降糖类中成药中疑似非法添加格列本脲的快速筛查

徐 玫，袁 琦，罗甲宇，王璟奕，李 栋

（1.河南大学药学院 药物分析教研室；河南 开封 475004；2.河南医药高级技工学校，河南 开封 475001；3.河南大学 教育科学学院，河南 开封 475004）

降糖类中成药中疑似非法添加格列本脲的快速筛查

徐 玫1，袁 琦1，罗甲宇2，王璟奕3，李 栋1

（1.河南大学药学院 药物分析教研室；河南 开封 475004；2.河南医药高级技工学校，河南 开封 475001；3.河南大学 教育科学学院，河南 开封 475004）

目的建立快速筛查降糖中成药中非法添加西药格列本脲的方法。方法首先采用紫外扫描图谱初步判断中成药中是否非法添加格列本脲，然后利用磺酰脲类降糖药试管反应法、薄层色谱法进一步验证。结果在该中成药的紫外图谱中发现格列本脲的特征吸收，试管反应法中该中成药反应呈阳性，薄层色谱法中供试品和对照品的比移值相同。结论所建立的中成药中非法添加西药格列本脲快速筛查的方法简单可行。

降糖类中成药；格列本脲；紫外分光光度法；试管反应法；薄层色谱法

糖尿病是目前世界上发病率较高的一种疾病，严重影响了人们的身体健康。国内口服降糖药市场的特点是以西药为主，中成药为辅［1］。少数不法分子利用患者对中草药的信赖，在中药降糖制品及部分保健食品中非法添加处方以外的化学药品，骗取患者的信任，从而牟取暴利［2］。

格列本脲为第二代磺酰脲类降糖药品，价格低廉，见效快速，成为许多中药降糖制剂和保健食品中非法掺入的主要化学药品之一，容易使患者在不知情中服用过量，危害患者的身心健康［3－4］。

目前多采用较昂贵的仪器HPLC和LC／MS进行中药降糖制剂非法添加格列本脲的定性鉴别［5－6］。我们则是采用相对简单的薄层色谱法（TLC）和紫外分光光度法（UV），并以市售格列本脲片为对照进行快速筛查，以此达到对降糖中成药中是否非法添加西药格列本脲进行确定。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV1600紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；三用紫外灯（型号：CN61M／MHMQZWI，北京中西远大科技有限公司）；AS3120超声仪（奥特赛恩斯仪器有限公司）；BP211D电子天平（Sartorius公司生产）；7G328B分析天平（湘仪天平仪器厂）。

1.2 试剂

硫酸铜试液；0.01mol／L氢氧化钠溶液；浓氨水；浓盐酸；三氯甲烷（分析纯，批号：20020617，天津市津沽工商实业公司）；环己烷（分析纯，批号：20080624，天津市化学试剂一厂）；无水乙醇（分析纯，批号：20090827，开封市芳晶化学试剂有限公司）；冰醋酸（分析纯，批号：20050309，开封化学试剂总厂）；硅胶（HG／T2354－92，青岛海洋化工有限公司）。

1.3 对照品与供试品

格列本脲对照药片（批号：090202，天津太平洋制药有限公司）；供试品降糖胶囊由本市药店购买。

2 方法与结果

2.1 紫外扫描

2.1.1 方法 取待测胶囊3粒，倾出其内容物于烧杯中，研细，加三氯甲烷20mL，超声10min，滤过，滤渣及滤器用三氯甲烷分次洗涤，合并洗液与滤液，于水浴75℃至干，用无水乙醇溶解并稀释至50mL，在200～400nm波长范围内扫描。

2.1.2 结果 在格列本脲最大吸收波长处（300nm）有明显吸收，怀疑该胶囊中非法添加了格列本脲，见图1。

图1 样品胶囊光谱扫描曲线

2.2 试管反应法［7］

2.2.1 方法 取待测样品适量，相当于1次口服量，作为供试品，研细，放入具塞锥形瓶中，加入20mL三氯甲烷，超声10min，过滤，收集滤液作为供试液A；将供试液A水浴75℃ 蒸干，得残渣，加入NaOH（0.01mol／L）溶液3mL，使残渣充分溶解，然后使用微孔滤膜过滤，得供试液B，用试管收集供试液B；向供试液B中滴入5滴CuSO4，震荡试液，使溶液充分反应，得供试液C；向供试液C中滴入10滴浓氨水，震荡试管使充分反应，至溶液呈现深蓝色，作为供试液D；收集供试液D并用微孔滤膜过滤，得供试液E，用试管收集供试液E；向供试液E中滴入约10滴浓盐酸，使深蓝色消失。

2.2.2 结果 经以上6步反应，试管中出现沉淀，结果呈阳性，可判断供试品中添加了磺酰脲类化学成分，但具体成分需作进一步判断。

2.3 薄层色谱法［8］

2.3.1 供试品溶液的制备 取待测胶囊3粒，倾出其内容物于烧杯中，研细，加三氯甲烷20mL，超声10min，滤过，滤渣及滤器用三氯甲烷分次洗涤，合并洗液与滤液，于水浴75℃浓缩至干，用三氯甲烷1mL溶解并定容为1mL，既得。

2.3.2 对照品溶液的制备 取格列本脲对照药片20片于研钵中，研细，加三氯甲烷20mL，用三氯甲烷分次洗涤，合并洗液于滤液，于水浴75℃ 浓缩至干，用三氯甲烷1mL溶解并定容为1mL，既得。

2.3.3 方法 取上述供试品和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿－环己烷－乙醇－冰醋酸（8∶12∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，结果见图2。

图2 样品及对照品TLC图

2.4 确证实验

用小刀分别刮下图2薄层板上的样品及对照斑点，分别用少量乙醇溶解，过滤，在250～350nm波长区域扫描其吸收，样品及对照品吸收一致。

3 讨论

在紫外扫描图谱中，由于供试品的浓度无法精密确定，一开始在格列本脲特征峰处的吸光度值和对照的吸光度数值有明显差别，通过改变供试品的用量，吸光度差别逐渐缩小。本实验虽为定性实验，观察紫外图谱的峰形即可，但吸光度数值如差别太大也将不利于判断，故通过实验最终确定供试品的用量为3粒。

中成药及保健食品的成分是由中药中所含的天然化合物组成，成分复杂。如何能够有效地提取出磺酰脲类化学降糖药，同时又能尽量少地提取出中成药或保健食品中复杂的天然成分，使提取过程同时成为粗分的过程，TLC法的灵敏度和专属性非常重要。降糖类中成药及保健食品中主要含有糖类、氨基酸类、皂苷类、黄酮类及挥发油等化学成分，这些成分大多极性较强，较难溶于弱极性有机溶剂，而磺酰脲类化学降糖药易溶于三氯甲烷，故以三氯甲烷为提取溶剂。

中成药成分复杂，薄层色谱分析仅通过分离、显色，与对照品比较比移值（Rf）及斑点所显的颜色来确证该中成药中是否含有某一化学成分，很有可能出现假阳性，故通常只作为一种初筛的方法。本实验中试管反应法检测结果呈阳性，即确定供试品中添加有磺酰脲类降糖药，可排除TLC法中出现假阳性，不再做阴性对照实验。试管反应法操作步骤简单、成本低廉、消耗低、反应迅速，与TLC法中配制阴性对照品相比，省时省力，故可作为TLC法的补充。

由于只是快速筛查，利用正规厂家（天津太平洋制药有限公司）生产的格列本脲片作为对照品，完全可行。

中药降糖制剂和保健食品的种类较多，市场竞争激烈。少数不法分子为了增强产品的降血糖作用，不顾产品的安全性，故意在产品中添加化学降糖药品。本实验结果显示，部分中药降糖制剂和保健食品中被非法掺入了化学药品格列本脲，提示有关部门今后应进一步加强对中药降糖制剂和保健食品的质量监管。

［1］侯胜田.药品营销调研－应用与案例［M］.北京：化学工业出版社，2005：348－351.

［2］宋家玉，周景样，丰硕，等.薄层色谱法检测降糖中药制品中的格列本脲［J］.中国卫生检验杂志，2006，16（11）：1339－1340.

［3］许志泉.中药掺用西药之危害及对策［J］.山东中医杂志，1994，13（3）：142.

［4］丁秀芬，赵文杰.糖尿病知识教育对糖尿病治疗的影响［J］.现代医学，2004，24（1）：12.

［5］夏顺宁，王贞媛，李丹.HPLC－MS法鉴别唐乐舒胶囊中非法添加的格列本脲、格列齐特、格列美脲成分［J］.江苏药学与临床研究，2006，14（6）：263－265.

［6］李冰，王本杰，黄萍，等.中药降糖制剂中西药成分盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列齐特和格列本脲的鉴别［J］.山东大学学报：医学版，2006，44（8）：843－845.

［7］潘广州，高国敬，傅伟.两种快速检测降糖类中成药中添加磺酰脲类药物方法的比较［J］.中国药业，2010，19（4）：28－29.

［8］施亚琴，姚静，张启明，等.薄层色谱法快速筛查降血糖中成药及保健食品中添加磺酰脲类化学降糖药［J］.药物分析杂志，2007，27（1）：36－39.

［责任编辑 时 红］

Rapid screening for a hypoglycemic medicine suspected added in glyburide illegally

XU Mei 1，YUAN Qi 1，LUO Jia－yu2，WANG Jing－yi 3，LI Dong1（1.Pharmaceutical Analysis Teaching and Researching Section，Pharmaceutical College of Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China；2.Henan Medical Secondary School，Kaifeng，Henan 475001，China；3.College of Education Science，Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China）

ObjectiveTo establish the rapid screening method for hypoglycemic medicine illegally added in western medicine hypoglycemic drug glibenclamide.MethodsFirst UV spectrophotometry was used to isolate and identify the glibenclamide in the hypoglycemic Chinese patent drugs，then the tube reaction assay of sulfonylurea hypoglycemic drugs.TLC were used to further verification.ResultsThe feature mapping of glibenclamide was found in the UV mapping of the hypoglycemic Chinese patent drugs，the result of tube reaction assay was positive，the Rf of the reference substances and sample were the same.ConclusionThe fast screening method for proprietary Chinese medicine Western medicine hypoglycemic drugs added illegally glyburide is simple and feasible.

Hypoglycemic Chinese patentdrugs；Glibenclamide；UV spectrophotometry；Tube reaction assay；Thin layer chromatography

R917

A

1672－7606（2012）02－0095－03

2011－11－30

徐玫（1963－），女，河南 开封 人，副教授，从事药物质量控制的教学及研究工作。