乳腺癌中MTDH的表达及意义

尹崇高，高乃尧，李洪利，李文通，张宝刚*

（1.山东省潍坊医学院护理学院;2.科研处医学研究实验中心;3.病理学教研室，山东潍坊 261053;4.山东省潍坊卫生学校教务科，山东潍坊 261041）

乳腺癌中MTDH的表达及意义

尹崇高1，高乃尧4，李洪利2，李文通3，张宝刚3*

（1.山东省潍坊医学院护理学院;2.科研处医学研究实验中心;3.病理学教研室，山东潍坊 261053;4.山东省潍坊卫生学校教务科，山东潍坊 261041）

*通信作者（corresponding author）:zbg111@yahoo.com.cn

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，其侵袭转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因［1］。

近来，美国新泽西癌症研究所和普林斯顿大学的研究人员发现身患严重乳腺癌的患者体内，8号人类染色体的一小部分被重复了多次，肿瘤内一种名为Metadherin（MTDH）基因发生变异，表现异常活跃［2］。本研究探讨MTDH在乳腺癌发病中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例标本:收集潍坊医学院附属医院手术切除乳腺癌标本52例，分别取肿瘤组织和癌旁正常组织（＞5 cm），置于－150℃冰箱保存备用。所有病例均经病理证实，术前均未采取放疗、化疗和免疫治疗。患者平均年龄55.8岁（41～80岁）且均为女性。乳腺癌标本分为高分化10例，中分化26例，低分化16例。20例有淋巴结转移，依据国际抗癌联盟1978年修订的乳腺癌TNM分期标准:Ⅰ期10例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例。患者均知情同意。

1.1.2 主要试剂:免疫印迹法试剂（Sigma公司）;MTDH抗体（zymed公司）;TRIquick Reagent（北京索莱宝科技有限公司）;MmLV第一链cDNA合成试剂盒、PCR扩增试剂盒（上海生工生物有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 免疫印迹法检测MTDH蛋白表达情况:基因组蛋白抽提试剂盒提取癌组织及癌旁正常乳腺组织中的蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，半干转法转膜，5%奶粉封闭，杂交ECL发光试剂盒显影、X片感光后显影定影，清水冲净晾干。应用BiospectrumAC凝胶成像分析系统扫描照相保存图片。

1.2.2 RT-PCR检测MTDHmRNA表达情况:用TRIquick Reagent提取乳腺癌及癌旁乳腺组织中的总RNA，反转录合成第一链cDNA，扩增目的基因。MTDH上游引物为5'-TGC CTCCTTCACAGACCAAGTCTGAA-3'，下游引物为5'-CTATCT CATCTGCAGCCGA-3'，目的条带长度为411bp。以β-actin作为内参照，β-actin上游引物为5'-CCTGTGGCATCCACGAA ACT-3'，下游引物为 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'，目的条带长度为315 bp。PCR琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后取出凝胶，于BiospectrumAC凝胶成像分析系统下照相并扫描分析。

1.3 统计学分析:MTDH蛋白和mRNA的表达量用组织中蛋白的A值与内参照的A值做比值表示。组织中MTDHmRNA、蛋白表达率分析及蛋白表达与临床病理特征的关系采用χ2检验，mRNA、蛋白的表达量用独立样本t检验。

2 结果

2.1 乳腺癌及癌旁乳腺组织中MTDH蛋白的表达:52例乳腺癌组织中有46例检测到MTDH蛋白的表达，表达量为1.213±0.364，表达率为88.5%，显著高于癌旁乳腺组织中有15例检测到MTDH蛋白的表达，表达量为0.392±0.178，表达率为28.8%（P＜0.01）（图1）。

2.2 MTDH蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的关系:MTDH蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关（P＜0.01），与TNM分期、分化程度无关。

2.3 乳腺癌及癌旁乳腺组织中MTDHmRNA的表达:在乳腺癌组织中MTDHmRNA表达率为82.7%（43/52），表达量为1.458±0.535，显著高于在癌旁乳腺组织中表达率为30.8%（16/52），表达量为 0.767±0.318（P＜0.01）（图2）。

图1 MTDH蛋白在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达Fig 1 Expression of MTDH protein in breast cancer and normal breast tissue

3 讨论

乳腺癌发生侵袭、转移导致患者预后不良，当出现转移时，5年生存率由98%大幅下降至27%［3］。近来，美国研究人员对侵袭性乳腺癌患者的肿瘤样本采用了集中方法来寻找使肿瘤扩散的基因，发现肿瘤内有一种名为MTDH基因发生变异，表现异常活跃。该基因可以帮助癌细胞黏着在其他器官的血管壁上，导致癌细胞更易扩散。

MTDH又称为LYRIC，AEG-1和3D3，是近年来发现的一个癌基因，MTDH过表达与多种肿瘤的发生发展以及转移密切相关。在哺乳动物中，MTDH是一种极其保守的蛋白，目

图2 MTDH及β-actin mRNA在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达Fig 2 Expression of MTDH and β-actin mRNA in breast cancer and normal breast tissue

前尚未发现在非脊椎动物中存在该蛋白。MTDH在极化的上皮组织中高度保守，和闭锁小带-1一起定位于紧密连接结构中。大部分正常组织，MTDH表达非常低，甚至检测不到。

本研究结果提示乳腺癌的癌变、侵袭、转移可能与MTDH蛋白、mRNA的高表达有关。

［1］Kim MS，You MK，Rhuy DY，et al.Loquat（Eriobotrya japonica）extracts suppress the adhesion，migration and invasion of human breast cancer cell line［J］.Nutr Res Pract，2009，3:259 －264.

［2］Hu G，Chong RA，Yang Q，et al.MTDH activation by 8q22 genomic gain promotes chemoresistance and metastasis of poor-prognosis breast cancer［J］.Cancer Cell，2009，15:9－20.

［3］冯俊飞，董坚，洪敏，等.CXCR4-siRNA表达载体的构建及其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响［J］.基础医学与临床，2009，29:1286－1290.

R 737.9

A

1001-6325（2012）01-0087-02

2011－01－17

2011－05－25

国家自然科学基金（81072068）;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（BS2010YY071）;山东省高等学校科技计划（J10LF64）