检测结果的不稳定性及治疗方案的不确定性[5];如果联合细胞DNA倍体定量分析，将为病变的生物学行为提供更多的信息，提高诊断的准确性，降低漏诊率。

[1]Wright TC Jr，Massad LS，Dunton CJ，et al.2006 Consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical cancer screening tests[J].Am J Obstet Gynecol，2007，197(4):346

[2]Lorenzato M，Caudroy S，Nou JM，et al.Contribution of DNA ploidy image cytometry to the management of ASC cervical lesions[J].Cancer，2008，114(4):263

[3]Canda MT，Demir N，Sezer O，et al.Clinical results of the liquid based cervical cytology tool，Liquiprep，in comparison with conventional smears for detection of squamous cell abnorm alities[J].Asian Pac J Cancer P rev，2009，10(3):399

[4]Peter M elsheimer，Svetlana V inokurova，N icolas W en tzen sen，et al.DNA aneup loidy and integration of human papillom avirus type 16 E6/E7 oncogenes in intraepithelial neoplasia and invasive squamous cell carcinoma of the cervix uteri[J].Clinical Cancer Research，2004，10:3059

[5]焦红丽，冶亚平，张佳立，等.DNA倍体分析联合HR－HPV检测在宫颈癌筛查中的作用[J].中国妇幼保健，2010，25(24):3399