RP-HPLC法测定人血清中舒芬太尼的浓度

2012-03-26谢瑞祥范芳张莲莲杨明华福建省肿瘤医院药理研究室福州35004福建省肿瘤医院麻醉科福州35004

中国药房 2012年6期

关键词：艾司内标精密度

谢瑞祥，范芳，张莲莲，杨明华（.福建省肿瘤医院药理研究室，福州35004；.福建省肿瘤医院麻醉科，福州 35004）

舒芬太尼（Sufentanil）是一种高选择性阿片类受体激动药，镇痛效能强、作用时间长，近年来广泛应用于临床麻醉[1]。笔者建立了一种反相高效液相色谱法测定人血清中舒芬太尼浓度的方法，具有简单、快速、专一性强、准确等优点。

1 仪器与试药

1.1 仪器

GOLD系统高效液相色谱仪，包括125型泵和168型DAD紫外检测器（美国Beckman公司）。

1.2 试药

舒芬太尼对照品（湖北宜昌人福医药公司，批号:D81201）；内标:艾司唑仑对照品（江苏济州制药有限公司，批号:101112）；乙腈为色谱纯，试验用水为双重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）及预柱；流动相:乙腈-0.02 mol·L－1醋酸铵-盐酸（pH4.3）（45∶55）；流速:1 mL·min－1；检测波长:230 nm；柱温:室温。在此色谱条件下，舒芬太尼、艾司唑仑峰位置无干扰且分离良好，峰形尖锐对称。高效液相色谱图见图1。

2.2 试验溶液的配制

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.2.1 舒芬太尼标准贮备液:准确称取舒芬太尼对照品10.00 mg，用双重蒸馏水溶解后定容至100 mL，即得100 μg·mL－1舒芬太尼标准贮备液。

2.2.2 内标溶液:准确称取艾司唑仑对照品10.00 mg，用10%甲醇溶解后定容至1 000 mL，即得10 μg·mL－1艾司唑仑标准溶液。

2.3 样品预处理

精密吸取500 μL血清样本，依次加入10 μg·mL－1艾司唑仑标准溶液40 μL、0.1 mol·L－1的NaOH 0.2 mL、乙酸乙酯-石油醚（4∶1）2 mL，涡旋混合2 min，4 000 r·min－1离心2 min，取上层有机相于60℃水浴用氮气吹干，流动相100 μL溶解，取40 μ L进样，记录色谱图。

2.4 线性关系考察

精密吸取100 μg·mL－1舒芬太尼标准贮备液0.4 mL，用血清定容至10 mL，即得到4.000 μg·mL－1的舒芬太尼标准血清，依倍率稀释法依次配制成 2.000、1.000、0.500、0.250、0.100、0.050、0.025 μg·mL－1的系列舒芬太尼标准血清，按“2.3”项下方法作样品预处理并接“2.1”项色谱条件操作，测得舒芬太尼峰面积与内标艾司唑仑峰面积的比值（Y）与舒芬太尼浓度值（X）的回归方程为:Y＝0.285 9X－0.000 2（r＝0.999 9）。结果表明，舒芬太尼血药浓度在0.025～4.000 μg·mL－1范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度及回收率试验结果

按“2.3”、“2.4”项下方法，在同日内测定5次和连续5 d每天测定1次浓度为0.100、0.500、2.000 μg·mL－1的血清样品并计算含量，得出日内、日间精密度和平均回收率，详见表1。

表1 精密度及回收率试验结果（±s， n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（s±s， n＝5）

已知浓度/μg·mL-1 2.000 0.500 0.100日内精密度测定值/μg·mL-1 2.060±0.082 0.510±0.018 0.113±0.006 RSD/%3.98 3.49 4.51平均回收率/%103.01 101.92 112.80日间精密度测定值/μg·mL-1 2.037±0.122 0.499±0.029 0.107±0.005 RSD/%5.99 5.87 4.67平均回收率/%101.82 99.82 107.04