HPLC法测定瑶族藤茶中没食子酸的含量

黄秋洁　叶勇　欧贤红　刘华钢

摘要：采用Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｌｕｎａ）Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，流动相为甲醇－０．０５％磷酸（１０∶９０，Ｖ／Ｖ），检测波长为２８０ｎｍ，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３０℃，建立了瑶族藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）中没食子酸的ＲＰ－ＨＰＬＣ定量分析方法。结果表明，没食子酸进样量在０．０５７４～０．３４４４μｇ范围内与峰面积线性关系良好（ｒ＝０．９９９９），平均回收率为９９．１５％（ＲＳＤ＝１．８０％）。本法简便快捷，可用于瑶族藤茶中没食子酸的含量测定。

关键词：藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）；没食子酸；高效液相色谱

中图分类号：Ｏ６５７．７＋２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）24－5764-02

藤茶是葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物，学名为显齿蛇葡萄［Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ（Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ．）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ］，俗称藤茶、藤婆茶等［１］。藤茶是瑶族常用药之一，入药以叶为主，至今已有数百年的药用历史。广西瑶族人民常将其幼嫩茎叶制成保健茶，用于治疗感冒发热、咽喉肿痛等症，药理研究表明藤茶及其提取物具有抑菌、降血脂、降血压等功效［２］。现已从该植物体中分离了二氢杨梅素（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、杨梅素（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、没食子酸甲酯、没食子酸、没食子酸乙酯等成分［３－６］，目前已有关于藤茶中黄酮类成分含量测定的文献报道［７，８］，但未见藤茶中没食子酸含量测定的报道。本试验建立了ＨＰＬＣ法测定藤茶中没食子酸含量的方法，为藤茶及其制剂的研制提供质量控制依据。

１ 材料与方法

１．１ 材料

藤茶购于广西恭城县，并经广西中医药大学刘寿养副教授鉴定为显齿蛇葡萄的干燥嫩茎叶。

甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为去离子水；没食子酸对照品，购于桂林莱茵生物科技股份有限公司，含量大于９８％）。

１．２ 仪器

Ａｇｉｌｅｎｔ－１２００高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司），包括四元梯度泵、二极管阵列检测器、微量自动进样器、柱温箱和化学工作站；ＸＳ２０５ＤＵ电子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；ＳＫ２５１０ＨＰ超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。

１．３ 方法

１．３．３ 样品溶液的制备 准确称取样品粉末０．５ｇ，甲醇溶解，超声３０ｍｉｎ至样品完全溶解后，定容至２５ｍＬ，过０．４５μｍ的微孔滤膜后待测。

２ 结果

２．１ 线性关系考察

２．２ 精密度试验

精确吸取浓度为０．０２８７ｍｇ／ｍＬ的没食子酸对照品溶液１０μＬ，按以上色谱条件连续进样６次，测定峰面积。测定值的ＲＳＤ为０．５８％，表明仪器精密度良好。

２．３ 稳定性试验

分别于０、２、４、８、１０、１２ｈ吸取供试品溶液１０μＬ注入色谱仪，测定峰面积，测定值的ＲＳＤ为０．９６％，表明供试品溶液在１２ｈ内稳定性良好。

２．４ 重复性试验

取６份同一批药材样品，制备供试品溶液后，各取１０μＬ注入色谱仪，测定峰面积，测定值的ＲＳＤ为２．１２％，表明方法重复性良好。

２．５ 加样回收率试验

２．６ 样品含量测定

３ 讨论

在预试验中考察了温浸提取法、超声法及加热回流法等方法，其中温浸提取法时间长、效率低、操作繁琐，加热回流法与超声提取法的结果没有明显差异，但加热回流法的杂质较多，干扰样品的测定，而超声法提取效率高、快速、杂质干扰少、操作简单，因此最终选择超声提取法。同时比较了不同超声提取时间的测定结果，结果表明超声提取３０ｍｉｎ后样品中没食子酸含量不再增加，因此选取３０ｍｉｎ为超声提取时间。本试验还考察了不同提取溶剂：甲醇、体积分数为５０％（下同）的甲醇-水、３０％的甲醇-水及水等，发现用甲醇和５０％甲醇-水作为溶剂提取没食子酸含量较高，两者所得结果无明显差异，但５０％甲醇-水提取的样品中杂质干扰较多，难以分离测定，故以甲醇作为提取溶剂。

本试验建立了测定瑶族藤茶中没食子酸含量的HPLC方法，结果表明，该法简便快捷，测定结果准确，能分析藤茶药材中没食子酸的含量，完善了藤茶药材中黄酮类成分含量进行测定的质量控制方法，对藤茶药材及其制剂的质量控制具有现实的指导意义。

参考文献：

［１］中国科学院植物研究所．中国高等植物图鉴（第二册）补编［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８３．３４９．

［２］莫国艳．藤茶药理作用研究进展［Ｊ］．广西中医学院学报，２００３，６（４）：６６－６７．

［３］袁阿兴，黄筱美，陈 劲．显齿蛇葡萄化学成分的研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９８，２３（６）：３５９．

［４］王定勇，刘佳铭，章骏德，等．显齿蛇葡萄（藤茶）化学成分研究［Ｊ］．亚热带植物通讯，１９９８，２７（２）：３９．

［５］王 岩，周莉玲，李 锐，等．显齿蛇葡萄化学成分的研究［Ｊ］．中药材，２００２，２５（４）：２５４．

［６］张友胜，杨伟丽，崔 春．显齿蛇葡萄化学成分的研究［Ｊ］．中草药，２００３，３４（５）：４０２．

［７］覃洁萍，谭建宁，欧 莹，等．广西瑶族藤茶中双氢杨梅树皮素的含量测定方法研究［Ｊ］．中国新药杂志，２００４，１３（１０）：９１５．

［８］张友胜，杨伟丽，龚雨顺．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量［Ｊ］．中草药，２００１，３２（１１）：９８３．