高效液相色谱法测定头孢克肟干混悬剂的含量

周素敏，王巧玲

(华北制药股份公司制剂分厂生产一部，河北 石家庄 050014)

头孢克肟干混悬剂适用于对头孢克肟敏感的链球菌、肺炎球菌、淋球菌等引起的感染性疾病，用于治疗支气管炎、肾盂肾炎、胆囊炎、猩红热、中耳炎、副鼻窦炎，尚无现行的国家药品标准。为更好控制产品质量，进一步完善制剂质量标准，笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定了其含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1100型安捷伦高效液相色谱仪，G1314A型紫外检测器，77251I型进样器;AE－104N型电子天平。头孢克肟对照品(中国药品生物制品检定所，批号为130503－200502);乙腈(色谱纯)，水(蒸馏水)，其他试剂(分析纯);头孢克肟干混悬剂(市售品)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS － SP C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相为氢氧化四丁胺(取10%氢氧化四丁胺溶液25 mL，用水稀释至 1 000 mL，用磷酸调节 pH为 7．0)－乙腈(3∶1)，柱温:40℃;流速:1．2 mL/min;检测波长:254 nm。理论板数按头孢克肟峰计算应不低于3 000。

2．2 溶液制备

精密称取头孢克肟对照品，加磷酸盐缓冲液(pH=7．0)制成每1 mL含头孢克肟0．2 mg的对照品溶液。取供试品10袋，精密称定，研细，精密称取4．4 g，置100 mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH=7．0)60 mL超声处理30 min，取出，放冷至室温，加磷酸盐缓冲液(pH=7．0)稀释至刻度，摇匀后滤过，即得供试品溶液。

2．3 方法学考察

阴性干扰试验:按处方比例制备不含头孢克肟的空白样品，照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液，依法进样。结果见图1，表明阴性对照品溶液对测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取头孢克肟对照品0．118 2 g，置100 mL量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH=7．0)溶解并稀释至刻度，精密量取 0．9，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，置 50 mL 量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH=7．0，至刻度，摇匀，各取 20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以头孢克肟进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=1 433．41X－11．82，r=0．999 2(n=6)。结果表明，头孢克肟进样量在0．4～2．4 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样5次。结果峰面积的RSD为0．04%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为2009091001)溶液，于配制后 0．2，2，4，6，8 h 时分别依法测定。结果峰面积的RSD为0．65%(n=6)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:取同一供试品(批号为2009091002)溶液，依法制备5份供试品溶液并测定。结果含量的RSD为0．45%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量(4．503 mg/g)的样品约0．26 g，精密称定。分别精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

分别取10批样品，照供试品溶液制备方法制备溶液20 μL，放入色谱仪;记录色谱图，以外标法计算样品中的头孢克肟含量，结 果 批 号 分 别 为 091001，091002，091003，091004，091005，091006，091007，091008，091009，091010 的样品中的含量分别为44．8，44．6，43．9，43．6，44．2，44．2，43．8，43．9，44．5，44．4 mg/g。

3 讨论

本试验采用2010年版《中国药典(二部)》[1]中头孢克肟含量测定法，用色谱条件进行比较，其中流动相为四丁基氢氧化铵溶液(10%四丁基氢氧化铵溶液25 mL，加水1 000 mL，摇匀用1．5 mol/L磷酸调节 pH 至 3．0)－乙腈(72∶28)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为1．0 mL/min。结果采用文中所用流动相的比例、色谱柱、流速，主峰峰形良好，分离效果最佳。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:184．