e抗原阳性乙肝患者细胞免疫状态对干扰素疗效的影响

奚伟星

[摘要] 目的 探讨基线细胞免疫状态对干扰素（IFN）疗效的影响。 方法 选择e抗原阳性CHB患者67例，采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射。基线时用流式细胞术（FCM）检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然杀伤（NK）细胞，按治疗结束时的完全应答（CR）或非完全应答（NCR）分为两组，比较两组基线时淋巴细胞亚群及ALT、HBV DNA定量、年龄等的差异。 结果 两组间基线时CD8+、ALT、年龄差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；CR组基线HBV DNA定量低于NCR组，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于NCR组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论 通过血淋巴细胞亚群的检测可以监控患者的免疫状态，从而为抗病毒治疗提供帮助。

[关键词] 慢性乙型肝炎；淋巴细胞亚群；聚乙二醇干扰素

[中图分类号] R512.6+2[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2012）16-0113-02

The influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon in HBeAg positive hepatitis B patients

XI Weixing

Department of Clinical Laboratory，Tongde Hospital in Zhejiang Province, Hangzhou 310012, China

[Abstract] Objective To explore the influence of baseline cellular immunity to the therapeutic responses of interferon. Methods Selected 67 cases of e antigen positive CHB patients and treated with subcutaneous injection of 180 μg polyethylene glycol IFNα-2a. Levels of CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, natural killer (NK) cells at baseline were determined by flow cytometry (FCM). The patients were divided into two groups according to complete response (CR) or non-complete response (NCR) at the end of treatment. The differences of lymphocyte subsets, ALT, HBV DNA quantitation and age at baseline of two groups were compared. Results There were no significant difference for CD8+, ALT, age at baseline of the two groups (P ＞ 0.05); Baseline HBV DNA quantitation of CR group was lower than that of NCR group, and CD3+, CD4+, CD4+/CD8+, NK of the CR group were higher than the NCR group, and the differences were statistically significant (P ＜ 0.05). Conclusion Through the blood lymphocyte subsets testing can monitor patients'' immune status, so as to provide help for antiviral treatment.

[Key words] Chronic hepatitis B; Lymphocyte subsets; PEG-interferon

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是引起慢性肝炎、肝硬化、甚至肝细胞癌的主要病原体。乙型肝炎的发病机制复杂，至今尚未完全阐明。目前普遍认为宿主的免疫应答在乙型肝炎的发病机制中起主要作用，细胞免疫反应是HBV感染后引起肝细胞损害的主要机制。研究表明，机体感染HBV后，外周血淋巴细胞亚群间的平衡被打破，细胞亚群之间的调节紊乱是体内不能清除HBV及HBV在肝内持续复制的主要原因。干扰素抗病毒的作用机制有两个方面：①调节机体免疫，加强辅助T细胞1型（Th1）作用，分泌IL-2等细胞因子，促进HBV特异细胞毒T细胞（CTL）和自然杀伤（NK）细胞的活性，又刺激巨噬细胞产生细胞因子，增强细胞免疫。②IFN-α与细胞膜上干扰素受体1（IFN-R1）结合，诱导细胞内染色体产生抗病毒蛋白。因此聚乙二醇IFN-α作为慢性乙型肝炎抗病毒治疗的首选药物之一。影响IFN-α疗效的因素颇多，报道结果亦多有差异，总体来看可分为病毒因素和宿主因素两大类。在病毒因素方面，有病毒载量、基因型等；而宿主因素则较复杂，除性别、年龄、感染时间长短、ALT基线值的高低等外，宿主的细胞免疫状态也是决定疗效的重要因素，甚至可能是最重要的宿主因素，其他因素可能只是免疫因素的外在反映。抗病毒治疗前的细胞免疫状态对应答率的影响目前报道较少。外周血细胞亚群是反映慢性乙型肝炎患者免疫状态的重要指标[1]。本研究通过比较不同应答组之间淋巴细胞亚群、HBV DNA定量、ALT、年龄等的差异，探讨CHB患者IFN治疗前细胞免疫状态对抗病毒疗效的影响。

1对象与方法

1.1研究对象

选择2006年8月～2008年8月我科门诊及住院的e抗原阳性慢性乙型肝炎患者67例，临床诊断均符合2005年中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》[2]的诊断标准。所选患者均为男性，基因型均为C型，中位年龄36（18～60）岁，1年内均未应用过抗病毒及免疫调节剂治疗，并排除以下疾病：重叠HAV、HCV、HDV、HEV或HIV感染与脂肪肝、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化、肝癌。

1.2 治疗方法及疗效判断标准

全部患者采用聚乙二醇IFNα-2a 180 μg皮下注射，每周1次，疗程52周。治疗期间不合并使用免疫调节药物，但允许加用利血生片、地榆升白片或重组人粒细胞集落刺激因子等升白细胞药物辅助治疗。52周治疗结束时完全应答标准为HBV DNA＜1 000拷贝/mL、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）正常、e抗原转阴、e抗体转为阳性。符合完全应答者为完全应答（complete response，CR）组，其余为非完全应答（non-complete response，NCR）组。

1.3 指标检测

采用美国Becton Dickinson公司的FACS Canto流式细胞分析仪及试剂用于检测基线时CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然杀伤（NK）细胞，正常值范围：CD3+ 50%～84%、CD4+ 27%～51%、CD8+ 15%～44%、CD4+/CD8+ 0.71%～2.78%、NK 7%～40%。肝脏生化学指标及血清HBV标志物检测采用美国Abbott公司ARCHITECT ci8200型生化、免疫分析仪及原装试剂，正常值范围：ALT（0～40）U/L，HBeAg（0～1）s/co为阴性，HBeAb（0～1）s/co为阳性。HBV DNA定量采用Roche Light Cycler荧光定量PCR分析仪检测，试剂由深圳匹基生物工程有限公司提供，最低检测限为1 000 copies/mL。观察基线、治疗52周时血清ALT、HBV DNA定量的情况及HBeAg血清转换情况。

1.4 统计学处理

应用SPSS 17.0统计学软件进行分析，非正态分布数据采用Mann-Whitney检验，正态分布数据采用t检验，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者基线一般情况比较

CR组与NCR组基线HBV DNA定量Log值分别为6.04±0.70和7.23±0.68，t值为-6.97，P ＜ 0.05，表明CR组HBV DNA定量低于NCR组，且差异有统计学意义；两组年龄（岁）中位数分别为35（18～58）和36（23～60），秩均值分别为32.21和35.28，秩和分别为902和1 376，Z值为-0.64，P ＞ 0.05；ALT（U/L）中位数分别为223（120～910）和158（117～537），秩均值分别为39.20和30.27，秩和分别为1 097.50和1 180.50，Z值为-1.85，P ＞ 0.05，提示两组之间年龄及ALT差异无统计学意义。见表1。

2.2 两组T细胞亚群及NK细胞的比较

应用聚乙二醇IFNα-2a治疗52周获得完全应答组其基线CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于非完全应答组且差异有统计学意义，但CD8+与非完全应答组比较，差异无统计学意义。

3 讨论

CD3+代表T淋巴细胞总数，CD8+ T细胞是与病毒清除直接有关的细胞亚群，细胞溶解或非溶解机制是CD8+ T细胞清除HBV的主要方式，CD8+ T细胞在病毒清除过程中起着关键作用[3，4]。但CD4+ T细胞对CD8+ T细胞的增殖与活化具有重要调节作用，并能通过分泌Th1类细胞因子下调HBV的复制。研究表明，慢性乙型肝炎患者CD4+ T细胞反应有助于优化CD8+ T细胞反应，乙型肝炎患者体内CD8+ T细胞反应明显受CD4+ T细胞调节，CD4+ T细胞下降，影响CD8+ T细胞的增殖与活性，特别是细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的增殖与活性及特异性抗体的产生，从而导致病毒难以被清除[5-8]。本研究选择男性、C型基因型的患者作为研究对象，去除了性别及基因型对干扰素疗效的影响。本研究结果发现，聚乙二醇IFNα-2a治疗结束时完全应答组基线时具有较高的CD4+，而较高的CD4+ T细胞反应有助于优化CD8+ T细胞反应，提高CD8+ T细胞的增殖与活性，特别是细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的增殖与活性及特异性抗体的产生，从而使病毒容易被清除。完全应答组与非完全应答组基线时的CD8+差异无统计学意义，可能为非完全应答组较高的病毒负荷及CD4+ T细胞的减少对CD8+ T细胞有负性调节作用所致[6]。非完全应答组患者基线CD4+ T细胞偏低，缺乏Th1细胞有效辅助，CD8+ T细胞不能有效清除病毒，CD4+/CD8+比值较低，比例失衡较明显，免疫紊乱较重，从而可能是造成应用干扰素治疗应答不佳的主要因素之一。NK细胞是不同于T、B淋巴细胞而具有直接杀伤靶细胞效应的特殊的淋巴细胞，是机体天然免疫的承担者，具有抗肿瘤、抗感染、免疫调节功能，在乙型肝炎的感染、发病、发展及转归中，特别是在HBV感染和造成肝细胞免疫损害方面都可能有重要意义[9]。本研究提示，完全应答组基线NK细胞水平较高，与非完全应答组比较有显著性差异，提示基线时较高的NK细胞可使机体干扰病毒复制和抗感染能力较高，从而在聚乙二醇干扰素的应用下可使HBV更容易被清除，并更容易获得完全应答。本研究还显示，完全应答组基线时HBV DNA较低，考虑可能与患者免疫功能较强、较高的CD4+ T细胞抑制HBV复制及优化CD8+ T细胞反应特别是CTL的增殖与活性从而导致病毒易被清除等有关。两组之间ALT及年龄无显著性差异，进一步表明在年龄、性别、基因型、ALT水平可比的前提下，基线较高的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK可致基线HBV DNA偏低，应用干扰素抗病毒治疗更容易获得较好的治疗效果。因此，基线时的细胞免疫状态可能影响IFN的应答率，可以通过检测基线时的免疫功能为抗病毒治疗提供帮助。

[参考文献]

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（收稿日期：2011-11-07）