JWA T723G多态性与胃癌易感性

王 卓， 高长明， 吴建中， 丁建华， 李苏平， 马 蓉， 王 洁， 刘燕婷， 曹海霞

恶性肿瘤严重危害人类健康，对其病因的大量研究表明既有环境因素的作用，也有遗传因素的作用。业已证明，肿瘤发生发展涉及的基因常与细胞增殖、分化和凋亡等有关，肿瘤已是公认的基因疾病。胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，我国是胃癌高发区，每年约有40万新发病例，30万人死于胃癌，发病率和病死率居恶性肿瘤的第三位［1］。JWA基因是由Chen等［2］率先发现和克隆的新的环境应答基因，具有活跃的生物学功能。近期研究发现JWA基因多态性与中国汉族人群患膀胱癌［3］、食管癌［4］和白血病［5-6］等多种恶性肿瘤的危险性有关。我们检测分析胃癌患者及其相应对照人群的 JWA T723G多态性，以探讨其与胃癌易感性的关系。

1 资料和方法

1.1 研究对象和标本收集 1999年8月至2000年9月，在淮安市楚州区人民医院随机收集经组织病理学确诊的胃癌107例，同时在患者居住的村镇收集相似年龄(相差≤5岁)且无癌症病史的一般人群200名为对照组，抽静脉血标本。血标本置乙二胺四乙酸钠抗凝管，分离白细胞层。用 QIAamp DNA提取试剂盒提取白细胞DNA，DNA置－30℃低温冰箱保存备用。

1.2 基因型分析 采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)和变性高效液相色谱法 (denaturinghigh performence liquid chromatography，DHPLC)对JWA 723 T/G多态性位点进行分析。扩增引物为Takara公司合成，上游引物为5'-CTTCGGAACCTCAAGAACAAAC-3';下游引物为 5'-TCTGAGGTCTTCTCTCTGAAACATC-3'。PCR反应体系总体积均为 25 μL，含有引物 10 pmol，4 × dNTPs 0.25 mmol/L，MgCl22.0 mmol/L，10 × Buffer 2.5 μL，热启动 Taq酶1 U 及 0.5 μL基因组 DNA。扩增反应条件为:95℃预变性7 min;95℃ 30 s，62℃30s，72℃ 30 s，共 35 个循环;72℃延伸 5 min，94℃变性4 min后，再将 PCR产物的温度按0.1℃/s的梯度降低到25℃，置4℃冰箱保存。

PCR产物直接上样到DHPLC仪(WAVE 3500，Transgenomic，USA)进行基因型鉴定。流动相为0.1mol/L的N-三乙基乙酰胺(TEAA，分析纯)和不同浓度梯度的乙晴，流速为0.9 mL/min，application type选择为mutation，按照仪器设定的洗脱梯度走样。杂合子基因型可从DHPLC图形直接确定，野生型纯合子和变异型纯合子的DHPLC图形相同，需与已知纯合型混合，经过变性和复性过程，再次上样DHPLC仪分析确定。

1.3 统计学方法 采用SAS软件和EpiInfo软件进行统计学分析，以比值比(odds ratios，OR)及其95%可信区间(95%confidence interval，95%CI)表示相对危险度，以多因素非条件Logistic回归模型计算调整OR及其95%CI，计算时调整了性别和年龄。用Mantel-Haenszel χ2检验基因型频率分布差异和相对危险度的统计学意义，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 胃癌与对照组的均衡性检验 对照组男、女分别为132例和68例，平均年龄分别为(60.76±8.46)岁和(58.72 ±9.54)岁;胃癌组男、女分别为84例和23例，平均年龄分别为(61.35±7.75)岁和(60.17±9.89)岁。对照组与胃癌组之间的性别及年龄分布差异无统计学意义，具有可比性。

2.2 胃癌组与对照组的遗传平衡检验及基因型分布 JWA T723G被区分为T/T，G/G，T/G三种基因型。对照组中7例未检出，病例组中5例未检出。病例组JWA 723的T/T、T/G和G/G基因型的分布频度分别为56.86%、38.24%和4.90%，对照组分别为65.80%、30.57%和3.63%，两组间的基因分布频度差异无统计学意义(χ2=2.290，P=0.318)。对胃癌组和对照组的基因型频率进行了遗传平衡检验，两组的基因型频率观察值与期望值差异亦无统计学意义(χ2值分别为 0.31和 0.002 3，均 P ＞0.05)，表明胃癌组和对照组的基因型频率均符合Hardy-Weinberg比例，样本具有代表性。

在调整了性别和年龄后，与T/T基因型相比，T/G基因型发生胃癌的危险性上升到1.21(95%CI:0.94～1.57)，G/G基因型发生胃癌的危险性上升到1.49(95%CI:0.45 ～4.96)。合并 T/G 和 G/G基因型分析显示G等位基因发生胃癌的危险性上升到 1.21(95%CI:0.95 ～1.55)，但差异无统计学意义(P=0.131 6)，具体见表 1。

表1 JWA T723G基因型频率分布与胃癌易感性的关系

3讨论

基因多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)是人类基因变异的最普通形式，可能有助于解释不同个体对多种疾病包括癌症的易感性差异，但其根本的分子机理仍不清楚。如果DNA序列中单核苷酸的变异，尤其是基因启动子的突变可能既影响基因表达又影响酶的活性，就较容易和癌症危险性联系起来。

JWA基因在人染色体的定位于3p14(NT_022423.12)，JWA在大多数真核生物细胞中均有较高的转录和翻译水平，其启动子序列中含有多种顺式反应元件(包括应激反应元件、佛波酯反应元件、高铁血红素反应元件和热休克反应元件)，且广泛参与细胞对多种环境理化因素(如热休克、非电离辐射、氧化应激、多种分化诱导刺激、多种环境化学污染物等)的应答反应，这些反应元件是否参与JWA转录调控及具体的转录机理仍不清楚。JWA基因SNPs位点的存在可能是个体易感性差异的一个标志，SNPs位点可能影响JWA对各种环境刺激的应答反应，对DNA损伤和修复过程产生负面效应，最终引发肿瘤的产生。

JWA T723G多态性位点位于JWA mRNA 3’非翻译区(3’-untranslated region，3’-UTR)。现在还不清楚JWA 3’-UTR基因多态性对酶的结构和功能有什么影响，虽然基因的3’非翻译区并不翻译成蛋白，但其常在维持mRNA稳定性方面起重要作用。如果mRNA二级结构发生改变，翻译就会被影响，因此该基因多态性有可能导致酶活性或功能的改变。

我们以前的研究发现JWA T723G多态性与食管癌易感性相关［7］。然而，汤唯艳等［8］研究发现JWAT723G多态性与发生消化道肿瘤的危险无关，这与我们此次的研究结果相同，原因可能为不同类型肿瘤发生机理并不完全一致，从而导致 JWA T723G多态性在不同肿瘤中表现出的易感性也不相同。总之，我们的研究发现，JWA T723G多态性与胃癌易感性不相关，JWA T723G多态性位点可能不是胃癌个体易感性差异的一个标志。

［1］Yang L.Incidence and mortality of gastric cancer in China［J］.World J Gastroenterol，2006，12(1):17-20.

［2］Chen R，Li A，Zhu T，et al.JWA—a novel environmental responsive gene，involved in estrogen receptor-associated signal pathway in MCF-7 and MDA-MB-231 breast carcinoma cells［J］.J Toxicol Environ Health A，2005，68(6):445-456.

［3］Li CP，Zhu YJ，Chen R，et al.Functional polymorphisms of JWA gene are associated with risk of bladder cancer［J］.J Toxicol Environ Health A，2007，70(11):876-884.

［4］Tang WY，Wang L，Li C，et al.Identification and functional characterization of JWA polymorphisms and their association with risk of gastric cancer and esophageal squamous cell carcinoma in a Chinese population［J］.J Toxicol Environ Health A，2007，70(11):885-894.

［5］Shen Q，Tang WY，Li CP，et al.Functional variations in the JWA gene are associated with increased odds of leukemias［J］.Leuk Res，2007，31(6):783-790.

［6］Zhu YJ，Li CP，Tang WY，et al.Single nucleotide polymorphism of the JWA gene is associated with risk of leukemia:a case-control study in a Chinese population［J］.J Toxicol Environ Health A，2007，70(11):895-900.

［7］王卓，高长明，丁建华，等.JWA G723T多态性与食管癌易感性［J］.中国肿瘤外科杂志，2011，3(2):96-98.

［8］汤唯艳，缪珩，李春平，等.JWA基因多态性与消化道肿瘤易感性关系的研究［J］.南京医科大学学报(自然科学版)，2006，26(8):640-644.