活血通脉注射液对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

赵 燕 陕西省铜川市人民医院（铜川727000）

活血通脉注射液经皮腔内冠状动脉介入术（Percutaneous coronary intervention，PCI）已成为治疗冠心病的主要手段之一，但术后再狭窄严重影响其远期的治疗效果，介入术后再狭窄率可高达40%～50%［1］。介入手术后，虽在一时解决了心血管的局部阻塞问题，但它只是对出现问题的血管进行了局部处理，并没有从根本上解决造成血管狭窄的病因，支架介入术后，原先没有出现病变的血管仍有可能出现阻塞、狭窄。其晚期血栓或迟发血栓却是致命的并发症，一旦发生，往往危及患者生命［2］。所以后续的药物治疗和生活方式的调整，除了能防止原先放入支架的血管出现再狭窄，还能防止没有病变的血管发生病变。已有研究表明，某些中药具有抑制血管内膜增生、抑制平滑肌细胞增殖的作用［3］。本实验探讨了活血通脉对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响，现报道如下。

1 材料与方法 1.1 试验动物与材料 选取健康SD大鼠80只（雌雄各半），月龄6～8个月，体重1.51±0.22Kg，由本院实验动物中心提供（动物合格证号：SCXK2003－0003）。中药活血通脉注射液：由人参、麦冬、川芎组成，国药准字Z20100032，成都森科制药有限公司。阿托伐他汀：河南天方药业股份有限公司，国药准字H20093757。一氧化氮试剂盒购自北京三博生物科技有限公司，内皮素试剂盒购自上海生物生物工程研究所

1.2 分组方法 把SD大鼠80只随机分为4组，每组20只，雌雄各半，A正常对照组；B模型组；C活血通脉注射液组；D阿托伐他汀组。B、C、D组行手术造模。

1.3 术造模 用20%乌拉坦溶液以5mL／Kg腹腔注射麻醉大鼠，仰位固定，切开皮肤，分离右股动脉，穿刺右股动脉，逆行导入直径0.5mm的球囊导管至肾动脉下方，盐水充盈球囊，抽空球囊内液体，重复上述过程2次，达到剥脱动脉内皮的目的，建立动物心脏狭窄模型。

1.4 给药方法A组动物未经手术及用药；B组动物经历手术但未用药；C组动物于术前1d开始给予活血通脉注射液（4mL／kg／d），腹部静脉缓慢注射：D组动物于术前1d开始给予阿托伐他汀片（1mg／kg／d）口服。C组与D组的用药天数都为15d。

1.5 指标检测 1.5.1血清NO和血浆ET检测：动物冠心病模型建立2周后，麻醉实验动物，腹主动脉取血，血样注入含7.5%EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl的试管中；用低温离心机4℃3000rpm离心10min，分离血清，－70℃保存。血清NO测定：硝酸还原酶法；血浆ET测定：放免法。

1.5.2 光镜检查：造模2周，实验动物麻醉后，小心并迅速分离出腹主动脉，截取长约10mm腹主动脉，用于光镜检测，4℃冰箱保存。照相采用OLYMPUS AX70显微照像系统。内膜面积＝内弹力板围绕面积－管腔面积，中膜面积＝外弹力板围绕面积－内弹力板围绕面积，内膜增殖指数＝内膜面积／（内膜面积＋中膜面积）。

1.6 统计学处理 数据处理采用SPSS19.0统计分析软件包进行统计学处理。NO、ET检测与光镜图像测量等资料采用±s表示，组间两两比较采用方差分析。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果 2.1 血清NO和血浆ET检测结果 由表1可见，鼠腹主动脉球囊损伤后，血清NO明显下降、血浆ET明显升高（P＜0.01）。活血通脉注射液组和阿托伐他汀组血清N0水平明显升高（P＜0.05），血浆ET水平显著降低（P＜0.05）。

表1 活血通脉对大鼠血清NO和血浆ET的影响（±s）

表1 活血通脉对大鼠血清NO和血浆ET的影响（±s）

组 别 n NO（μmol／L） ET（pg／mL）正常对照组 20 73.24±7.25 80.84±12.69模型组 20 53.65±.25 118.95±14.20活血通脉注射液组 20 66.79±5.62 86.30±11.84阿托伐他汀组 20 60.28±6.13 84.95±15.62

2.2 光镜观察结果 正常对照组：腹主动脉血管壁界限清楚，分为内膜、中膜和外膜。内膜为单层内皮细胞，中膜的主要细胞成分是平滑肌细胞，外膜为薄层纤维结缔组织。模型组可见内膜不规则地增厚，部分突向管腔，增厚的内膜以平滑肌细胞及基质为主。活血通脉注射液组和阿托伐他汀组内膜增生程度有不同程度的减轻。

2.3 光镜图像分析结果 由表2可见，经过光镜图像分析，正常对照组大鼠主动脉内膜面积无法测量。模型组内膜增生明显，活血通脉注射液组和阿托伐他汀组内膜面积明显减少（P＜0.01）；活血通脉注射液组内膜增殖指数明显降低（P＜0.01）。

表2 活血通脉对大鼠腹主动脉内膜增生的影响（cm2，±s）

表2 活血通脉对大鼠腹主动脉内膜增生的影响（cm2，±s）

组 别 n 内膜面积 中膜面积 内膜增殖指数正常对照组 20 0 21.85±2.52 0模型组 20 9.86±1.21 23.95±2.52 0.29±0.01活血通脉注射液组 20 7.75±1.06 23.81±3.32 0.25±0.01阿托伐他汀组 20 8.02±0.85 22.39±0.28 0.26±0.03

3 讨 论 冠心病的介入治疗术后最常见的问题是血管再狭窄。球囊及支架的置入会损伤血管，内皮剥落，导致血管重构以及启动了局部血栓形成和炎症反应。血管平滑肌细胞向内膜迁移和过度增殖，在迁移过程中，大量胶原、弹力蛋白、纤维连接蛋白、多糖等基质沉积在血管壁，导致内膜增生，形成再狭窄［4］。据统计，球囊扩张术后再狭窄高达50%，金属裸支架植入术后高达20%～30%，药物支架置入后仍达5%～10%。经大量临床实验证实，介入治疗术后3个月是再狭窄形成的关键时期，如果能在这段时间避免再狭窄的发生，则术后再狭窄的发生几率会非常低［5］。

在常规药物预防中，阿托伐他汀能抑制细胞内胆固醇合成限速酶，通过其降脂作用可以防止动脉粥样硬化的发生和发展［6］。中医认为，介入后再狭窄属中医血瘀证范畴，冠脉介入治疗后的病机特点为本虚为主，兼有邪实。因此冠脉介入治疗后的中医辨证治疗偏重于本虚的治疗，从整体上调整阴阳平衡，改善脏腑功能，治疗上多以益气、活血、化痰为主［7］。本文所采用的中药活血通脉注射液是在益气养阴、活血通络治疗原则指导下组成的中药复方制剂，由人参、麦冬、川芎成，方中人参大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神，用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少；麦冬具有养阴生津，润肺清心的作用，可用于肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，内热消渴，心烦失眠，肠燥便秘；川芎活血行气、祛风止痛的功效，诸药合用，共奏活血通络之功［8，9］。本文研究结果显示，活血通脉注射液可使冠心病大鼠主动脉内膜面积和内膜增殖指数明显减少，内膜增生减轻。N0与ET－1具有相互拮抗的作用，是两种重要的内皮源性血管活性因子。NO－1起血管扩张的作用，而ET－1作用则相反［10，11］。本文研究结果显示，活血通脉注射液可明显升高冠心病大鼠血清N0水平，降低血浆ET水平。上述研究表明，中药活血通脉注射液具有防治介入术后再狭窄的作用，这可能与其调控平滑肌细胞增殖、升高血清N0水平、降低血浆ET水平有关。

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