念珠菌引起泌尿系统感染的耐药状况分析

程永贵 段穷 孙大勇

近年来随着广谱抗菌药物及免疫抑制剂在临床的广泛应用及介入治疗的不断增加，使患者罹患真菌感染的比例增加，特别是在中老年患者及应用免疫抑制剂的患者，在念珠菌引起的泌尿系统感染在泌尿系统感染的致病菌中已由2001年的的第十位上升到2010年的第五位。我院自2001年1月至2010年12月期间从门诊和住院患者急、慢性尿路感染患者中分离到的301株念珠菌，年龄从48岁到92岁，其中女265例(占88%)，男36例(占12%)，用科玛嘉显色培养基和法国梅里埃公司的VITEK32自动微生物鉴定仪鉴定到种，并用ROSCO纸片法对常用抗真菌药物进行了药敏试验，了解我院念珠菌的耐药情况，为临床提供参考

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 实验用菌株来自2001年1月至2010年12月期间吉林省人民医院泌尿系感染的患者共检出301株念珠菌，其中白念珠菌 210株(占69.8%)，光滑念珠菌 55株(占18.2%)，热带念珠菌30株(占 10%)，克柔念珠菌3株(占1%)，其他念珠菌3株(占1%)。尿液为晨尿(留取方法为:清洗外阴后，留取中段尿，2 h内送检)［2］。用法国生物梅里埃公司的VITEK32尿卡(UID-3)进行培养及计数，用科玛嘉显色培养基鉴定到种，显示翠绿色为白念珠菌，篮色为热带念珠菌，藕合色为光滑念珠菌，粉色为克柔念珠菌，其他颜色用法国梅里埃公司的VITEK32的念珠菌鉴定卡(YBC)细菌鉴定到种。

1.1.2 抗菌药物及培养基 抗真菌药物纸片、真菌培养基(Shadomy)均为丹麦ROSCO公司产品。购自广洲迪景公司。

1.2 方法

1.2.1 尿路感染的尿液标本应用法国生物梅里埃公司的VITEK32尿卡(UID-3)进行培养及计数，且细菌数＞104cfu/ml为阳性。

1.2.2 菌种鉴定 用科玛嘉显色培养基鉴定到种，显示翠绿色为白念珠菌，篮色为热带念珠菌，藕合色为光滑念珠菌，粉色为克柔念珠菌，无色及颜色不清者用法国梅里埃公司的VITEK32的念珠菌鉴定卡(YBC)细菌鉴定到种。

1.2.3 抗生素敏感试验 采用K-B法。用ROSCO公司生产的药敏纸片两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶(直径均为9 mm)，采用其专用念珠菌药敏培养基(Shadomy)。质控菌株为白念珠菌ATCC64550和白念珠菌ATCC64548及光滑念珠菌2238。先将Shadomy培养基丛4℃冰箱中取出放在室温20 min左右，挑取纯化的念珠菌用生理盐水制成0.5麦氏浓度菌液，再用生理盐水1∶1稀释，用拭子取稀释液涂布于Shadomy琼脂表面，每次旋转120°，注意不要在培养基表面划出划痕，10 min内贴上药敏纸片，放入35℃孵箱中孵育18～24 h，光滑念珠菌延长孵育时间到48 h判读结果。

1.2.4 敏感性判定 用厂家提供的说明书判定，两性霉素B没有耐药值，10～14 mm为中介，≥15 mm为敏感;氟康唑≤11 mm为耐药，12～19 mm为中介，≥20 mm为敏感;伊曲康唑没有耐药值，10～14 mm为中介，≥15 mm为敏感，5-氟胞嘧啶≤22 mm为耐药，23～29 mm为中介，≥30 mm为敏感。

2 结果

2.1 念珠菌的种类 检出301株念珠菌中，白念珠菌210株(占69.8%)，光滑念珠菌55株(占18.2%)，热带念珠菌33株(占11%)，其他念珠菌3株(占1%)。与全国的比例差不多。白念珠菌仍是尿路感染最常见的真菌［3］。

2.2 药敏的检测 除克柔念珠菌对氟康唑天然耐药及光滑念珠菌对氟康唑为浓度依赖性(S-DD)外，其余念珠菌对常用抗真菌药物均有很好的敏感性。详见表1。

表1 临床常见抗真菌药物对念珠菌的敏感性(%)

3 讨论

念珠菌广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病。为条件致病性真菌。［4］，只有在机体抵抗力下降和(或)念珠菌过度生长时，才可能成为致病菌。念珠菌尿感染产生的因素有:①应用抗生素治疗引起正常菌丛失调，尤其是长期大量应用广谱抗生素时。②激素、免疫抑制药的使用以及肿瘤患者行放射治疗和(或)化疗，使机体的防御功能减弱。③留置导尿管，尿路畸形等尿路局部抵抗力下降。④慢性严重疾病致使体质极度虚弱。⑤糖尿病患者，抗念珠菌的功能降低，当血糖＞8.34 mmol/L(150 mg/dl)时，念珠菌生长率提高。⑥尿pH:念珠菌生长的适宜pH是5.1～6.4，正常尿液呈酸性，有利于念珠菌生长。据报道8%的院内尿路感染由肠球菌引起，居第5位［5］。其发生多与留置导尿管、其他器械操作和尿路结构异常有关。一般表现为膀胱炎、肾盂肾炎，少数表现为肾周围脓肿等［6］。

由于念珠菌中不同菌对抗真菌药物的耐药性差异很大，因此临床分离的念珠菌属应鉴定到种。

虽然氟康唑在临床已经应用了很长时间，用量大，但对主要的念珠菌仍保持了很高的有效性，仍可作为治疗念珠菌引起的尿路感染的一线用药［1］

［1］ 段穷，王晓红，魏崴.吉林省人民医院常用的3种抗真菌药物敏感性研究.吉林医学，2009，30(21):2668-2669.

［2］ 李景云，马越，张力，等.临床52家医院常见分离菌株的药物敏感性监测.中华检验医学杂志，2006，29(5):452-453.

［3］ Shepard BD，Gilmore MS.Antibiotic-resistant enteroocci:the mechanisms and dynamics of drug introduction and resistance.Microbes Infect，2002，4(2):215-224.

［4］ 赵心懋，徐英春，段琼，等.氟康唑体外抗菌活性及五种体外敏感试验.中华医学检验杂志，2006，29:128.

［5］ 刘小平，李建武，樊尚荣，等.临床常见念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性.中华医院感染学杂志，2005，15(6):671.

［6］ 徐英春，王澎，原英，等.氟康唑和伏立康唑对酵母菌抗菌活性的研究.中国抗感染化疗杂志，2003，3:277.