HPLC法测定血脂康胶囊的有关物质

韦娟

HPLC法测定血脂康胶囊的有关物质

韦娟

目的 建立高效液相色谱法测定血脂康胶囊中有关物质的方法。方法 采用C18柱，以甲醇-水-磷酸(77∶23∶0.14)为流动相，检测波长为238 nm。结果 血脂康胶囊的主要活性成分洛伐他丁与降解产物分离良好，洛伐他丁浓度在1.958～293.7 mg/L范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，检测限为2μg/L。结论 该方法简便、快速、灵敏、准确，可用于测定血脂康胶囊的有关物质。

高效液相色谱法;血脂康胶囊;有关物质

血脂康胶囊由红曲加工制成，具有除湿祛痰、活血化瘀、健脾消食、降血脂的功效，其主要活性成分为洛伐他丁，中国药典［1］2010年版二部对洛伐他丁原料药及制剂均进行有关物质控制。为了更好地控制血脂康胶囊的质量，本文建立了高效液相色谱法测定血脂康胶囊中有关物质的检查方法，方法快速、准确、精密度好。

1 仪器与试药

岛津LC-20AB高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。甲醇、磷酸为色谱纯，洛伐他丁对照品(中检所，批号100600-201003)，血脂康样品(批号10/05/13，市售)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent C18柱，4.6 nm×250 nm，流动相:甲醇:水:磷酸(77∶23∶0.14)，检测波长:238 nm，柱温:25℃，流速:1.0 ml/min，进样量:10 μl，理论板数:按洛伐他丁计算不低于2500，洛伐他丁与相邻杂质峰的分离度大于1.5。

2.2 溶液的配制 洛伐他丁对照品溶液:取洛伐他丁对照品约20 mg置50 ml的容量瓶中，加乙腈溶解，定容至刻度。得洛伐他丁对照品贮备液。

供试品溶液的配制:取血脂康胶囊内容物约0.06 g(相当于1/5粒)，于50 ml离心管中，加入10.0 m lpH=3磷酸水溶液，超声提取10 min后精密加入10.0 ml三氯甲烷，置涡旋混匀器混合3 min。静置后去掉上层水相，将三氯甲烷以3000转/min离心3 min。准确吸取上清液5.0 m l，蒸干，用流动相溶解，置25 m l量瓶中，定容至刻度。

酸破坏试验溶液:取血脂康胶囊内容物约0.06 g，加入0.05 mol/L盐酸溶液10.0 ml，放置2 h，精密加入10.0 ml三氯甲烷，以下同供试品溶液制备方法制备酸破坏试验溶液。

2.3 测定方法

2.3.1 专属性试验:取上述对照品溶液、供试品溶液、酸破坏试验溶液，分别进样10μl，测定结果见图1。

图1 专属性试验色谱图

酸破坏实验表明，有关物质明显变化，各杂质峰与主峰之间的分离度良好。

2.3.2 线性关系考察 精密量取洛伐他丁对照品贮备液，加流动相配制成浓度为 2.0、10、50、100、300μg/ml洛伐他丁标准溶液。分别注入液相色谱仪，进样量10μl，以浓度为纵座标，以对应的峰面积为横座标，绘制标准曲线，洛伐他丁的标准曲线为 Y=3E-5X，线性范围为1.958～293.7 mg/L，r=0.999.

2.3.3 检测限的测定 精密量取洛伐他丁对照品溶液，用流动相遂级稀释进样，按3倍信噪比计算洛伐他丁最低检测限为2μg/L，结果表明，该法灵敏度较好.

2.3.4 溶液稳定性试验 取供试品溶液，在室温下放置，于0、2、4 h分别进样，测定血脂康胶囊杂质1、杂质2的峰面积，结果表明血脂康胶囊溶液在4 h内稳定。

2.3.5 精密度试验 取供试品溶液连续进样6次，记录峰面积，计算血脂康胶囊杂质1、杂质2峰面积的 RSD为0.58%，结果表明，仪器的进样精密度良好。

2.3.6 记录时间的确定 上述条件下，色谱图中明显可见的有关物质最大的保留时间在主峰附近，确定记录时间为主峰保留时间的2倍。

2.4 结果 根据上述实验结果，制定血脂康胶囊有关物质检查方法，照高效液相色谱法《中国药典》2010年版附录测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇:水:磷酸(77∶23∶0.14)为流动相，检测玻长为238 nm，理论板数按洛伐他丁计算不低于2500，洛伐他丁峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。

测定法取本品的内容物，混合均匀，精密称取适量(相当于1/5粒量)，于50 m l离心管中，加入10.0 m lpH=3磷酸水溶液，超声提取10 min后精密加入10.0 ml三氯甲烷，置涡旋混匀器混合3 min。静置后去掉上层水相，将三氯甲烷以3000转/min离心3 min。准确吸取上清液5.0 m l，蒸干，用流动相溶解，置25 ml量瓶中，定容至刻度，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1 m l，置100 ml量瓶中，用流动相定容至刻度，作为对照品溶液;分别注入液相色谱仪，记录色谱图至洛伐他丁峰保留时间的2倍，供试品溶液如有杂质峰，(溶剂峰和辅料峰除外)，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)。

3 讨论

3.1 酸破坏试验结果表明，洛伐他丁容易被酸破坏降解，产生有关物质，为了更好地控制血脂康胶囊的质量，建议对血脂康胶囊进行有关物质的控制。

3.2 杂质限度的确定，参照《中国药典》洛伐他丁胶囊项下有关物质的规定，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%);各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)。

3.3 高效液相色谱法检查血脂康胶囊的有关物质，灵敏度高，专属性强，重复性好，建议作为血脂康胶囊有关物质的检查方法。

［1］中国药典.2010年版二部，2010:614-615.

530001 南宁食品药品检验所