喉鳞癌组织中PTTG1表达变化及意义

(承德医学院附属医院，河北承德067000)

垂体肿瘤转化基因(PTTG1)是从垂体瘤组织中分离出的原癌基因，研究证明其高表达在促进细胞增殖转化以及体内肿瘤形成方面具有重要作用。2010年5月～2011年12月，我们观察了喉鳞癌组织中的PTTG1蛋白及其mRNA的表达变化，并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 喉鳞癌组织以及癌旁组织(距离肿瘤切缘至少＞0.5 cm)取自手术治疗的62例原发喉鳞癌患者，术前均未接受放、化疗。标本获得后分为2份，一份立即冻存于－80℃液氮中，另一份标本经10%甲醛固定、石蜡包埋、4μm厚度连续切片。所有标本均经过病理学检查确诊。

1.2 方法

1.2.1 PTTG1蛋白检测方法 取石蜡切片，采用免疫组化SP法检测，按说明书操作。以PBS代替一抗作为阳性对照，以已知喉癌阳性组织切片为阳性对照。PTTG1阳性细胞为细胞质出现棕黄色颗粒。在染色均匀的肿瘤区域选取5个高倍镜视野(×200)，计算阳性细胞百分率＜25%为1分，25% ～50%为2分，＞50%为3分;不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。二者得分相加＞1分判为阳性表达。

1.2.2 PTTG1 mRNA检测方法 采用RT-PCR法，按说明书操作。Trizol法抽提总RNA，氯仿及异丙醇纯化，加无 Rnase水20μL溶解，测 OD值定总RNA量。将反应产物在1%琼脂糖凝胶上电泳，经EB染色后，在紫外荧光数字成像仪下照像，并进行光密度半定量分析。以每例PTTG1与相应β-actin扩增产物条带累积光密度(IOD)的比值作为PTTG1 mRNA的相对表达量。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。数据比较用χ2检验、t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 喉鳞癌及其癌旁组织中PTTG1蛋白及mRNA表达情况 在62例喉鳞癌组织中，PTTG1蛋白阳性表达率及其mRNA表达量分别为67.74%、0.74±0.134，显著高于癌旁组织中的 23.08%、0.47 ±0.10(P 均 ＜0.01)。

2.2 PTTG1蛋白表达与喉鳞癌临床病理参数的关系 PTTG1蛋白表达与喉鳞癌的淋巴结转移、临床分期、分化程度有关(均P＜0.05)，与喉鳞癌的肿瘤大小、临床分型、年龄及性别无关(均P＞0.05)。见表1。

3 讨论

PTTG作为一种新近发现的原癌基因，在大多数正常组织中表现为弱表达甚至不表达，在多种恶性肿瘤细胞［1～6］中高表达。其高表达可促进肿瘤细胞的增殖、分化，在肿瘤发生中发挥了重要作用。PTTG(hPTTG)家族包括 PTTG1、PTTG2和 PTTG3。已有研究发现，PTTG2和PTTG3在细胞增殖活性高的正常组织中有表达，但在肿瘤中主要为PTTG1表达。PTTG1基因位于5q33，含5个外显子和4个内含子［7］。其DNA序列由787 bp组成，含有609 bp的完整阅读框架，编码一个含有202个氨基酸残基，相对分子质量约为22 kD。PTTG1蛋白在多种肿瘤细胞和肿瘤细胞系中高度表达，与大多数肿瘤的发生密切相关。其促进肿瘤发生的机制可能有:①PTTG1通过激活转染细胞中的C-myc原癌基因，从而发挥转录因子的作用［8］;②PTTG1在肿瘤组织中的高表达，可促进碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)转录和分泌，导致细胞转化，从而促进肿瘤中出现有丝分裂，调控血管生成及激素分泌;③PTTG基因调控区的突变引起PTTG1调控失常，从而导致其高表达，引起肿瘤细胞转化;④PTTG1通过反式激活作用激活原癌基因、生长因子等，间接致癌［9］;⑤PTTG1蛋白抑制姊妹染色体单体分离，破坏细胞分裂导致染色体不稳定，非整倍体形成，并赋予其成瘤活性，进一步发展成为肿瘤［10］。因其表达具有肿瘤特异性，因此被认为是一种极具潜在价值的肿瘤标志，有可能成为肿瘤治疗的靶点。

表1 PTTG1蛋白表达与喉鳞癌临床病理参数的关系

肿瘤的发生取决于肿瘤细胞凋亡和增长的动态平衡是否被破坏，细胞的过度增殖、异常分化和正常凋亡减少在恶性肿瘤的发生发展中具有重要意义。而喉癌的起源目前认为是多因素相互作用的结果，近几年发现和明确了由于原癌基因调控引起细胞凋亡和细胞增殖异常，是喉癌发生的重要机制之一。原癌基因PTTG的高表达在促进肿瘤细胞增殖、分化中有重要作用，PTTG作为一种原癌基因，已有研究提示其过度表达可能引起细胞周期调控紊乱致细胞增殖异常及细胞凋亡异常。本研究结果显示，喉鳞癌组织中PTTG1蛋白及其mRNA高表达，且与肿瘤的临分期、分化程度及淋巴结转移有关(P均＜0.05)。因此，PTTG1对喉癌发生收展具有一定作用，但具体机制还需进一步研究。

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