小花玄参中总皂苷的定性定量分析

包锦渊 朱海旭 高洁 桂光菊

摘要：采用化学试剂法和分光光度法对小花玄参（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）中总皂苷成分进行定性、定量分析。以菝葜皂苷元为对照品，于３１１ ｎｍ处比色测定，测得小花玄参中总皂苷含量为１１．０５ ｍｇ／ｇ，平均回收率为９７．５％，ＲＳＤ为１．５９％（ｎ＝６），该测定方法简便、准确，稳定性、重现性好。

关键词：小花玄参（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）；总皂苷；定性分析；定量分析

中图分类号：Ｒ２８４.２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）18－4109-02

Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ sｏｕｌｉｅｉ

ＢＡＯ Ｊｉｎ－ｙｕａｎ，ＺＨＵ Ｈａｉ－ｘｕ，ＧＡＯ Ｊｉｅ，ＧＵＩ Ｇｕａｎｇ－ｊｕ

（Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ. was conducted ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ. According to A311 nm of sample tested using Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｗａｓ １１．０５ ｍｇ／ｇ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ.. Tｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ９７．５％； ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．５９％ （ｎ＝６）． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｗｉｔｈ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ； ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ； ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ

小花玄参（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）属玄参科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）玄参属细弱小草本，为我国特有种，产于四川西部、青海东部和甘肃东南部。玄参科植物中含有皂苷类成分，主要为甾体皂苷，由此推测小花玄参中含有甾体皂苷。皂苷具有多种药理学功能，如抗炎、抗肿瘤等［１］。因此，有必要对小花玄参中的皂苷进行研究。本研究通过化学试剂法和分光光度法对小花玄参中总皂苷成分［３］进行定性［２］和定量测定，为总皂苷的快速定性定量分析提供参考。

１材料与方法

１．１材料

ＨＨ－４数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），ＲＥ ５２８５Ａ旋转蒸发器（上海亚荣生华仪器厂），ＴＵ－１２２１型紫外分光光度计（北京普析通用有限公司），索氏提取装置。

对照品：菝葜皂苷元（中国药品生物制品检定所）；供试样品：小花玄参茎叶（２０１１年７月采于青海省玉树州代格村农作物地，中科院西北高原生物研究所鉴定）；所用试剂均为分析纯。

１．２方法

１．２．１供试品溶液的制备称取０．５ ｇ小花玄参茎叶粉末（１００目），精确到０．０００ １ ｇ，置于索氏提取器中，加适量石油醚脱脂１ ｈ，冷却后，倾出石油醚提取液，残渣蒸干后加入甲醇１００ ｍＬ，提取至无色，回收减压至干，加蒸馏水１０ ｍＬ溶解，用饱和正丁醇萃取４次（１５、１０、１０和１０ ｍＬ），合并正丁醇部分，减压回收至干，加２０ ｍＬ ２ ｍｏｌ／Ｌ HCl，水浴回流３ ｈ后冷至室温，用氯仿萃取３次，２０ ｍＬ／次，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转至２５ ｍＬ容量瓶中，定容，制得供试品溶液。

１．２．２定性检识①醋酐－浓硫酸（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ）检测：取供试液２ ｍＬ，沸水浴上蒸干，加入浓硫酸－醋酐（１∶２０，V/V）数滴，观察颜色变化情况；②三氯醋酸检测：将供试液滴在滤纸上，喷洒２５％（ｍ／Ｖ）三氯醋酸－乙醇溶液，加热并观察６０ ℃和１００ ℃时颜色变化情况；③氯仿－浓硫酸（Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ）检测：将供试液水浴蒸发所得样品溶于氯仿后加入浓硫酸，观察氯仿层和硫酸层颜色和荧光。

１．２．３对照品溶液的制备称取７．５ ｍｇ菝葜皂苷元对照品以甲醇定容于２５ ｍＬ容量瓶中，配制成０．３ ｍｇ／ｍＬ的对照品溶液。

１．２．４测定波长选择分别精密吸取对照品溶液０．２ ｍＬ、供试品溶液０．１ ｍＬ置１０ ｍＬ具塞试管中，挥尽溶剂，加入５ ｍＬ高氯酸，７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷却后，在２１０～４５０ ｎｍ范围内扫描，取最大吸收波长为检测波长。

１．２．５标准曲线制备精密吸取不同体积的对照品溶液于１０ ｍＬ具塞试管中，挥干后加入５ ｍＬ高氯酸， 于７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷却，最大吸收波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（Ｃ），吸光度为纵坐标（Ａ），绘制标准曲线。

１．２．６精密度试验取对照品溶液４．０ ｍＬ，以甲醇调零，在最大吸收波长处测定吸光度，重复测定６次。

１．２．７稳定性试验取供试品溶液０．６ ｍＬ，定容至１０ ｍＬ，间隔１０ ｍｉｎ测定吸光度，重复测定６次。

１．２．８重复性试验精密称取５份同一供试样品，同上方法处理，测定吸光度。

１．２．９加标回收试验称取０．１００ ０ ｇ已知含量的供试样品粉末６份，分别准确加入对照品溶液，测定吸光度，计算含量。

１．２．１０样品测定称取０．５ ｇ小花玄参茎叶粉末，精确到０．０００ １ ｇ，制得供试品溶液，测定吸光度，根据回归方程计算总皂苷含量。

２结果与分析

２．１定性结果

通过定性试验可判断小花玄参茎叶中主要含有甾体皂苷类成分，可能含有三萜类化合物。

２．２定量检识结果

２．２．１选择测定波长并绘制标准曲线在２１０～４５０ ｎｍ进行扫描，选择测定波长，发现对照品和供试品溶液均在３０８～３１５ ｎｍ 处有最大吸收，选择３１１ ｎｍ作为测定波长。在此波长下测吸光度绘制标准曲线，得回归方程：Ａ＝０．１０３ ２Ｃ＋０．１９４，ｒ＝０．９９９ １。结果表明，菝葜皂苷元在０．２９３ ５～０．７１４ ７ ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。

２．２．２方法评价精密度试验中，６次测定吸光度的ＲＳＤ为１．０４％，表明仪器精密度良好；稳定性试验中，每隔１０ ｍｉｎ测定吸光度的ＲＳＤ为１．１２％，表明在６０ ｍｉｎ内样品溶液的稳定性良好。重复试验的ＲＳＤ为１．０８％，表明本方法重现性较好。

加样回收试验结果见表１。由表１可知，该方法的平均回收率为９７．５％，符合回收率要求（９５％～１０５％），ＲＳＤ为１．５９％。

２．２．３样品测定结果样品的总皂苷平均含量为１．１０５％，ＲＳＤ为２．４０％，结果见表２。

３讨论

预试验分别对提取溶剂（不同浓度乙醇和甲醇）、提取方法（超声和回流）及提取时间进行了单因素和正交试验分析［４，５］，最后确定了文中供试液的制备方法。小花玄参茎叶中主要含有甾体皂苷，菝葜皂苷元为各类甾体皂苷的母核皂苷元，故可采用该化合物作为对照品；本试验采用分光光度法测定小花玄参中总皂苷含量，线性关系好，方便快速。本结果表明，小花玄参茎叶中总皂苷含量较高，为开发小花玄参中的皂苷提供了依据。

参考文献：

［１］ 孙耀军，邹建．皂苷不同测定方法的比较［Ｊ］．江西食品工业，２００９（２）：３０－３１．

［２］ 宋晓凯．天然药物化学［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２０１０．１８８－２３１．

［３］ 郭秋平，吴湖坤，关红晖，等．不同产地的知母中总皂苷和菝葜皂苷元的含量测定［Ｊ］．时珍国医国药，２００８，１９（６）：１４１０．

［４］ 王莹莹，寇永奎，朱建松．甾体皂苷提取分离及结构研究方法［Ｊ］． 华中师范大学研究生学报， ２００７，１４（１）：１４３－１４７．

［５］ 奚广生，张影．玉竹中甾体皂甙提取工艺研究［Ｊ］．湖北农业科学，２０１１，５０（１）：１４０－１４２．

收稿日期：２０１２－０７－０２

基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０９６０２０７）；青海省重点攻关课题（２００９－Ｚ－７０５）

作者简介：包锦渊（１９５８－），男，甘肃通渭人，教授，主要从事植物化学研究，（电话）１３８９７４２１８７８（电子信箱）ｂａｏｊｉｎｙｕａｎｄ＠１２６．ｃｏｍ。