RP-HPLC法测定通脉颗粒中葛根素的含量

2012-04-01李君海王婷婷

长春中医药大学学报 2012年1期

李君海，徐建，杨波，王婷婷

(吉林修正药业新药开发有限公司，吉林长春 130012)

通脉颗粒标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第20册(标准号：WS3-B-0824-91)，由川芎、葛根、丹参3味药材组成，具有活血通脉的功能，用于治疗缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛等缺血性心脑血管疾病。原标准中未有含量测定项，因此本文采用高效液相方法测定了通脉颗粒中葛根素的含量，方法简单、快速、重现性好，可以达到全面控制通脉颗粒质量的目的。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UItimate3000 紫外检测器(德国戴安)；安捷伦1200紫外检测器(美国安捷伦)；Meltter AE240双量程电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，AB204-E电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；色谱柱：依利特 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱。

1.2 试药甲醇为色谱纯，水为重蒸水，乙醇为分析纯。通脉颗粒(由修正药业集团股份有限公司提供)；葛根素对照品(批号：110752-200511规格：20mg 供含量测定用)从中国食品药品检定研究院购入。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：依利特C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-水(22∶78)，流速：1.0 mL/min，检测波长：254 nm，柱温：30 ℃。理论板数按葛根素峰计算应不低于4 000。葛根素峰与其他杂质峰分离度不小于1.5。

2.2 对照品溶液的制备取葛根素对照品约8.5 mg，精密称定为8.48 mg，置50 mL量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL含葛根素0.084 8 mg)。

2.3 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，称定重量，超声处理(功率150 W，频率40 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照样品的制备按处方称取除葛根外的各药，按其制备工艺制成空白制剂，再按“2.3”项下方法制成阴性对照样品溶液。

2.5 专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照样品溶液各5 μL，在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪。结果：葛根素与样品中其他组分分离较好(与相邻峰的分离度均>2.0)，阴性对照样品在与葛根素对照品相同保留时间处未见吸收峰出现，表明阴性对照无干扰。

2.6 线性关系范围精密吸取对照品溶液1、3、5、7、10、12、15、20 μL，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，以进样量为横坐标(X)进行线性回归。标准曲线方程为Y=6.06X+0.0157 (r=1)，结果表明：葛根素在0.084 8～1.69 6 μg范围内呈良好线性关系。

2.7 精密度试验取本品(批号:20100605)，由不同人员、不同时间，使用不同高效液相色谱仪，按2.3项下方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件操作，测定葛根素的含量。结果：葛根素平均含量为6.71 mg/g，RSD%=0.4%，表明精密度良好。

2.8 稳定性试验精密吸取同一批供试品溶液(批号20100605)5 μL，分别于制备后0、4、8、12、18、24 h注入液相色谱仪中，测得葛根素峰面积。结果：葛根素峰面积平均值为48.479，RSD=0.17%，表明在24 h内样品的稳定性良好。

2.9 重复性试验取同一批样品(批号20100605)6分，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定葛根素含量。结果：葛根素平均含量为6.73 mg/g，RSD=0.28%，表明方法的重现性良好。

2.10 加样回收率试验精密称取已知含量同一批号的样品(批号20100605,葛根素含量6.73 mg/g)0.5g，共6分，分别精密加入葛根素对照品溶液(0.376 mg/mL)8 mL。按2.3项下方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件测定葛根素含量，计算回收率。结果供试品中葛根素的平均回收率为97.47%，RSD=1.00%，此方法准确可行。