正交试验优选丹川胶囊的醇提工艺

葛 莉 冯一凡 王卫锋 李 芳 张小莉

陕西中医学院10级研究生（咸阳712046）

丹川胶囊由丹参、川芎、天麻等药物组成，具有益气活血、疏经通络之功，用于急性高原病的治疗。为了有效控制提取工艺，本文将采取正交试验法，以丹参酮ⅡA、丹酚酸B结合醇浸出物为评价指标，确定最佳醇提取工艺条件。

1 仪器与试药 1.1 试药 丹参、川芎、天麻等中药均购自陕西省药材公司，经检验均符合《中国药典》2010年版一部的规定［1］；丹参酮ⅡA对照品（批号1107－200416，供含量测定用）；丹酚酸B对照品（批号111562－201110，供含量测定用）；均购自中国药品生物制品检定所。所用化学试剂为分析纯（天津富宇化学试剂厂）、液相用试剂为色谱纯（美国Fisher scintific）、水为娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 仪器 高效液相色谱仪（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二极管阵列检测器，活德国际贸易（上海）有限公司；Millennium 32色谱工作站）、C18色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超声波清洗机（H66025T）、TGL－16G离心机（上海安亭科学仪器厂）、HCTP11B10托盘药物天平（北京市宣武区天平厂）、BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）。

2 方法与结果 2.1 醇提工艺 正交设计为了确定最佳的提取参数，拟采用正交试验对提取工艺中所涉及的条件进行优选，通常情况下：提取时间、加醇量、提取次数以及乙醇浓度对提取结果影响较大，因此，以提取时间、加醇量、提取次数、乙醇浓度作为影响因素，各选择三个水平，以L9（34）表安排试验，筛选最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

2.2 评价指标 确定丹参为方中君药，丹参酮ⅡA以及丹酚酸B为其主要有效成分，且其含量测定有成熟方法，可用HPLC法测定提取物中丹参酮ⅡA以及丹酚酸B的含量，因此选择以丹参酮ⅡA、丹酚酸B的含量并结合醇浸出物作为评价指标。

2.3 样品溶液的制备 按处方比例量称取醇提工艺部分的药材（丹参、川芎各36g，天麻18g）90g，共9份，按正交实验表下设计的实验条件以加热回流方式进行提取，合并提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。

表1 因素水平表

2.4 醇浸出物测定方法 取各正交试验号提取液50mL，于干燥至恒重的蒸发皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，称重，计算。

2.5 含量测定 2.5.1丹酚酸B含量测定［2，3］：

2.5.1.1 色谱条件：色谱柱：C18色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈－甲醇－（甲酸：水）｛10：30：60（1：59）｝；流速1.0mL·min－1；检测波长286nm；柱温25℃；进样量10μL。

2.5.1.2 对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.1348mg的溶液，摇匀，即得。

2.5.1.3 供试品溶液的制备：分别精密吸取各提取液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.5.1.4 测定法：分别吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入色谱仪，测定并计算。

2.5.2 丹参酮ⅡA 含量测定［4，5］：2.5.2.1色谱条件：色谱柱：C18色谱柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水（75：25）；流速1.0mL·min－1；检测波长270nm；柱温25℃；进样量10μL。

2.5.2.2 对照品溶液的制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成每1mL含11mg的溶液，摇匀，即得。

2.5.2.3 供试品溶液的制备：分别精密吸取各提取液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.5.2.4 测定法：分别精密吸取对照品溶液及上述供试品溶液各10μL，注入色谱仪，测定并计算。

2.6 结果及分析正交试验 结果见表2，方差分析结果见表2。

表2 醇提L9（34）正交试验表及结果

表3 方差分析表

试验结果表明，提取次数对提取量影响较大，由正交试验结果以及方差分析结果表现出来的最佳工艺为A2B2C3D2。即：加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5h。

2.7 验证试验 按处方量称取各药材共135g，共3份，按照所选提取条件试验，并测定丹参酮ⅡA、丹酚酸B的含量和醇浸出物。结果见表4。

表4 验证试验结果

3次验证试验表明，检测指标接近或者高于正交表中最优值，说明优选的提取条件基本可行。

3 讨 论 3.1 在对醇提工艺条件进行优选时

我们同时考察了丹参酮ⅡA、丹酚酸B的含量和醇浸出物，这比采取单一指标对提取工艺进行评价更加科学和合理。

3.2 根据本实验优选的最佳工艺 经三批中试放大生产，结果产品质量稳定，适合工业化大生产。

［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：人民卫生出版社，2010，70－71.

［2］ 苑相爱.高效液相色谱法测定心肌炎颗粒中丹酚酸B含量 ［J］.中国药业，2010，19（3）：21－22.

［3］ 杜中良，程振田.正交试验优选丹参中丹酚酸B的提取工艺 ［J］.中国药房，2010，21（31）：2911－2912.

［4］ 黄爱英.HPLC法测定复方丹参合剂中丹参酮ⅡA的含量 ［J］.中医药导报，2011，17（4）：110－111.

［5］ 宋志钊，刘元，莫海涛，等.HPLC法测定千斤脑康宁胶囊中丹参酮ⅡA ［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（6）：79－80.