硫黄熏蒸对当归中阿魏酸含量的影响

姜丽楠，赵海霞，田 林

(1.山东中医药大学，山东 济南 250355;2.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011)

当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，始载于《神农本草经》，列为中品，具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效，主产于甘肃，并在甘肃、云南、四川、湖北等地形成道地产区［1］。当归含有多种化学成分，其中阿魏酸是其活性成分之一。具有抗肿瘤、抗突变［2］、抗氧化、清除自由基、细胞保护［2，3］、抗血小板凝集和血栓［4］、抗变态反应［5］等作用。

1 材料

1.1 试药 阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110773－201012)，乙腈，甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，硫黄(药用硫黄，山东信通化工有限公司)，当归购于甘肃岷县，经张学顺教授鉴定为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。

1.2 仪器 HPLC色谱仪(美国 Waters2996PAD、717Plus、600Controller)、AE200型250g电子天平(美国)、CP2250型电子分析天平(奥豪斯国际贸易有限公司)。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备 对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇25mL制成含阿魏酸161.60 μg·mL－1的溶液，即得。

供试品溶液的制备:取本品粉末(过3号筛)，约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70%甲醇20mL，密塞，称定，超声处理40min，密塞，称定，超声40min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，置25mL容量瓶中，加入70%甲醇至刻度，即得。

2.2 色谱条件 XB －C18色谱柱(4.6mm ×250mm，5μm)，流动相为乙腈－0.085%磷酸溶液(17∶83)，检测波长316 nm，柱温35 ℃，流速1.0mL·min－1，进样量10μL 理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。对照品和样品的HPLC图(见图1)。

图1 阿魏酸HPLC图谱

2.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL 于 25mL 量瓶中，加 70% 甲醇至刻度，对照品质量浓度分别为 3.232，6.464，12.93，19.39，25.86，32.32 μg·mL－1。进样量为 10μL，以质量浓度对峰面积积分值回归计算，结果表明各熏蒸品中阿魏酸含量在3.232～32.32 μg·mL－1线性关系良好，回归方程为 Y=53835X －57496(r=0.9999)。

2.4 精密度试验 精密吸取未熏蒸当归供试品溶液10μL，连续进样6次，记录阿魏酸峰面积，结果其RSD为1.00%。

2.5 稳定性试验 精密吸取未熏蒸当归供试品溶液10μL，每隔1 h进样一次，记录阿魏酸的峰面积，结果其RSD为1.28%。结果表明供试品溶液在5 h内稳定。

2.6 重现性试验 精密称取同一熏蒸工艺的样品5份，制备供试品溶液，分别进样10μL，按外标法计算阿魏酸的质量分数，结果RSD为0.92%。

2.7 回收率试验 精密称取当归粉末约0.5 g，平行5份，分别精密添加阿魏酸对照品约0.5mg，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果平均回收率为98.56%，RSD为2.16%，见表 1。

表1 硫黄熏蒸当归中阿魏酸的加样回收试验

3 熏蒸工艺研究

3.1 样品的制备［6］采用有机玻璃材料自制熏箱，熏箱内容积0.04 m3，内设一层网状隔板，熏箱顶部和底部各开一窗口，并且在4个侧面共留8小孔。试验时将500g当归均匀摆放于网状隔板上，称取规定量药用硫黄置于搪瓷盘中，并放入熏箱底部，点燃硫黄，关闭熏箱门，待硫黄形成明显蓝色火焰时，用胶带将熏箱门封闭。熏至规定时间后，开启并且将8个小孔打开，抽气1 h，最后开启熏箱门。

3.2 正交试验法优选 选用L9(34)试验设计，以阿魏酸为指标，结合实际生产，选择、硫黄用量(A)、熏蒸时间(B)、熏蒸次数(C)、抽风排气时间(D)作为考察因素。各因素水平见表 2，结果见表 3，4。

表2 因素水平

表3 正交试验结果

表4 方差分析

结果表明，因素A和B对硫黄熏蒸当归后阿魏酸有显著影响，因素C无显著影响，并确定当归经硫黄熏蒸的最佳工艺为硫黄用量100g·cm－3，熏蒸1次，每次2 h。

3.3 验证试验 取当归饮片3批，各250g，按优选出的熏蒸工艺条件进行熏蒸，并测定阿魏酸的质量分数，分别为0.05278%，0.05261%，0.05243%。表明优选的工艺条件稳定可行。

4 讨论

硫黄熏蒸对当归中阿魏酸的含量有一定的影响，且随着硫黄用量增加、熏蒸时间延长、次数增加而呈减少的趋势。硫黄熏蒸是中药的养护方法之一。当归经硫黄熏蒸后，外观美白光亮、利于干燥、防腐、防霉、防蛀虫，能够有效延长贮存保质的时间。但当归经硫黄熏蒸后不仅对其有效成分有影响，其二氧化硫残留量及重金属都易产生。

综上所述，当归熏硫弊多利少，因此既能保持当归较好的外观，又能保证其质量及用药安全，新的加工工艺势在必行。

［1］孙红梅，张本刚，齐耀东，等.当归药材资源调查与分析［J］.中国农学通报，2009，25(23):437 －441.

［2］Kawabata K，Yamamoto T，Hara A，et al.Modifying effects of ferulic acid on azoxymethane－induced colon carcinogenesis in F344 rats［J］.Cancer Lett，2000，157(1):15 －21.

［3］Ogiwara T，Satoh K，Kadoma Y，et al.Radical scavenging activity and cytotoxicity of ferulic acid［J］.Anticancer Res，2002，22(5):2711 －2717.

［4］黄丰阳，徐秋萍.中药有效成分的抗血小板作用研究进展［J］.北京中医药大学学报，1999，22(2):28－31.

［5］刘颖.浅议当归的化学成分与临床药理作用［J］.中国医药指南，2010，8(27):51 －53.

［6］赵海霞，刘伟.硫黄熏蒸对山药中尿囊素的影响［J］.中草药，2009，40(6):903 －904.