不同来源藤梨根中总黄酮含量的比较

宣新中 ，蔡中齐 ，姚 晓

(1．浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 135100;2．南京中医药大学药学院，江苏 南京 210000)

藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属植物中华猕猴桃Actinidia chinensisPlanch或软枣猕猴桃Actinidia argutaPlanch的干燥根。猕猴桃属全球约54种，分布于马来西亚至西伯利亚东部的广阔地带，我国是主产区。近年发现该属植物均具有抗癌、降血脂等活性，预示有广阔的开发前景[1]。陕西省广泛栽培，栽植面积占全国一半以上。全株含猕猴桃碱，根含熊果酸、齐墩果酸、琥珀酸、胡萝卜苷以及精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸等多种成分元素。现代药理研究表明，藤梨根具有抗肿瘤、调节免疫等作用，可用于治疗消化系统癌症、黄疸、消化不良、呕吐、腹泻等症[2－5]。笔者在药材市场的调查发现，藤梨根中普遍存在着大量地上茎，栽培品及野生品均存在于市场中，质量良莠不齐，为此进行了本研究。

1 材料、仪器与试药

藤梨根药材采自中国浙江衢州，经南京中医药大学生药鉴定教研室陈建伟教授鉴定，1号样品(批号为11051)和2号样品(批号为110530)为猕猴桃科植物中华猕猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥根，1号系栽培品，2号为野生品;3号样品(批号为110614)为猕猴桃科植物中华猕猴桃Actinidia chinensisPlanch的干燥地上茎。分别洗净，置60℃烘箱中干燥，并粉碎过60目筛，备用。Spectrum752型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);FA1004型电子分析天平(上海天平厂，精度0．1 mg);AS2060B型超声仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，标号为00809705);亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、甲醇均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 标准曲线制备[6]

精密称取无水芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含 0．268 mg 的溶液，吸取该溶液 0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分别置25 mL容量瓶中，精密加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，静置6 min加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min加4．3%氢氧化钠溶液10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，按紫外－可见分光光度法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅤA]，在500 nm波长处测定吸光度。以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=12．648X－ 0．007 6，r2=0．998 7。

2．2 供试品溶液制备

精密称取1 g上述样品粉末，精密称定，分别置于索氏提取器中，加100 mL甲醇，加热回流至提取液无色，提取液转移至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2．3 总黄酮含量测定

精确吸取各样品溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，静置6 min;加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置 6 min;加4．3%氢氧化钠溶液10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置15 min，在波长500 nm处测定吸光度，根据标准曲线计算样品中总黄酮含量。

2．4 方法学考察

稳定性试验:取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按2．3项下方法，分别在 0，5，10，15，20，25 min 不同时间点进行检测。结果的RSD为2．34%，表明供试品溶液在25 min内稳定。

重复性试验:用甲醇索氏提取法平行制备6份供试品溶液，按 2．3项下方法，分别测定其吸光度。结果的RSD为2．28%，表明方法重复性好。

精密度试验:取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按2．3项下方法，测定其吸光度，连续测定6次。结果的RSD为0．62%。

加样回收试验:称取1号样品粉末约0．05 g，共6份，精密称定质量，置于索氏提取器中，分别精密加入质量浓度为0．268 g/L的芦丁对照品甲醇液 8．0，8．0，13．0，13．0，18．0，18．0 mL，加甲醇至50 mL，加热回流至提取液无色，提取液转移至50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精确吸取各样品溶液5．0 mL，分别置25 mL容量瓶中，照2．1项下标准曲线的制备方法，自“加水至6 mL”起测定吸光度，根据标准曲线计算芦丁的含量，结果见表2。

2．5 样品含量测定结果

按2．3项下方法测定供试品总黄酮含量(以芦丁计)，结果表明，栽培藤梨根中总黄酮的含量比野生藤梨根中总黄酮的含量高，根中的总黄酮含量远高于地上茎中的总黄酮含量，见表3。

表2 加样回收试验结果(n=6)

表3 藤梨根总黄酮测定结果(n=3)

3 讨论

曹书芬等[7]及黄燕等[8]用TUNEL法检测中华猕猴桃根正丁醇提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应，中华猕猴桃根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca－109细胞生长。草药藤梨根治疗癌症的情况调查表明:藤梨根主要用于食管癌[9]。国宏莉等[10]在动物试验中证明藤梨根能有效诱导鼠胃癌细胞的凋亡，与对照组细胞的凋亡率和死亡率有显著的差异。预示藤梨根在治疗胃癌方面具有广阔的开发前景，但是，藤梨根抗癌的物质基础尚未明确。现对藤梨根的化学成分进行初步研究，发现藤梨根中含有总黄酮，并对几种藤梨根中总黄酮的含量进行分析、比较研究，结果发现，藤梨根中总黄酮的含量栽培品高于野生品，根高于地上茎，预示藤梨根的根及地上茎不可同等入药，市场应加强对藤梨根的质量控制。总黄酮可能是藤梨根抗癌的主要物质基础之一，但对藤梨根总黄酮的最佳提取工艺及其抗癌药理作用有待进一步研究，结合其药理作用对其化学成分进一步研究，从藤梨根中分析筛选其抗癌的有效部位或活性成分，为临床新药开发奠定基础。建议加强植化方面的研究，确立藤梨根的特征性成分或指标性成分，建立藤梨根的质量标准。

[1]梁畴芬．中国植物志(49－2分册)[M]．北京:北京出版社，1984:108．

[2]南京药学院《中草药学》编写组．中草药学(中册)[M]．南京:江苏人民出版社，1976:662－623．

[3]陈贯诚 ．猕猴桃[J]．中药材科技，1981，4(1):30－31．

[4]陈德轩，潘立群．抗肿瘤植物药藤梨根[J]．中药材，2004，27(2):86－87．

[5]国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草(第三册)[M]．第9卷．上海:上海科学技术出版社，1999:169．

[6]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:30．

[7]曹书芬，国宏莉，张 丽，等．藤梨根乙酸乙酯提取物对人食管癌细胞生长的抑制作用[J]．山西医科大学学报，2007，38(5):413－417．

[8]黄 燕，郭淑玉，周力音，等．中华猕猴桃根注射液治疗小儿反复呼吸道感染的研究[J]．中国实验临床免疫学杂志，1993，5(2):40－42．

[9]杭州肿瘤医院．草药藤梨根治疗癌症的情况调查[J]．中草药通讯，1970，1(1):18 －20．

[10]国宏莉，姚俊霞，张 丽，等．藤梨根正丁醇提取物在人食管癌细胞生长中的作用[J]．中药材，2008，31(7):1 030 －1 032．