高效液相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量研究

昝 琼

高效液相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量研究

昝 琼

目的探讨高效液相色谱法在测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量中的应用价值。方法为了有效控制丹皮酚软膏中主要成分丹皮酚的含量，本研究应用高效液相色谱法建立了一种测定丹皮酚软膏中丹皮酚含量的分析方法。结果丹皮酚质量浓度为2.10～31.28μg/ml范围内，丹皮酚的质量浓度与色谱峰面积呈现良好的线性关系。供试品溶液连续进样5次的RSD（%）均小于1.0，重现性良好，符合高效液相色谱法测定含量的要求。样品溶液0小时与8小时后峰面积无明显变化，供试品溶液8小时内稳定。本品在相当于标示量的80%～120%范围内，测得丹皮酚的平均回收率为99.78%，相对标准偏差（RSD%）为0.65。表明该方法准确度良好，符合高效液相色谱法对含量测定的要求。按照确定的高效液相的方法，对中试六批产品及市售品进行含量测定，结果显示中试六批产品与市售品中的丹皮酚含量相比，相对标准偏差（RSD%）为2.23。结论该方法测定本品含量的重现性好，准确可靠，专属性强，灵敏度高，符合高效液相色谱法对含量测定的要求。

高效液相色谱法；丹皮酚软膏；丹皮酚；含量

为了有效控制丹皮酚软膏中主要成分丹皮酚的含量，本研究应用高效液相色谱法建立了一种测定丹皮酚软膏中丹皮酚含量的分析方法。

1 材料与方法

1.1材料与试药

岛津 LC-10ATvp 高效液相色谱仪，岛津SPD-10Avp 紫外可见检测器，Shim-Pack VP-ODS C18150mm×4.6mm 5µm 色谱柱，丹皮酚对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：708-9003）。甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。丹皮酚软膏自制（批号：070801、070802、070803、070804、070805、070806）。

1.2方法

①色谱条件：流动相为甲醇-水（50：50），色谱柱为Shim-Pack VP-ODS C18150mm×4.6mm 5µm，流速为1.0ml/min，检测波长为274nm，进样量为20μl。②对照品制备：精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解并稀释至25ml；精密量取该溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml，分别置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。③供试品制备：称取丹皮酚软膏约 0.5g，加甲醇研磨溶解，转移至50ml量瓶中，稀释至刻度。取续滤液1ml，稀释至25ml，作为样品溶液[1]。

2 结果

2.1系统适应性实验

取样品溶液20µl注入液相色谱仪，按照上述色谱条件，记录色谱图，丹皮酚峰的理论塔板数为46647.579，分离度为 16.148。两个主峰的分离度及相邻杂质峰的分离度均大于1.5。

2.2线性关系考察

精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解并稀释至25ml；精密量取该溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0ml，分别置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别进样 20μl，记录色谱图，记录样品的峰面积，以进样量作为X轴，峰面积作为Y轴，得到回归方程：Y=6321.25X+38.32，r=0.9995，这表明丹皮酚质量浓度为2.10～31.28μg/ml范围内，丹皮酚的质量浓度与色谱峰面积呈现良好的线性关系。

2.3重现性试验

称取本品 0.5g，按照上述方法配制成供试品溶液，取20μl照上述色谱条件进样，连续5次，记录色谱图，详见表1。试验表明，供试品溶液连续进样5次的RSD（%）均小于1.0，重现性良好，符合高效液相色谱法测定含量的要求。

表1 精密度实验

2.4溶液的稳定性试验

称取本品 0.5g，照含量测定项下的方法，制成供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时取20μl进样，记录色谱图。考察供试品溶液的稳定性。结果见表2。上述试验表明，样品溶液0小时与8小时后峰面积无明显变化，供试品溶液8小时内稳定。

表2 溶液的稳定性试验

2.5加样回收试验

精密称取丹皮酚原料（含量：99.6%）相当于测定量80%、100%、120%各3份，分别按处方混合并加入 10g的丹皮酚软膏，加流动相适量，搅拌使溶解并混合均匀。取适量定按照含量测定下的方法配制供试品溶液，并照含量测定项下的方法依法测定，记录色谱图，并计算各份含丹皮酚的量及回收率。试验结果见表3。本品在相当于标示量的80%～120%范围内，测得丹皮酚的平均回收率为99.78%，相对标准偏差（RSD%）为0.65。表明该方法准确度良好，符合高效液相色谱法对含量测定的要求。

表3 丹皮酚回收试验结果

2.6六批中试样品及市售品的含量测定

按照确定的高效液相的方法，对中试六批产品及市售品进行含量测定，结果见表4。结果显示中试六批产品与市售品中的丹皮酚含量相比，相对标准偏差（RSD%）为2.23。

表4 含量测定结果

3 结论

丹皮酚软膏为抗过敏药，有消炎止痒作用。临床主要用于各种湿疹、皮炎，皮肤瘙痒等皮肤疾病[2-4]；另外，丹皮酚软膏对过敏性鼻炎和防治感冒也有一定的治疗效果[5]。为了有效控制丹皮酚软膏中主要成分丹皮酚的含量，本研究应用高效液相色谱法建立了一种测定丹皮酚软膏中丹皮酚含量的分析方法。研究发现丹皮酚质量浓度为2.10～31.28μg/ml范围内，丹皮酚的质量浓度与色谱峰面积呈现良好的线性关系。供试品溶液连续进样5次的RSD（%）均小于1.0，重现性良好，符合高效液相色谱法测定含量的要求。样品溶液0小时与8小时后峰面积无明显变化，供试品溶液 8小时内稳定。本品在相当于标示量的80%～120%范围内，测得丹皮酚的平均回收率为99.78%，相对标准偏差（RSD%）为0.65。表明该方法准确度良好，符合高效液相色谱法对含量测定的要求。按照确定的高效液相的方法，对中试六批产品及市售品进行含量测定，结果显示中试六批产品与市售品中的丹皮酚含量相比，相对标准偏差（RSD%）为2.23。上述研究结果说明该方法测定本品含量的重现性好，准确可靠，专属性强，灵敏度高，符合高效液相色谱法对含量测定的要求。

[1]李骅，杨倩，王四旺，等.高效液相色谱法测定双丹胶囊中丹皮酚的含量[J].解放军药学学报，2011，27（3）：251-253.

[2]郜琪臻，杨希琴，俞旗峰，等.丹皮酚软膏的质量标准研究[J].中草药，2008，39（6）：866-867.

[3]尹毅.HPLC法测定复方丹皮汤中丹皮酚的含量[J].安徽医药，2009，13（9）：1045-1046.

[4]孙瑛蔚，徐芝育.高效液相色谱法测定蒲黄止血口服液中丹皮酚的含量[J].吉林中医药，2010，30（2）：172-173.

[5]林冬杰，卢万飘，蔡月莲.高效液相色谱法测定活血调经丸中丹皮酚含量[J].中国药业，2010，19（16）：24-25.

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