84例慢性淋巴细胞白血病遗传学异常及预后分析

丛 佳，李 辉，周道斌，赵永强，许 莹，李 剑，韩 冰

（中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血液内科，北京 100730）

84例慢性淋巴细胞白血病遗传学异常及预后分析

丛 佳，李 辉，周道斌*，赵永强，许 莹，李 剑，韩 冰

（中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血液内科，北京 100730）

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）技术检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者的遗传学异常，并分析与其他预后指标的相关性及预后价值。方法 回顾性分析采用FISH技术进行着丝粒探针CSP12（12p11.1～12q11.1）和序列特异性探针D13s25（13q14.3）、ATM（11q22.3）、RB1（13q14）、P53（17p13.1）检测过的84例CLL患者的临床及实验室资料。分析FISH技术检测CLL患者中遗传学异常的发生率，并分析遗传学异常与CLL患者年龄、性别、Binet分期、血清乳酸脱氢酶（LDH）、CD38表达、生存期之间的相关性。结果 1）84例CLL患者中，62例有至少有1种遗传学异常，检出率为73.8%。2）共发现5种遗传学异常，依次为13q14缺失（56%）、P53缺失（28.6%）、-12（16.7%）、ATM缺失（13.1%）、+12（13.1%）。其中-12为CLL患者中新发现遗传学异常。3）分析上述5种遗传学异常与年龄、性别、Binet分期、LDH水平及CD38表达的关系，在＞60岁年龄患者里，+12阳性率显著高于＜60岁患者（24%vs 3%，P＜0.05），与性别、Bient分期、LDH水平、CD38表达无关。4）在LDH增高组中，CD38高表达的病例比例增高（67%vs 20%，P＜0.05）。5）伴有del（17p13）或del（11q22）或复杂异常中位生存时间为75个月，单纯具有del（13q14）异常组的中位生存时间为150个月，其他中位生存时间为120月，但两两比较没有达到统计学差异。结论 1）FISH技术是一种在分析CLL患者遗传学异常方面较为快速、准确和敏感的方法;2）CLL患者中除了常见13q14缺失、P53缺失、ATM缺失及+12之外，还可以出现-12异常。

白血病;淋巴细胞;慢性;荧光原位杂交

*通信作者（corresponding author）:daobinzhou@yahoo.com

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphatic leukemia，CLL）是造血系统的一种单克隆性B淋巴细胞增殖性疾病，具有显著的临床预后异质性，一些患者可生存20年以上，另一些患者则在几个月内死亡。虽然Rai、Binet分期是CLL的重要预后指标，其他指标如游离的 CD23（sCD23）、β2微球蛋白（β2-MG）、乳酸脱氢酶（LDH）、CD38、ZAP70（+）、IgVH突变也可预测患者的预后，但各项预后指标均有局限性。最近的研究表明遗传学异常是CLL预后和进展的重要预测因素［1］。本研究探讨CLL患者遗传学异常与其他预后指标的相关性及预后价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2009年2 月～2011年8月北京协和医院住院和门诊收治的84例CLL患者，所有病例诊断均符合张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》第3版［2］。其中男性 56例，女性 28例，男:女比为2.0∶1，年龄36～88岁，中位年龄61岁。

1.2 荧光原位杂交

患者均进行了荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）检测。5种探针:CSP12（12p11.1 ～ 12q11.1）、D13S25（13q14.3）、ATM（11q22.3）、RBl（13q14）及 P53（17p13.1）（北京金菩嘉公司）。按照说明书流程操作，每例患者至少计数200个细胞。阈值采用10例健康人外周血均值+标准差×3。

1.3 研究方法

回顾性分析84例患者的临床资料，包括:CLL的临床Binet分期及实验室检查，乳酸脱氢酶、CD38结果。

1.4 统计学分析

使用SPSS 17.0统计软件，比较用卡方检验及Monta Carlo计算概率值，生存分析采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线和Log-rank检验进行生存率的比较。

2 结果

2.1 患者资料

男性56例，女性28例，男∶女比为2.0∶1，年龄36～88岁，中位年龄61岁。51例有详细病历资料可以进行Binet分期，Binet分期以C期患者为主。所有的患者均进行了FISH检测，有62例患者至少有1种遗传学异常。62例患者进行了CD38检测，17例阳性。62例患者进行了LDH检测，其中13例LDH增高 （表1）。

2.2 FISH结果

遗传学异常的种类包括:13q-（包括RB1缺失或/和D13S25缺失），P53基因缺失，-12，ATM 缺失，+12（图1）。

84例患者中有62例（73.8%）至少有1种遗传学异常:有1例（1.2%）患者同时有4种遗传学异常（13q-、P53基因缺失，ATM缺失，-12共存），有8例（9.5%）同时有3种遗传学异常（13q-，P53基因缺失，ATM缺失，-12 4种缺失中有3种），有19例（22.6%）同时有 2种遗传学异常，有 34例（40.4%）有1种遗传学异常。遗传学异常最常见的为13q-，占56%，其中包括3种形式:D13S25缺失19%，RB1缺失3.6%，二者共缺失33.3%;其他依次为 P53基因缺失（28.6%），-12（16.7%），ATM缺失（13.1%），+12（13.1%）。各种遗传学异常或单独存在，或合并其他异常（表2）。

2.3 比较不同的遗传学异常与性别、年龄、Binet分期、LDH是否增高、CD38是否表达的关系

将检测到的不同遗传学异常同性别、年龄、Binet分期、LDH水平及CD38表达进行比较，发现在＞60岁年龄患者里，+12阳性率显著高于＜60岁患者（24%vs 3%，P＜0.05），未发现其他相关性（表3）。

表1 患者一般资料Table 1 Clinical characteristics

表2 各种不同遗传学异常的结果Table 2 Results of genetics abnormality

图1 各种遗传学异常图像Fig 1 Images of genetics abnormality

表3 FISH检测的遗传学异常与临床及实验室检查的关系Table 3 Relationship of genetics abnormality and clinical characteristics

2.4 CD38表达与性别、年龄、Binet分期、LDH的关系

CD38表达与性别、年龄、Binet分期、LDH是否增高进行比较，发现CD38表达与否与LDH水平是否增高相关，在LDH增高组中，CD38表达阳性的病例比例增高（67%vs 20%，P＜0.05），而与性别、年龄分组、Binet分期无关。

2.5 随访

对53例有联系方式的患者进行了电话随访，随访至2011年9月，中位随访时间26（1～150）个月。5例患者因疾病进展于发病后1、3、7、16和56个月死亡，其中1例患者死于CLL继发的难以控制的自身免疫性贫血，另外4例患者死于原发病进展。5例患者中3例患者具有del（17p13）或del（11q22）异常或复杂异常（定义为两种或两种以上遗传学异常）。其中9例单纯del（13q14）异常中，无1例患者死亡。生存分析结果显示，各预后相关因素中，年龄（＞60岁 vs＜60岁）、Binet分期、CD38与生存期无明显相关性（P＞0.05）。各遗传学异常中，伴有del（17p13）或del（11q22）或复杂异常预计中位生存时间为75个月，单纯具有del（13q14）异常组的预计中位生存时间为150个月，其他患者预计中位生存时间为120月（图2）。

图2 各种遗传学异常的生存率比较Fig 2 Survival time of patients with different genetics abnormality

3 讨论

CLL作为一种预后异质性很强的疾病，评价预后指标众多，而越来越多的研究表明遗传学异常具有重要的判断预后的价值［1］。但常规染色体显带技术仅20%的人可检测到克隆性遗传学异常，随着间期FISH在CLL细胞遗传学研究中的应用，超过80%的CLL患者可检测到基因组异常，大大提高了CLL的基因异常检出率［3］。

国内外多数研究［3-6］发现，通过FISH技术检测的CLL患者的遗传学异常阳性率在64%～82%，del（13q14）最常见，而 del（17p13）、+12和 del（11q22）不同研究比例略有不同。本研究中结果同以往的研究类似，但新发现12号染色体缺失。本研究12号染色体缺失信号比例平均为10.23%（7%～22%），经过多人多次复核，明显高于我院12号染色体缺失的阈值6.02%，排除了假阳性的可能。虽然从年龄分组、性别、Binet分期、LDH水平以及CD38表达未发现中12号染色体缺失CLL患者有何特殊之处，但由于随访时间及患者数有限，其临床及预后意义有待于观察或其他研究进一步证实。

以往的研究［7-8］显示具有+12遗传学异常更容易出现不典型的形态，容易向幼淋细胞白血病转化，表达更强的SmIg与FMC7，预后更差，Binet分期也更晚，容易在B或C期。本研究发现+12遗传学异常在＞60岁年龄组中更易出现，但是没有发现与Binet分期的相关性，原因可能与标本例数偏少有关。

各种遗传学异常对预后的影响各不相同。伴del（13q14）［3］异常的患者中位生存期133个月，无治疗生存期长达92个月。另一项研究［9］发现伴有其他易位的患者中位无治疗生存期明显短于单纯del（13q14）患者。而伴P53基因（17p13）缺失CLL患者，病程进展快、瘤细胞负荷高、多处于疾病晚期（Binet B/C期），对多种治疗（包括核苷类似物）反应差，生存期短［10-11］。ATM 基因位于染色体11q22，伴有ATM基因缺失的CLL患者发病年龄较年轻，一般＜55岁，且病程常表现为侵袭性，预后差，提示del（11q22）可作为疾病进展的一个早期指标［12-13］。本研究同样发现，单纯 del（13q14）的中位生存期最长，而伴有del（17p13）或del（11q22）或复杂异常中位生存时间最短，但未达统计学差异，这可能与本研究随访样本量以及随访时间不够有关，可进一步加长随访时间。

CD38的表达作为慢性淋巴细胞白血病患者独立的预后因素逐渐引起人们的重视。有研究［14］发现CD38表达水平与IgV（H）的突变密切相关，CD38+的患者预后更差。另一项研究［15］发现CD38+患者无进展生存期（PFS）较CD38-者明显缩短，5年PFS分别为37%与75%。CD38还是疾病侵袭性的一个重要标志，无论患者的临床分期如何，即使处于Rai分期的0期，CD38+患者亦常具有明显的侵袭性。本研究发现LDH增高的患者中表达CD38的比例更高，而LDH在CLL中与肿瘤负荷密切相关，这同样提示CD38表达为预后不良指标，今后在临床工作中也需要引起我们重视。

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Cytogenetic abnormalities in patients with chronic lymphocytic leukemia and their prognostic significance

CONG Jia，LI hui，ZHOU Dao-bin*，ZHAO Yong-qiang，XU Ying，LI Jian，HAN bing

（Dept.of Hematology，PUMC Hospital of CAMS，Beijing 100730，China）

ObjectiveTo investigate the significance of fluorescence in situ hybridization（FISH）in detecting cytogenetic aberrations in Chinese patients with chronic lymphocytic leukemia（CLL）and explore the characteristics and prognostic significance of cytogenetic aberrations in Chinese patients with CLL.MethodsEighty-four cases of CLL detected by FISH with a panel of probes（CSP12（12p11.1 ～12q11.1），D13s25（13q14.3），ATM（11q22.3），RB1（13q14），p53（17p13.1））were retrospectively analyzed by clinical manifestations，laboratory tests and prognosis.ResultsCytogenetic aberrations were found in 62 of the 84 CLL patients（73.8%）.The most frequent abnormality detected was del（13q14）（56%），followed by del（17p13）（28.6%），del12（16.7%），del（11q22.3）（13.1%），trisomy 12（13.1%）.There was no significant relationship among cytogenetic aberrations and sex，Binet stages，level of lactate dehydrogenase，expression of CD38.The proportion of CD38 expression in LDH elevation group was significantly higher than that of LDH normal group.The median survival time with del（17p13），or del（11q22.3）or complex cytogenetic aberrations was 75 months，the median survival time with sole del（13q14）was 150 months，the median survival time with the others was 120 months，but there was no significant deference with each other.ConclusionsFISH is a rapid，accurate and sensitive technique for detection of cytogenetic aberration in CLL.The frequencies of the chromosomal abnormalities in Chinese CLL patients are similar to those in Western countries，but the aberration of 12 deletion is a novel discovery.

Leukemia;lymphocytic;chronic;fluorescence in situ hybridization

R 557+.4

A

1001-6325（2012）01-0001-06

2011-09-30

2011-11-23