视网膜母细胞瘤组织中Livin、PTEN表达变化及意义

(河北医科大学第四医院，石家庄050011)

研究［1，2］证实，视网膜母细胞瘤(RB)的发生和发展是多基因参与、多阶段变化的复杂过程。Livin是近几年从人类基因组库中筛选克隆出来的一种新的蛋白质，其在一些肿瘤中高表达［3，4］。PTEN是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多种正常组织，但在恶性肿瘤中表达明显异常［5］。2011年2～9月，我们观察了RB组织中Livin、PTEN蛋白的表达变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 RB患儿43例(RB组)，男23例，女20例;年龄9个月～8岁，平均3.35岁;临床分期为眼内生长期21例，青光眼期13例，眼外扩展期9例;术前患者均未进行放化疗，均行手术治疗。术中切除癌组织标本，均经福尔马林固定，自动脱水，浸蜡，包埋，切片;术后病理检查证实为RB，组织分化程度为未分化型24例、分化型19例。对照组视网膜组织切片34例，均来自外伤后眼球摘除患儿。两组患儿性别、年龄具有可比性。

1.2 Livin、PTEN检测方法 采用 Max-VisionTM快捷免疫组化法，按说明书操作。以已知的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。结果判定:Livin表达主要位于细胞质，PTEN表达主要位于细胞核，以出现清晰的棕黄色颗粒作为阳性细胞判定。每张切片随机选取10个不同高倍视野，各计数100个细胞。阳性细胞所占百分比≤5%计0分，6% ～25%计1分，26% ～50%计2分，51% ～75%计3分，＞75%计4分;无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕褐色为3分。上述两项相加＜2分为阴性表达，≥2分判为阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。数据比较用χ2检验或Fisher确切概率法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

RB组中 Livin、PTEN阳性表达分别为27例(62.79%)、20 例(46.51%)，显著高于对照组的 7例(20.59%)、31 例(91.18%)，P 均 ＜0.05。Livin、PTEN表达与RB临床病理参数的关系见表1。由表1可见，Livin表达与RB的分化程度有关(P＜0.05)，PTEN表达与RB的分化程度及临床分期有关(P 均 ＜0.05)。

表1 Livin、PTEN表达与RB临床病理参数的关系(例)

3 讨论

Livin又名 KIAP/ML-IAP，2000年由科学家在人基因组库中筛选克隆出的一种新型、有较强抗凋亡功能的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族新成员，能够与凋亡蛋白酶结合，抑制其介导的细胞凋亡［6］。本研究中，Livin在RB组织中的表达明显高于正常视网膜组织(P＜0.05)，提示 Livin的异常表达可能与RB的发生、发展有关。Livin的阳性表达与RB的组织分化程度有关，提示Livin表达可能与RB的恶性程度有关，可能是预后不良的指征。

PTEN是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因，存在于多种正常组织，但在恶性肿瘤中PTEN的表达明显异常。PTEN也是惟一能使脂类去磷酸化的抑癌基因，与多种细胞信号转导通路的因子有关，不仅参与细胞周期的调控，还能调控细胞的生长、凋亡、移动及信号转导等，参与肿瘤的发生与发展，是人类肿瘤中最易发生突变的抑癌基因之一。关于PTEN与恶性肿瘤的关系，各家报道不一［7，8］。本研究中，PTEN 蛋白在 RB 中表达与正常对照者比较明显降低(P＜0.05)，提示PTEN对RB的发生有抑制作用，PTEN的缺失或失活在RB的发病中发挥了重要作用。本研究还发现，PTEN与RB的分化、临床分期有关(P＜0.05)。PTEN阻滞PI3K/AKT通路，导致G1期停滞，抑制细胞生长，这是PTEN作用机制中最经典的途径。当PTEN在组织中的表达下调或缺失时，其对PI3K/AKT通路的抑制作用即减弱或消失，可导致AKT磷酸化，引起下游Livin基因的表达上调，随即启动一系列反应，从而抑制肿瘤细胞的凋亡［9］。这也提示，RB组织中Livin的激活与PTEN的失活或缺失之间可能存在相互协同作用，共同参与了RB的发生、发展、转移及浸润，提示RB的形成是多基因、多因素共同作用的结果。

［1］彭辉灿，何湘珍，夏旭光.p16、p21、p53和 PCNA在视网膜母细胞瘤中的表达［J］.眼科新进展，2002，22(4):242-244.

［2］应方微，李永平，唐松，等.抗视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50单克隆抗体相应抗原的提取［J］.中华眼底病杂志，2003，19(3):152-155.

［3］Yagihashi A，Asanuma K，Tsuji N，et al.Detection of anti-Livin antibody in gastrointestinal cancer patients［J］.Clin Chem，2003，49(7):1206-1208.

［4］Chen L，Ren GS，Li F，et al.Expression of Livin and vascular endothelial growth factor in different clinical stages of human esophageal carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2008，14(37):5749-5754.

［5］Olaussen KA，Soria JC，Morat L，etal.Loss of PTEN expression is not uncommon，but lacks prognostic value in stage Ⅰ NSCLC［J］.Anticancer Res，2003，23(6C):4885-4890.

［6］Vucic D，Deshayes K，Ackerly H，etal.SMAC negatively regulates the anti-apoptotic activity ofmelanoma inhibitor of apoptosis(MLIAP)［J］.JBiol Chem，2002，277(14):12275-12279.

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［9］Chalhoub N，Zhu G，Zhu X，et al.Cell type specificity of PI3K signaling in Pdk1-and PTEN-deficient brains［J］.Genes ＆ Dev，2009，23(14):1619-1624.