柴胡皂苷D对老年膜性肾炎大鼠模型的治疗作用

2012-02-01敖弟书张胜志遵义医学院附属医院肾内科贵州遵义563000

中国老年学杂志 2012年16期

王虹敖弟书张胜志 (遵义医学院附属医院肾内科，贵州遵义 563000)

王虹敖弟书1张胜志 (遵义医学院附属医院肾内科，贵州遵义 563000)

目的观察柴胡有效成分柴胡皂苷D对老年膜性肾炎大鼠模型的治疗作用。方法通过尾静脉注射兔抗鼠血清建立大鼠被动型Heymann肾炎模型，连续腹腔注射柴胡皂苷D 30 d，观察柴胡皂苷D对实验动物尿蛋白和血清总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮等生化指标的影响。结果柴胡皂苷D可以降低被动型Heymann肾炎大鼠模型的尿蛋白，并对其生化指标具有改善作用。结论柴胡皂苷D对老年常见肾小球肾炎(膜性肾炎)大鼠模型(被动型Heymann肾炎模型)的肾功能具有改善作用。

柴胡皂苷D;膜性肾病;被动型Heymann肾炎模型

在原发性老年肾小球肾炎患者中膜性肾炎最为常见〔1〕。目前体外动物研究均采用Heymann肾炎模型〔2〕。柴胡皂苷D为中药材柴胡的有效成分之一，文献报道该成分对膜性肾炎具有治疗作用〔3，4〕。本文通过建立大鼠被动型 Heymann肾炎模型(PHN)，观察柴胡皂苷D对老年膜性肾病的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物柴胡皂苷D购自南京泽朗医药科技有限公司;弗氏完全佐剂购自Sigma公司;其他相关生物检测试剂及试剂盒均购自德赛诊断系统(上海)有限公司。

1.1.2 动物纯种新西兰白兔，雄性，体重(2.5±0.2)kg;20月龄雄性SD大鼠，200～250 g，普通级，均由遵义医学院实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 兔抗鼠FX1A血清的制备按照文献方法〔5〕，提取SD大鼠近曲小管刷状缘抗原(FX1A)，每10mg FX1A用0.1m l弗氏完全佐剂乳化。取雄性纯种新西兰白兔4只，皮下多点注射FX1A乳剂，每只1 m l，2次/w，3 w后取兔血制成兔抗鼠FX1A血清，低温冰箱冷冻备用。

1.2.2 大鼠PHN肾炎模型的复制及分组收集所有SD大鼠24 h尿样，用尿液分析仪检测尿蛋白，筛选尿蛋白指标正常的SD大鼠进行实验。随机选择其中15只作为正常对照组，其余按10 ml/kg剂量尾静脉注射兔抗鼠FX1A血清，正常对照组注射生理盐水。造模10 d后，动物出现蛋白尿、体重减少等情况，收集24 h尿液，测定尿蛋白，尿蛋白含量大于50 mg/24 h的大鼠为造模成功。将造模成功的大鼠随机分为4组(每组15只):模型对照组、柴胡皂苷D低、中、高剂量组，并按10 m l·kg－1·d－1腹腔注射给药，低、中、高剂量柴胡皂苷组给予 1、2、3 mg/kg柴胡皂苷D，正常对照组、模型对照组分别腹腔注射相同量的生理盐水，连续注射30 d。

1.2.3 观察指标 (1)24 h尿蛋白量:分别于造模前、造模后、给药后第10、20、30天收集各组动物24 h尿液，检测尿蛋白量。(2)血清生化指标:实验结束后，处死所有SD大鼠，分别取血检测血清总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮水平。

1.3 统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行分析，数据以±s表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 柴胡皂苷D对PHN大鼠尿蛋白的影响模型对照组与正常对照组相比，24 h排出的尿蛋白总量持续升高(P＜0.01);柴胡皂苷D低、中、高剂量组与模型对照组相比，给药后10～30 d，对24 h排出尿蛋白总量均有不同程度的抑制作用(P＜0.05)。结果表明柴胡皂苷D可以降低PHN大鼠尿蛋白的排泄量。见表1。

2.2 柴胡皂苷D对PHN大鼠血清生化指标的影响给药后30 d，模型对照组PHN动物血清总蛋白、白蛋白含量均明显低于正常对照组(P＜0.05);柴胡皂苷D低、中、高剂量组对血清总蛋白、白蛋白的比值均有不同程度的升高作用(P＜0.05)，其中，中、高剂量组作用较为明显。低、中、高剂量组PHN大鼠血清肌酐、尿素氮含量均有显著降低作用(P＜0.05)。结果表明，柴胡皂苷D对PHN大鼠血清指标具有显著改善作用，并且对肾功能具有保护作用。见表2。

表1 柴胡皂苷D对PHN大鼠24 h尿蛋白的影响(±s，n=15，mg/24 h)

与正常对照组比较:1)P＜0.01;与模型对照组比较:2)P＜0.05;下表同

组别剂量(mg/kg) 造模前造模后(给药前) 给药后第10天给药后第20天给药后第30天正常对照组6.8±1.2 7.0±1.4 6.9±1.2 6.9±1.3 7.1±1.6模型对照组－ 6.4±2.3 56.4±6.31) 72.3±8.31) 89.1±8.21) 103.8±7.61)低剂量组 1.0 7.2±1.5 58.3±7.22) 61.5±5.82) 52.8±5.12) 38.4±2.92)中剂量组 2.0 6.9±2.1 54.9±4.22) 46.2±4.22) 38.8±3.62) 28.2±2.12)高剂量组 3.0 6.7±1.8 56.3±5.12) 42.2±4.82) 32.8±3.32) 25.7±1.92)－

表2 柴胡皂苷D给药30 d后对PHN大鼠血清生化指标的影响(±s，n=15)

组别总蛋白(g/L)白蛋白(g/L)肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)正常对照组74.6±4.7 35.2±2.1 25.4±3.1 3.9±2.6模型对照组 63.2±4.81) 24.5±1.91) 61.6±5.31) 6.2±4.71)低剂量组 66.4±3.12) 28.3±2.72) 51.2±4.62) 5.3±4.32)中剂量组 72.7±3.52) 33.2±3.22) 37.2±4.12) 4.9±3.72)高剂量组 73.9±4.42) 32.9±2.32) 29.6±3.72) 4.2±3.22)

3 讨论

柴胡为伞形科植物柴胡的干燥根，已有数千年应用历史，具有疏散退热、舒肝利胆、开发清阳之功效，为中医常用药材。其主要药理成分为柴胡皂苷，其中以柴胡皂苷A、C、D含量较高〔6〕，其中柴胡皂苷D被认为对膜性肾炎具有治疗作用〔3〕。目前公认的膜性肾炎的动物实验模型由Heymann于1959年首次报道，该模型可以分为主动型与被动型〔2〕。其中大鼠PHN是经典的实验性自身免疫复合物性肾炎模型，病变特征类似人类膜性肾小球肾炎〔7〕，而膜性肾小球肾炎正是老年肾炎的最常见类型。

膜性肾病由于肾小球滤过膜屏障受损，引起尿蛋白含量增高，导致血清中白蛋白经肾脏不断被排泄出体外，使体内血清总蛋白、白蛋白含量严重下降，大多数以肾病综合征起病，仅有2%表现为无症状非肾病范围的蛋白尿。伴有肾功能损害时，依赖肾代谢的肌酐、尿素氮在体内蓄积量增加。

一些研究表明，柴胡皂苷D具有一定的抗炎作用，其对PHN大鼠的治疗机制可能是通过抗炎作用改变肾小球毛细血管通透性，从而减轻尿蛋白排泄量;此外，柴胡皂苷D还可能通过抑制抗体的生成、提高肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)活性等方面，发挥其治疗作用〔4〕。

本文研究结果表明，柴胡皂苷D可以显著降低PHN的尿蛋白量;同时抑制模型动物血清总蛋白、白蛋白降低及尿素氮、肌酐水平升高，从而改善肾脏功能。

1 于光，于建平，许静，等.60岁及以上老年人肾活检临床病理分析〔J〕.第二军医大学学报，2006;27(12):1381-3.

2 肖智勇，周文霞，张永祥，等.肾小球肾炎动物模型及其在新药评价中的应用〔J〕.中国新药杂志，2005;14(1):14-8.

3 梁云，崔若兰.柴胡皂甙-d治疗抗肾小球基膜型肾炎的实验研究〔J〕.第二军医大学学报，1999;20(7):416-9.

4 徐安平，崔若兰.柴胡皂甙d对实验性膜性肾炎疗效及作用机理研究〔J〕.肾脏病与透析肾移植杂志，1995;4(3):215-7.

5 廖雪珍，周玖瑶，李锐，等.肾复康对大鼠被动型Heymann肾炎的治疗作用研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2001;7(3):35-8.

6 王皓，刘亚东，石卓.复方康肾片对老年大鼠 Heymann肾小球肾炎动物模型的影响〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(8):948-9.

7 谭玲玲，蔡霞，胡正海.柴胡和狭叶柴胡营养器官结构及其化学成分比较研究〔J〕.中草药，2010;41(8):1380-3.

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1005-9202(2012)16-3482-02;