标准曲线法测定南山楂中总黄酮的含量

张书华，张 捷

（铜川市药品检验所，陕西铜川727031）

标准曲线法测定南山楂中总黄酮的含量

张书华，张 捷

（铜川市药品检验所，陕西铜川727031）

目的建立南山楂药材总黄酮的含量测定方法。方法以芦丁为对照品，样品经分离提取、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠试剂显色后，采用紫外分光光度法在500 nm波长处测定总黄酮含量。结果总黄酮在0.0074～0.0488 mg范围内呈良好的线性关系，r＝0.9995。结论该方法操作简便，快速，准确，适用于南山楂中总黄酮的含量测定。

紫外-可见分光光度法；南山楂；总黄酮

南山楂为蔷薇科植物野山楂Cratae gus cunentasiebetzncc的干燥成熟果实。味酸、甘、微温。归脾、胃、肝经。消食健胃，行气散淤。用于肉食积滞，胃脘胀满，高血脂症等。近年临床研究证明，南山楂的主要化学成分为总黄酮，总黄酮具有抗动脉粥样硬化、抗氧化、降血糖、抗血小板凝聚的作用，其中提高组织中抗氧化酶的活性，抑制自由基损伤，防止脂质过氧化的抗氧作用尤为突出和重要。本实验采用标准曲线法测定南山楂中总黄酮含量的方法，结果表明该方法灵敏度高，专属性强，操作简便，重现性好。

1 材料与方法

1.1 对照品

芦丁对照品（批号100080-200306，中国生物制品检定所），南山楂样品由西安中药饮片厂、陕西香菊制药有限责任公司、陕西天士力植物药业有限公司提供；Evolution 500紫外分光光度计；AY-220电子分析天平；索氏提取器；超声波处理机；所用试剂均为分析纯。

1.2 对照品溶液的制备

精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25 mg，置50 ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得。（每1 ml含无水芦丁0.2 mg。）

1.3 供试品溶液的制备

取本品粗粉约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流提取至提取液无色（约4 h），提取液回收蒸干，残渣用稀乙醇溶解，转移至50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品储备液。取供试品储备液，滤过，精密量取续滤液5 m l，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2 ml，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2 结果

2.1 标准曲线的制备［1-2］

分别精密量取对照品溶液1、2、3、4、5、6 ml分别置25 ml量瓶中，各加水6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 m l，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 m l，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（附录VA），在500 nm的波长出测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算回归方程。Y＝8.3201 χ＝0.0065 r＝0.9995总黄酮在0.0074～0.0488mg范围内呈良好的线性关系。

2.2 精密度实验

精密取对照品溶液在正文所述条件下测定吸光度，连续测定6次，结果RSD为0.53%。

2.3 稳定性实验

精密取供试品约1 g，照正文所述方法制备供试品溶液，每间隔2 h测定一次（n＝6），RSD为0.69%，结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.4 重复性实验

精密称取同批样品6份，按“供试品溶液制备”项下方法操作，结果总黄酮平均含量为1.65%，其RSD为1.2%。

2.5 加样回收率实验

精密称取已知含量的同一批样品（总黄酮含量0.0075 mg／ml）约1 g，加入一定量的对照品，按正文“供试品溶液的制备”方法制备供试液，平行试验6份，按正文所述方法，测定其含量，见表1。结果其平均回收率为99.72%，RSD为0.75%。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）

2.6 样品含量测定

取本品粗粉约1 g，精密称定，按拟定的含量测定方法制备供试品溶液，自“加水至6 ml起”依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。结果见表2：

表2 样品中总黄酮的含量测定

3 讨论

超声波可以强化乙醇侵提法，并且检出的黄酮类物质纯度较高。

在对供试品进行处理时，将回流提取与索氏提取方法进行了比较，结果索氏提取用蒸发上去的干净溶剂来萃取固体中的有机溶剂，用的溶剂少，简化了下一部回收溶剂，而且得到的提取物浓度大。黄酮类化合物在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下与铝盐生成螯合物，加入氢氧化物钠溶液后显红橙色，在500 nm波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律，一般与芦丁标准系列比较定量。显色的3个时间分别为6 min、6 min、15 min。本方法具有操作简单，费用低廉等特点，同时准确度和精密度符合中药材含量测定分析的要求。

本实验结果表明南山楂中含有黄酮。而且天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而出现如下功能：消除疲劳，保护血管，防动脉硬化，扩张毛细血管，疏通微循环，抗脂肪氧化，抗衰老，活化大脑及其它脏器细胞的功能。因此，南山楂具有广泛开发和利用价值。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2005：22-23.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：30.

R914

A

1672－2639（2012）01－0045－02

2011-12-27；责任编辑 徐文梅］