基质金属蛋白酶－14对老年骨肉瘤组织中血管新生的影响

殷 鹏 牟文之 苑广科 (潍坊医学院附属青州中心医院，山东 潍坊 262500)

基质金属蛋白酶－14对老年骨肉瘤组织中血管新生的影响

殷 鹏 牟文之 苑广科 (潍坊医学院附属青州中心医院，山东 潍坊 262500)

目的检测基质金属蛋白酶(MMP)－14、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34在骨肉瘤中表达，探讨MMP－14和VEGF对骨肉瘤中CD34标记阳性的血管密度(MVD)的作用。方法79例骨肉瘤患者术后存档蜡块为观察组，40例良性骨病变组织为对照组，采用免疫组织化学方法检测MMP－14、VEGF和CD34表达，分析MMP－14、VEGF表达和MVD在不同临床病理特征的关系。结果观察组MMP－14、VEGF表达阳性率、MVD显著高于对照组;观察组MMP－14、VEGF和MVD均与骨肉瘤临床分期、Ki67表达及肿瘤体积相关。骨肉瘤MMP－14、VEGF表达和MVD呈正相关。结论骨肉瘤MMP－14、VEGF高表达，共同促进CD34阳性的MVD形成，联合检测MMP－14和VEGF可能对判断骨肉瘤预后有重要意义。

骨肉瘤;基质金属蛋白酶－14;血管内皮生长因子;CD34;免疫组织化学技术

老年骨肉瘤患者病情发展快，且肿瘤于数月内通过血道出现肺部转移，因此恶性程度高，预后极差〔1〕。老年人手术过程中，较难对肿瘤组织切除干净，可能与肿瘤中旺盛的血管新生有关。新近研究表明骨肉瘤生长过程常依赖血管生成，基质金属蛋白酶家族(MMPs)是一大类锌依赖性内肽酶家族，在肿瘤浸润性生长和转移中起重要作用〔2〕。MMP－14是MMPs家族重要成员，是一种跨膜蛋白水解酶，可降解基底膜和细胞外基质(ECM)成分，同时降解细胞因子和生长因子等〔3，4〕。近来有观点认为MMP－14对肿瘤血管生成具有一定促进作用〔5〕。本文探讨MMP－14对老年人骨肉瘤组织中血管生成的影响。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2005年1月至2010年12月行骨肉瘤手术切除的蜡块组织79例。均符合WHO骨肉瘤诊断标准。年龄60～89(平均66.9)岁，其中男40例，女39例，术前均未行放化疗。同时选取病理证实为良性骨肿瘤的老年人标本40例为对照组，骨样骨瘤30例，骨瘤10例;男女各20例，年龄60～86(平均67.6)岁。两组性别、年龄等无明显差别，具有可比性。

1.2 MMP－14、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34蛋白检测MMP－14、VEGF和CD34均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。三种蛋白检测应用免疫组织化学技术SP法，操作均由同一病理技师完成，严格按说明书操作，严格质控。

1.3 结果判定标准 MMP－14和VEGF均为细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片随机观察20个具有代表性的视野，取阳性细胞平均数，以阳性细胞数≥20%阳性，以＜20%

为阴性。CD34标记的微血管密度(MVD)的评价方法:以毛细血管内皮细胞胞质染色呈棕黄色颗粒者为阳性细胞，确定棕黄色染色的内皮细胞或细胞丛为一个血管，先在低倍镜下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度最高处，在高倍镜下记录5个视野内微血管数，取其平均数为MVD值。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行χ2和t检验及相关分析。

2 结果

2.1 两组 MMP－14、VEGF表达和 MVD比较 观察组 MMP－14、VEGF阳性表达率和MVD明显高于对照组(均P＜0.05)。见表1。

2.2 骨肉瘤MMP－14、VEGF表达和MVD与不同临床病理特征的关系 观察组MMP－14和VEGF阳性表达率、MVD值与骨肉瘤肿瘤直径、Ki67表达量及Ennecking分期有关。见表2。

表1 两组MMP-14、VEGF阳性表达率和MVD比较〔n(%)〕

表2 MM P-14、VEGF表达和MVD与骨肉瘤临床病理指标的关系

2.3 观察组MMP－14、VEGF阳性表达和MVD相关性分析线性相关分析结果显示MMP－14和VEGF呈正相关(r=0.41，P=0.032 9)，MMP－14 和 MVD 呈正相关 (r=0.48，P=0.012 6)，VEGF和 MVD 呈正相关(r=0.51，P=0.008 6)。

3 讨论

老年人由于机体退行性变化表现出肿瘤恶变过程中的差异，老年人骨肉瘤中存在丰富血管新生，且生物学行为复杂，影响因素更多〔6〕。MMPs是一组结构上具有很大同源性，并能有效降解ECM蛋白质，因为结构中含有金属离子(主要是锌和钙)而进行命名〔7〕。MMP－14发挥作用时能在细胞表面对MMP－2等 MMPs家族成员进行有效活化，同时又反作用于MMP－14，使MMP－14表达明显增高，形成环式循环，进而促进肿瘤离开原发部位发生转移〔8，9〕。也有研究显示 MMP－14可诱导肿瘤间质细胞产生MMP－14原酶，该酶激活后被肿瘤细胞摄取到细胞膜表面，起到降解ECM的作用;且激活的MMP－14不仅可激活 MMP－2 降解周围基质，也可发挥降解 ECM 功能〔10，11〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，对肿瘤基质血管形成及肿瘤生物学行为均有重要影响〔12〕。而血管新生的标记物是研究肿瘤血管新生的基础。CD34是直接反映肿瘤血管新生的指标，其标记血管内皮细胞的特异性和敏感性均很强。

本实验结果提示MMP－14、VEGF和CD34在肿瘤形成和进展中有重要作用。MMP－14可通过调节ECM合成与降解代谢而影响细胞间、细胞与基质间信息传递，调节细胞分化及迁移，进而可能影响肿瘤生物学行为。本实验结果提示MMP－14、VEGF对肿瘤中MVD有重要促进作用，即MMP－14、VEGF共同促进骨肉瘤中血管形成。此结果也提示MMP－14可能作为上游蛋白，调节VEGF表达，使骨肉瘤中新生血管增加，加速肿瘤形成〔13〕。实验结果显示MMP－14、VEGF和MVD均与肿瘤体积、Ki67表达阳性率及Ennecking临床分期密切相关，由于Ki67表达及 Ennecking分期均与骨肉瘤预后相关，因此，联合检测MMP－14、VEGF和MVD可能对判断老年人骨肉瘤预后有一定价值，即MMP－14、VEGF和MVD高表达老年患者预后差。

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R738

A

1005-9202(2012)16-3408-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.022

殷 鹏(1965－)，男，副主任医师，副教授，主要从事骨外科疾病研究。

〔2011－10－17 收稿 2012－01－19 修回〕

(编辑 袁左鸣/张 慧)