膀胱癌组织中MACC1、c-Met表达变化及意义

龙俊任，董自强，熊 飞，胡敬祖，侯 毅，韩 钰

(1三峡大学第一临床医学院，湖北宜昌443003;2三峡大学分子生物学研究所)

结肠癌转移相关基因1(MACC1)是肝细胞生长因子信号通路(HGF/c-Met)的一个关键调节因子，在肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤组织的血管形成等过程中发挥着重要作用［1］。2009年10月～2011年5月，我们采用RT-PCR法和免疫组化法检测膀胱癌组织中MACC1、c-MetmRNA及其蛋白的表达变化，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 膀胱癌患者47例，男29例、女18例，年龄30 ～82 岁;临床分期 T1～2期 15 例，T3～4期32例;病理分化为低分化28例，高分化19例。患者术前均未行放疗和化疗，术中留取膀胱癌组织及其癌旁组织标本各47例。将术中切除的新鲜组织标本分成2份:1份立即放入液氮中保存;另1份用10%甲醛溶液固定、石蜡包埋，用于免疫组化检测。

1.2 检测方法

1.2.1 MACC1、c-MetmRNA 检测方法 采用 RTPCR法。用RNA抽提试剂盒提取组织总RNA，并定量RNA纯度及浓度，按反转录试剂盒说明书合成cDNA，进行聚合酶链反应。引物由上海生物工程有限公司合成。循环条件:94℃预变性5min，94℃变性30 s，55 ℃(56 ℃，β-actin)退火 30 s，72 ℃延伸30 s，30个(28个，β-actin)循环后于72℃延伸5 min;经琼脂糖凝胶电泳，Gel Logic-200凝胶成像系统扫描分析测定电泳条带相对吸光度值;以β-actin为内参照，计算 MACC1、c-MetmRNA的相对表达量。

1.2.2 MACC1和c-Met蛋白检测方法 采用免疫组化SABC法。用石蜡包埋膀胱癌及癌旁组织，4 μm层厚连续切片，脱蜡、修复，常规SABC免疫组化染色。光镜下观察，棕黄色着色为阳性细胞。无着色为0分，着淡黄色为1分，着黄色为2分，着黄棕或棕褐色为3分;阳性细胞所占百分比≤5%为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～75%为3分，≥76%为4分。两项得分相乘≤1分为阴性，＞1分为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。组间数据比较用t检验、χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌及癌旁组织中MACC1、c-MetmRNA及其蛋白的表达 见表1。

表1 膀胱癌及癌旁组织中MACC1、c-MetmRNA及其蛋白的表达情况

2.2 MACC1和c-Met蛋白表达与膀胱癌临床病理参数的关系 MACC1、c-Met蛋白表达与膀胱癌的临床分期、分化程度及淋巴结转移有关(P均＜0.05)，见表2。

表2 MACC1、c-Met表达与膀胱癌临床病理参数的关系(例)

3 讨论

MACC1基因首先在人结肠癌组织中被鉴定出来，位于人类的7号染色体上(7p21.1)，其生物学功能广泛，在调节细胞增殖、存活和分化等方面起着重要作用，是调节HGF/c-Met通路中Met基因的关键因子［1］。文献报道，MACC1在许多的正常人体组织中均呈低水平表达，但在多种肿瘤组织表达都明显增高，认为可以把MACC1蛋白作为一种新的肿瘤诊断标志物［2～6］。

本研究显示，MACC1和c-MetmRNA及其蛋白在膀胱癌组织中的表达量均显著高于癌旁组织(P均＜0.05)，且与膀胱癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P均＜0.05)，说明两者在膀胱癌的发生、发展中起重要作用。有学者在脑胶质瘤细胞及肾癌细胞中证实，siRNA-MACC1能够抑制细胞中MACC1蛋白的表达，而c-Met蛋白的表达也明显下调，肿瘤细胞的增殖能力明显降低，推测异常表达的MACC1可激活下游的HGF/c-Met信号通路，增加c-Met蛋白的表达，两者协同增加肿瘤细胞的增殖能力，进而导致肿瘤转移和复发［3，7～9］。体内外实验证实:①MACC1与HGF/c-Met之间存在一个正反馈环路:HGF促进MACC1由胞质转移至胞核内，与c-Met的启动子结合，上调c-Met的转录，c-Met的表达可以增强HGF的作用;②HGF/c-Met还可以激活下游靶基因 MAPK，而 MAPK信号通路可激活MACC1启动子，明显提高MACC1的表达，促进肿瘤细胞的增殖分裂［8］。利用siRNA-MACC1不仅可下调MACC1蛋白表达，降低卵巢癌细胞株OVCAR-3的恶性潜能，并下调其下游 Met、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Cyclin D1、MMP2 蛋白表达，但 Capase-3 的表达却是升高的［10］。MACC1和c-Met两者结合的机制可能是MACC1基因可结合在原癌基因Met基因启动子近端约60 bp的启动子片段上，其中包括一个特异性的Sp1结合位点，而这个结合位点是MACC1诱导的Met基因表达和HGF/c-Met信号通路激活所必需的［1，6，11］。

目前，c-Met已被开发作为膀胱肿瘤基因治疗及药物治疗的靶分子［12］。随着对MACC1和c-Met相关性研究的深入，可能为膀胱癌的临床治疗开辟一条新的路径。

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