散结化瘀胶囊提取工艺研究

2012-04-08张小莉廉援朝

中国药业 2012年18期

张小莉，葛莉，廉援朝

(1.陕西省咸阳市药品检验所，陕西咸阳 712000；2.陕西中医学院2010级研究生，陕西咸阳 712046；

3.长庆兴隆园医院，陕西西安 710002)

1 仪器与试药

散结化瘀胶囊(陕西省中医药研究院研制，批号为20110301)由丹参、红曲、赤芍、丹皮、炙黄芪、法半夏、瓜蒌皮、水蛭粉、葛根、银杏叶、三七粉、黄连、薤白13味药组方，用于胸痹心痛病的预防和治疗。为了研究其水提工艺的最佳条件，参照文献[1－3]，笔者采用正交试验法，以丹酚酸B为考察指标，对水提工艺条件进行优选，为进一步的新药研究奠定基础。

高效液相色谱仪(Waters966型恒流泵；Waters966二极管阵列检测器，活德国际贸易＜上海＞有限公司；Millennium 32色谱工作站)；Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；H66025T型超声波清洗机；TGL－16G型离心机(上海安亭科学仪器厂)；HCTP11B10型托盘药物天平(北京市宣武区天平厂)；四孔水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)。丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110722－200309)；液相用试剂为色谱纯(美国Fisher scintific)、水为超纯水；其他试剂均为分析纯。丹参、炙黄芪、法半夏、瓜蒌皮、葛根、银杏叶、薤白等中药均购自陕西省药材公司，经陕西省中医药研究院副主任药师王卫锋鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 工艺设计

采取加热回流提取法，提取时选择了加水量(因素A)、提取时间(因素B)及提取次数(因素C)3个因素，每个因素选取3个水平设计了正交试验方案，按L9(34)正交表安排试验，平行操作，以丹酚酸B的含量和出膏量作为考察指标对工艺进行优选。试验因素水平见表1。

表1 提取试验水平因素

2.2 溶液制备

按处方比例量称取水提工艺部分的药材，共9份，按正交试验表下设计的试验条件以加热回流方式进行提取，合并提取液。将上述提取液浓缩，定容至一定体积，制得样品溶液。

2.3 收膏率测定

取各正交试验号滤液50mL，于干燥蒸发皿中水浴蒸干，80℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，称重，计算。

2.4 丹酚酸B含量测定

色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－乙腈－甲酸－水(30∶10∶1∶59)为流动相；检测波长为286 nm。

溶液制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.45mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。分别精密吸取各提取液5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得供试品溶液。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.5 正交试验

结果见表2。

将表2的正交试验结果进行方差分析，结果见表3。

试验结果表明，煎煮次数对丹酚酸B的提取量影响较大。由正交试验及方差分析结果得知，最佳工艺为A2B3C3。即加12倍量水煎煮提取3次，每次1.5 h。

2.6 验证试验

按1.5倍处方量称取各药材，共3份，按照所选提取条件试验，分别精密吸取药液5mL，按拟订方法测定含量；再分别量取各溶液50mL，按照正交试验出膏量测定方法测定出膏率。含量测定及出膏量结果见表4。3次验证试验折算成处方量结果后，检测指标接近或高于正交表中最优值，说明优选的提取条件基本可行。

表2 水提工艺 L9(34)正交试验表

表3 丹酚酸B含量(Ⅰ)和出膏量(Ⅱ)方差分析表

3 讨论

通过本研究设计的提取工艺，优化了散结化瘀胶囊水煎提取工艺，其最佳提取工艺为：加12倍量水煮3次，每次1.5 h。根据本试验优选的最佳工艺，经验证性试验表明，此法稳定，质量可控。在丹酚酸B含量测定过程中，考虑到本品是由多种药味组方的复方制剂，有很多干扰成分，经多次摸索，选择甲醇－乙腈－甲酸－水(30∶10∶1∶59)为流动相，目标成分达到了很好的分离效果。