氯沙坦与美托洛尔对高血压心肌肥厚影响的实验研究

李 祯，李润梅

（河北北方学院附属第一医院药学部，河北张家口 075000）

氯沙坦与美托洛尔对高血压心肌肥厚影响的实验研究

李 祯，李润梅

（河北北方学院附属第一医院药学部，河北张家口 075000）

目的研究氯沙坦与美托洛尔联合对高血压心肌肥厚的干预作用。方法采用结扎大鼠腹主动脉法造模，将Wistar雄性大鼠50只随机分为假手术对照组、模型组、氯沙坦组、美托洛尔组、氯沙坦+美托洛尔组，治疗5周后测定血流动力学、左心室肥厚程度、血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）及胶原蛋白含量的变化，同时检测血清中细胞因子（白细胞介素-6、白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α）水平变化。结果治疗5周后，与模型组比较，氯沙坦组、美托洛尔组、氯沙坦+美托洛尔组的收缩压、舒张压、平均动脉压较模型组均降低；心脏质量/体质量与左室质量/体质量亦有所降低；AngⅡ及胶原蛋白含量明显降低；白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α水平降低；氯沙坦+美托洛尔组效果最明显。结论氯沙坦与美托洛尔能干预心肌肥厚，改善血流动力学，两者合用具有协同作用。

心肌疾病，肥厚性；氯沙坦；美托洛尔

高血压合并左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是一个独立危险因素，研究表明［1］，高血压左室肥大者，心血管并发症发生率及病死率可增加3～7倍。血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）作为肾素-血管紧张素系统的主要活性产物，在LVH中具有重要作用［2］。美托洛尔（metoprolol）为心脏选择性β受体阻滞剂，对高肾素性高血压有较好的降压作用［3］。氯沙坦（losartan）为非肽类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，具有降低血浆AngⅡ水平、逆转高血压时的左心室肥厚作用。本文通过大鼠腹主动脉狭窄造模，给予氯沙坦及美托洛尔干预，观察血流动力学、左心室肥厚程度、AngⅡ及胶原蛋白含量的变化，同时进一步检测了血清中白细胞介素（interleulcin，IL）-6，IL-10，肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平变化。

1 材料与方法

1.1 材料：氯沙坦钾（杭州默沙东公司，批号34-250-2066），美托洛尔（阿斯特拉制药有限公司，批号52-100-2058），TNF-α放射免疫试剂盒、IL-6和IL-10检测试剂盒（北京正泰生物技术公司），AngⅡ及胶原蛋白放免测试盒（解放军总院科技放免所，批号050726），MD100-1电子天平（上海医用仪器厂），压力传感器，RS3400四导生理仪的通用放大器（universal amplifier）（均为美国Gould产品），GAMMA maticⅡ型γ计数器（瑞士KONTRON公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物模型制备：选取健康Wistar雄性大鼠50只，2月龄，体质量160～180g。按照结扎大鼠腹主动脉的方法建立心肌肥厚模型。大鼠腹腔内注射3%戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉，待角膜反射消失后仰卧固定于手术台。常规去毛消毒腹部皮肤，腹部正中切口打开腹腔，于左肾后上方分离肾动脉，于起始部上段腹主动脉约13mm处，沿血管走行方向放置针尖磨钝的7号注射针头，以丝线将腹主动脉连同针头一起结扎后迅速抽去针头，造成腹主动脉狭窄。腹腔内注入青霉素40万U，关闭腹腔，术后进行常规抗炎治疗7d。假手术组不结扎腹主动脉，其余同手术组。造模后，模型组大鼠心脏指数（全心质量/体质量）比假手术组明显增加（P＜0.05），表明大鼠心肌肥厚模型已建立。术中及术后6周内平均病死率为16%（8只）。

1.2.2 动物分组：造模7d后，随机分为5组，每组10只，即假手术组、模型组、氯沙坦组、美托洛尔组、氯沙坦+美托洛尔组。假手术组、模型组，生理盐水2mL·kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦组，氯沙坦60mg· kg-1·d-1，灌胃；美托洛尔组，美托洛尔20mg· kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦+美托洛尔组，氯沙坦、美托洛尔各40mg·kg-1·d-1，灌胃。连续给药5周。

1.2.3 检测指标

1.2.3.1 血流动力学：实验5周后，用2%戊巴比妥钠（45mg/kg）麻醉状态下行颈动脉插管，通过压力传感器（P23×L）与RS3400四导生理仪的通用放大器（universal amplifier）联接，测定动脉血压，计算平均动脉压（mean arterial pressure，MAP）。

1.2.3.2 心肌肥厚程度测定：采用放血法处死实验动物，分离心脏组织，称量心脏质量，左室质量，计算心脏质量指数，包括心脏质量/体质量，左室质量/体质量。

1.2.3.3 AngⅡ测定：大鼠断头取血5mL置于冰水浴冷却的抗凝管中（含酶抑制剂）摇匀，1 000r/min离心5min分离血浆低温保存。AngⅡ测定严格按照放射免疫试剂盒说明书操作。

1.2.3.4 心肌组织胶原蛋白含量：称取左室游离壁约200mg湿质量的心肌组织，应用无水乙醇、丙酮脱水脱脂，挥发待干后称取约20mg干质量组织，用6mmol/L盐酸3.0mL 95℃水解5h，氢氧化钠（6mmol/L）调酸碱度至pH6.0，稀释至10mL，离心后取上清2m L，根据试剂盒要求测定羟脯氨酸含量，计算胶原蛋白含量。

1.2.3.5 IL-6、IL-10及TNF-α测定：颈动脉取血，离心取上清液。采用双抗夹心ELISA法测定IL-6和IL-10，具体操作按照各试剂盒说明书进行；TNF-α采用放射免疫法检测：采用液相竞争法，分管加样，混匀，4℃放置24 h，加入分离剂，混匀，室温放置20min，4℃3 000r/min离心25min，吸弃上清液，在自动γ计数器上计算标准曲线和TNF -α浓度。

1.3 统计学方法：应用SPSS11.0软件进行数据处理，计量资料以¯x±s表示，组间两两比较采用q检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血流动力学变化：与假手术组比较，模型组的SBP、DBP、MAP，明显升高（P＜0.01），可见心室重构模型组心功能下降。与模型组比较，氯沙坦组，美托洛尔组，氯沙坦+美托洛尔组的SBP，DBP，MAP均降低（P＜0.05），且氯沙坦+美托洛尔组降低最明显（P＜0.05）。见表1。

表1 5周后各组血流动力学变化

2.2 心肌肥厚程度：造模后，模型组大鼠心脏质量、心脏质量/体质量及左室质量/体质量较假手术组明显增加（P＜0.05）。药物组增加幅度均降低（P＜0.05），氯沙坦+美托洛尔组最明显（P＜0.05），与假手术组接近，见表2。

表2 心肌肥厚指标比较

2.3 AngⅡ及胶原蛋白含量比较：模型组血浆AngⅡ水平与假手术组明显升高（P＜0.01），表明大鼠心室重构模型组的肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活。与模型组血浆AngⅡ含量比较，氯沙坦组及氯沙坦+美托洛尔组明显降低（P＜0.01），且氯沙坦+美托洛尔组显著低于氯沙坦组和美托洛尔组。

模型组的心肌胶原蛋白含量较假手术组升高54.4%（P＜0.01），与模型组相比，美托洛尔组的心肌胶原蛋白含量降低了34.4%，氯沙坦+美托洛尔组降低了49.2%，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表3。

表3 各组AngⅡ及Collagen含量比较

2.4 对高血压大鼠细胞因子水平的影响：模型组动物细胞因子变化与假手术组相比差异有统计学意义（P＜0.01），IL-6、TNF-α明显升高，IL-10降低；药物组与模型组相比，IL-6、TNF-α水平降低，氯沙坦+美托洛尔组作用最强，氯沙坦组较弱。IL-10水平升高，氯沙坦+美托洛尔组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。见表4。

表4 各组大鼠细胞因子变化比较

3 讨 论

左心室肥厚常见于高血压心脏病，已被单独列为心血管疾病的危险因子。因此，控制左心室肥厚成为控制高血压心脏病的关键问题。现代运用的超声心动图、心肌活组织检查、心血管造影和心电图本身存在一定局限性［4］，故对心肌肥厚变化程度正确的评价有赖于动物实验。

腹主动脉狭窄法是一种常用的压力超负荷心肌肥厚动物模型的制备方法。本研究发现，大鼠腹主动脉狭窄造模6周后，其左心室质量与体质量比明显高于假手术组（P＜0.01），说明应用腹主动脉狭窄法制备压力负荷性心肌肥厚的模型是成功的。

肾素-血管紧张素系统在心血管系统的调节中起着重要的作用。AngⅡ作为肾素-血管紧张素系统的主要作用因子，从血流动力学和非血流动力学两方面起作用，具有长期致肥厚和重构的作用。血管紧张素转换酶抑制剂分别通过直接抑制心脏局部AngⅡ的生成和间接抑制心脏交感神经末梢释放儿茶酚胺两方面预防心室肥厚的发生。

有研究显示［5］，MAP与LVH程度呈正相关，说明血流动力学因素参与LVH形成过程；氯沙坦+美托洛尔组与氯沙坦组的AngⅡ较模型组显著降低，提示氯沙坦作为血管紧张素Ⅱ型受体拮抗剂，其抗心肌肥厚作用可能主要依赖非血流动力学因素。心脏肥厚与胶原含量呈正相关，显示心脏肥厚包括间质成分的病理性增生，心肌胶原成分增加易导致心室收缩和舒张功能异常、心律失常等。

近年研究表明［6］，炎性细胞因子不仅与炎症、冠心病等多种临床疾病有关，而且与高血压、心肌肥厚的发生发展存在密切的联系。IL-6通过刺激膜上gp-130受体复合物在心肌细胞的激活和表达增高，刺激炎性蛋白的产生和心肌肥厚促使左室重构；TNF-α在体内增加心肌细胞结构与收缩蛋白的表达，激活AT1受体表达上调，刺激诱导型一氧化氮合酶水平增高，促进AngⅡ调节心肌纤维化的效应，并引起平滑肌细胞增殖，最终导致心肌肥厚［7］。IL -10有对抗IL-6等因子所致平滑肌增殖等作用。本研究采用腹主动脉结扎制备高血压大鼠模型，结扎5周后，细胞因子IL-6、TNF-α水平升高、IL-10降低，当两药联用后，IL-6、TNF-α水平降低，IL-10升高较明显，表明联用可改善细胞因子的紊乱现象。

总之，氯沙坦和美托洛尔联合应用改善左室舒张功能可以产生良好的协同作用。原因可能为二者同时作用于肾素-血管紧张素-醛固酮系统以及交感神经系统等环节。

［1］ 辛颖，宋晓东，惠池太，等.左心室肥厚的影响因素及机制的研究进展［J］.中国分子心脏病学杂志，2009，9（1）：56-58.

［2］ 周怀能，李秀娟，廖新学，等.氯沙坦对自发性高血压大鼠血管紧张素Ⅱ及炎症因子的影响［J］.热带医学杂志，2011，11（5）：577-578.

［3］ 孙爱梅.美托洛尔治疗高血压病的疗效观察［J］.右江医学，2011，39（3）：334-335.

［4］ MATTFELDT T，MALL G.Growth of capillaries and myocardial cells inthe normal rat heart［J］.JMol Cell Cardiol，1997，60（3）：1237-1246.

［5］ 蒋嘉烨，王现珍，罗珊珊，等.半夏白术天麻汤对自发性高血压大鼠左心室肥厚的影响［J］.中国中西医结合杂志，2010，30（10）：1061-1062.

［6］ WAGNER M.Signaling networks regulating cardiac myocyte survival and death［J］.Curr Opin Investig Drugs，2009，10（9）：928-937.

［7］ BANERJEE I，FUSELER JW，INTWALA AR.IL-6 loss causes ventricular dysfunction，fibrosis，reduced capillary density，and dramatically alters the cell populations of the develop-ing and adult heart［J］.Am JPhysiol Heart Circ Physiol，2009，296（5）：1694-1704.

（本文编辑：赵丽洁）

R542.2

B

1007-3205（2012）02-0228-03

2011-10-28；

2012-01-11

李祯（1964-），男，河北康保人，河北北方学院附属第一医院副主任药师，理学学士，从事医院药学和医院制剂研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.02.046