高效液相色谱法测定妇炎康滴丸中盐酸小檗碱的含量

李桂峰，高红梅，吴 萍，李明伟

(吉林修正药业新药开发有限公司，吉林 长春 130012)

妇炎康滴丸系由赤芍、土茯苓、三棱(醋炙)、黄柏、延胡索、苦参等13味药材组成，具有活血化瘀，软坚散结，清热解毒，消炎止痛的功效。适用于慢性附件炎、盆腔炎、阴道炎、膀胱炎、慢性阑尾炎、尿路感染。为有效地控制本品质量，我们建立了方中主要药物黄柏中的有效成分盐酸小檗碱的含量测定方法，为该品种的质量标准提供了实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪agilent 1200(美国安捷伦公司)；Agilent chem.station色谱工作站；UV-2401紫外分光光度计；AB204-E型分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)

1.2 材料 妇炎康滴丸由吉林修正药业新药开发有限公司提供(样品批号为040801、040802、040803)；盐酸小檗碱对照品(供含量测定用)(批号：110713-200208、购于中国药品生物制品检定所)；所用试剂甲醇、乙腈为色谱纯，其余均为分析纯(北京化工厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液(28∶72)；检测波长:354 nm。流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中,加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液约40 mL，超声处理(功率250 W、频率40 kHz)30 min，放冷，加盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，加在碱性氧化铝柱(200～300目，4 g，内径1.2 cm)上，以甲醇150 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 以相同工艺制备不含黄柏的样品，按照供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。

2.5 线性关系考察 称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含17 μg的溶液。分别精密吸取上述对照品液4、6、8、10、12、14、16 μL分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归，回归方程为：Y=13 705X+1 804.5，相关系数r=0.999 6。结果表明，盐酸小檗碱在进样量为68～270 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 稳定性试验 取同一分供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h依法测定，以盐酸小檗碱的峰面积计算相对标准偏差，RSD为0.76%。结果供试品溶液稳定性较好。

2.7 精密度试验 取同一批供试品，在同一实验室，通过不同时间、不同分析人员、不同型号的高效液相色谱仪，按照含量测定项下方法测定本品中盐酸小檗碱含量=0.85 mg/g，RSD为1.26%。结果表明，本品含量测定方法中间精密度良好。

2.9 回收率试验 采用加样回收法。精密称取已知含量供试品(盐酸小檗碱含量0.896 0 mg/g)约0.25 g,6分，精密称定，分别置50 mL量瓶中，加入浓度为17.2 μg/mL的对照品溶液13 mL,按照含量测定方法操作，分别测定盐酸小檗碱的含量，计算回收率。结果样品平均回收率为99.27%，RSD为1.66%，方法准确，可行。

2.10 样品含量测定 分别称取3批样品适量,按2.3项下方法操作并测定，含量测定结果分别为33.58、33.82、33.62 μg/丸。

3 讨论

3.1 在研究妇炎康滴丸质量标准时，由于处方中君药赤芍的含量测定有干扰，选择处方中黄柏中有效成分小檗碱为含量测定指标，以盐酸小檗碱计，采用高效液相色谱法测定，具有灵敏、分析准确、重现性好的特点，能较好的控制该制剂的质量。

3.2 实验曾经对乙腈、0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液 的比例及磷酸二氢钾溶液的浓度进行了对比研究，选定乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液 (28∶72)为最佳流动相配比；检测波长为354 nm，柱温:40 ℃，流速:1.0 mL/min，进样量:10 μL。在此色谱条件下，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰，与其他组分能达到较好分离。为了使盐酸小檗碱色谱峰达到基线分离，定量分析更准确，在系统适用性试验中规定理论塔板数不得低于2 000。

[1]肖培根.新编中药志[J].北京：化学工业出版社，2000.

[2]中华人民共和国药典委员会.中国药典[M].北京：化学工业出版社，2010.

[3]苗明三.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000.