中成药中非法添加吲哚美辛检测方法的研究

2012-04-07杨景柳

河北医科大学学报 2012年9期

关键词：美辛吲哚中成药

杨景柳

（北京市房山区中医医院药剂科，北京 102400）

·论著·

中成药中非法添加吲哚美辛检测方法的研究

杨景柳

（北京市房山区中医医院药剂科，北京 102400）

目的探讨并建立中成药中非法添加吲哚美辛的检测方法。方法采用化学反应鉴别方法及薄层色谱法，对抗风湿类中成药中非法添加的吲哚美辛进行快速检测，并采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法进一步验证。结果化学反应鉴别及薄层色谱法检测抗风湿类中成药中非法添加的吲哚美辛重复性好，专属性强，HPLC法吲哚美辛对照品线性范围79.5～715.5mg/L（r=0.999 8），平均回收率为99. 27%，相对标准差为1.08%（n=6）。结论采用化学反应鉴别方法及薄层色谱法对中成药中非法添加的吲哚美辛进行检测，操作简单、方便，且专属性强，灵敏度高，可作为中成药中非法添加吲哚美辛的初步检测。

中成药；吲哚美辛；色谱法，薄层

处理时间长，有诸多不便，因此，中成药便成了人们的首选［1］。为了提高中成药的治疗效果，部分中成药制剂中添加了化学药品，严重威害了人们的用药安全。吲哚美辛具有止痛和消炎的特性，但易导致消化性溃疡、出血、穿孔、高钾血症、高钠血症、高血压等不良反应，严重者可导致死亡［2］。研究人员从市场中抽检的中成药样品中含有吲哚美辛。本研究采用化学鉴别方法及薄层色谱法，对模拟添加了吲哚美辛的抗风湿类中成药进行检测，并以高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法进一步验证，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器和试药：高效液相色谱仪（Agilent 1200型），紫外检测器（G1314BVWD），Agilent LC系统化学工作站；高效液相色谱仪（Waters 1525型），紫外检测器（Waters 2487），Breeze3.0化学工作站；电子天平（德国BP211DSartorius）和FAl004电子天平均为万分之一；SK250LHC型超声波清洗器；929型薄层铺板仪，20%氢氧化钠溶液，0.03%重铬酸钾溶液，0.1%亚硝酸溶液［3］；色谱纯，乙腈，甲醇；分析纯。

1.2 试验用样品：风湿定胶囊，小活络丸及舒筋活血片，将一次服用量加入约1/10的2.5mg吲哚美辛研细作为自制阳性样品。市场抽得的风湿定胶囊、腰息痛胶囊、风痛安胶囊、风湿关节炎片、小活络丸、骨龙胶囊及舒筋活血片作为试验用阴性样品。

1.3 化学鉴定方法

1.3.1 试验方法：胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂供试品者，取1次最大服用量研细，然后加10mL氯仿进行超声处理5min，静置约10min，然后过滤，蒸干滤液；口服液供试品者，取10mL置分液漏斗中，加入40mL氯仿分2次萃取，分取氯仿液蒸干。取上述残渣加水10mL，并加入2滴氢氧化钠溶液即制得供试液［4］；取3mL制得的供试液，加0.3mL重铬酸钾溶液，加热至溶液沸腾，放冷后加3滴硫酸，置水溶上加热，若溶液显示为紫色，则判定其中有可能含有吲哚美辛［5］。另取3mL供试液，加0.3mL亚硝酸钠溶液，同法加热至溶液沸腾并放冷，然后加入0.5mL盐酸，溶液即刻变成绿色，放置约3min后，渐变成黄色，则判定其中有可能含有吲哚美辛。对于可疑吲朵美辛阳性的应采用薄层色谱法和HPLC法进行测定。

1.3.2 方法验证

1.3.2.1 样本的干扰试验：取阴性样品按照上述试验方法进行试验后，结果均呈阴性，即判断样品中不含有吲朵美辛。取自制阳性样品按照上述试验方法中的方法进行试验后，结果均呈阳性，即判断样品中可能含有吲朵美辛。

1.3.2.2 方法的专属试验：取1/3服用量的萘普生、保泰构、吲哚美辛、布洛芬及美洛昔康的对照品，按上述方法进行试验［6］。

1.3.3 薄层色谱法

1.3.3.1 供试品溶液的制备：取一次服用量的样品研细，置入50mL锥形瓶中（有瓶塞），将10mL丙酮与乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），匀，10min后滤过，取3mL滤液浓缩至1mL，即制得供试品溶液。

1.3.3.2 对照品溶液的制备：精密称取适量吲朵美辛对照品，加入10mL丙酮与乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），制成每1mL混合溶液中含1mg吲哚美辛的溶液即对照品溶液［7］。

1.3.3.3 阳性对照溶液的制备：取一次服用量自制阳性样品加约 10mg对照品适量，研细，加入10mL丙酮与乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），匀，10min后滤过，取3mL滤液浓缩至1mL，即制得阳性对照溶液。

1.3.3.4 阴性对照溶液的制备：取一次服用量的阴性样品研细，加入10mL丙酮与乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），匀，10min后滤过，取滤液即制备阴性对照溶液。

1.3.4 高效液相色谱法

1.3.4.1 色谱条件：Kromasil C18柱为色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈（57）/冰醋酸溶液（43）为流动相，检测波长为257nm；流速为1.0mL/min，柱温为25℃；理论板数6 901；T 0.985。

1.3.4.2 供液品溶液的制备：取一次服用量的片剂或丸剂供试品研细，加入15mL甲醇超声提取，10min后滤过，取滤液置于25mL量瓶中，加适量流动量稀释至刻度，混匀，即制备供试品溶液。取一次服用量胶囊内容物研细，以同法制得。

1.3.4.3 对照品溶液的制备：精密称取适量吲朵美辛对照品，加甲醇超声溶解，制备300mg/L对照品贮备液，取3mL置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，混匀。

1.3.4.4 线性关系考察：取1、3、5、7、9mL吲哚美辛对照品贮备液（0.795ng/L），置于10mL量瓶中，加入流动量稀释至刻度，混匀，分别取10μL注入高液液相色谱仪，以浓度和峰面积分别作为横坐标和纵坐标，得出标准曲线回归方程。

1.3.4.5 精密度试验：取对照品溶液进样6次，并测定峰面积。

1.3.4.6 重复性试验：取自制阳性品6份，制得供试品溶液，分别测定峰面积。

1.3.4.7 稳定性试验：取自制阳性样品6份，制得供试品溶液，在0、0.5、1、3、5、24min时分别进样，测定峰面积。

1.3.4.8 空白试验：取阴性样品制得供试品溶液，按要求注入液相色谱仪。

1.3.4.9 回收率试验：精密称取适量阴性样品，加入约10mg吲朵美辛对照品，制备供试品溶液，测定其含量，计算回收率。

2 结果

2.1 方法验证结果：吲朵美辛呈阳性，其他均呈阴性，即本试验方法检测吲朵美辛专属性强。

2.2 薄层色谱法结果：经阴性对照试验及20批样品试验观察［8］，确认本法可行。

2.3 高效液相色谱法结果：Y=2.750 876×10X+ 4.850 003×10，r=0.999 8，吲朵美辛对照品浓度在79.5～715.5mg/L时，线性关系良好。相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为0.20%，即本法精密度良好。RSD为0.51%，即本法重复性良好。RSD为0.36%，即本法稳定性良好。对照品溶液成分色谱峰的位置上未出现其他色谱峰，即在该色谱条件下，杂质无干扰。平均回收率为99.27%，RSD为1.08%（n=6）。

3 讨论

根据吲哚美辛在各种溶液中的溶解性情况，分别对氯仿、丙酮与乙醇及丙酮与乙醇的混合液作为提取剂进行考察。由于抗风湿类中成药成分较为复杂，干扰因素众多，而氯仿提取的样品相对其他提取剂而言，干扰相对较少，因此，本研究采用氯仿作为提取溶剂，以使提取出来的吲朵美辛干扰成分尽可能减少［9］，而且使提取过程变得更为简单，易于操作，适于在基层开展快速检测。本研究结果显示，超声在3min以上，匀在5min以上，即超声效果较好，由于吲朵美辛可以略溶于氯仿，本研究便将超声时间设置为5min，以使吲朵美辛提取更为完全。研究［10］表明，吲哚美辛的氢氧化钠与重铬酸钾溶液可与硫酸反应，呈紫色；与亚硝酸钠及盐酸溶液反应先呈绿色，可渐变至黄色。这也是本研究判断样品中是否含有吲朵美辛的理论依据。

在本研究中取吲哚美辛对照品加适量甲醇超声溶解，再加适量流动相制成浓度为13mg/L的溶液，并设相应的空白对照溶液进行分光光度测定时，在200～400nm范围内扫描得到的紫外线吸收图谱显示吲哚美辛在波长为257nm时有最大吸收，故选择257nm为分析波长。

综上所述，采有化学反应鉴别方法及薄层色谱法和HPLC法可对抗风温类中成药中的吲哚美辛成分进行初步筛查，操作简单，稳性性好，专属性强，但是若要明确结论，还需要对可疑组分提取纯化并进行鉴定［11］。

［1］徐军辉，李存金，王仕平，等.中成药中非法添加化学药品吲哚美辛检测方法的研究［J］.中国药品标准，2010，11（6）：416-420.

［2］徐军辉，李存金，王仕平，等.中成药中非法添加吲哚美辛检测方法的研究［J］.中国药事，2010，24（9）：894-897.

［3］李文霞，朱妙飞，陈勇，等.DAD光谱库在中成药非法添加化学成分检测中的应用［J］.中国药师，2011，14（3）：321-324.

［4］吕长淮.吲哚美辛片有关物质检查方法改进［J］.中国药房，2007，18（28）：2216-2217.

［5］姚羽，李慧义，张启明，等.检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究［J］.中国药学杂志，2007，42（3）：224-227.

［6］刘吉金，杨敏，李军，等.HPLC同时检测保健品及中成药中非法添加9种抗高血压化学药物的研究［J］.中国现代应用药学，2008，25（S2）：717-719.

［7］周艳，胡琳，张宏祥，等.检查天麻胶囊中添加吲哚美辛的方法研究［J］.中国药事，2006，20（10）：612-613.

［8］国家药典委员会.《中国药典》2010年版二部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：254.

［9］刘浩，刘春晓，张彦会，等.高效液相色谱法测定头孢菌素类注射剂中精氨酸的含量［J］.河北医科大学学报，2009，30（7）：714-716.

［10］张晓璐，戴夕娣，丁建.高效液相色谱法测定复方吲哚美辛乳膏中吲哚美辛的含量［J］.药物分析杂志，2007，27（8）：1269.