菖远胶囊的质量标准研究

王 萌 肖会敏 何 悦 曹 蔚 王四旺

第四军医大学药学院，陕西西安 710032

菖远胶囊主要由石菖蒲、远志、人参、丹参、川芎等中药组成，具有开窍通经、醒神益智、破瘀行出、滋阴补气之功效，主要用于智能衰退及意识障碍等。研究发现石菖蒲挥发油是该药材中镇静、催眠、抗惊厥作用的主要有效部位[1]，而挥发油中主要活性成分是细辛醚系列物，主要有α-细辛醚、β-细辛醚等[2]。远志具有益智安神、祛痰消肿的功效，主含远志皂苷[3]。本文旨在建立制剂质量标准方法，采用薄层色谱法分别对制剂中远志、人参、丹参、川芎等药材进行鉴别，采用HPLC法对制剂中α-细辛醚的含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪，配2695分离单元，2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站，自动进样器，美国Waters公司；薄层成像仪，瑞士camag公司；RD200电子分析天平，德国sartorius公司。

1.2 试药

α-细辛醚对照品（纯度＞98%，Sigma-Aldrich chemie），购自北京丰特斯化学试剂公司；人参皂苷Rg1对照品（批号：0703-200921）、人参皂苷 Re对照品（批号：0754-201017）、丹参酮ⅡA对照品（批号：0716-200911）、远志对照药材（批号：0904-9904）、川芎对照药材（批号：0918-9603）、丹参对照药材（批号：923-200906），均购自中国药品生物制品检定所；菖远胶囊，批号：20110605、201106010、20110615，由第四军医大学药物研究所研制；甲醇，色谱纯，美国Honeywell公司；纯水，由millipore纯水仪制备（美国millipore公司）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 远志药材薄层鉴别[4]

取本品内容物2.0 g，加盐酸无水乙醇20 mL，加热回流30 min，冷却，滤过，滤液加水30 mL，用氯仿振摇提取2次，每次20 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加醋酸乙酯1 mL使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取远志对照药材1 g，同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液（缺远志）。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂甲苯-醋酸乙酯-甲酸（14.0∶4.0∶0.5）展开（展距 18.0 cm），取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

2.2 人参药材薄层鉴别[4]

取本品内容物2.0 g，加氯仿40 mL，加热回流1 h，弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，加水0.5 mL拌匀湿润后，加水饱和的正丁醇10 mL，超声处理30 min，吸取上清液，加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制成阴性对照溶液（缺人参）。另取人参皂苷Re、Rg1对照品，加甲醇制成每毫升各含0.5 mg的混合溶液，吸取上述4种溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开（展距18 cm），取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图2。

2.3 丹参药材与丹参酮ⅡA薄层鉴别[4]

取本品内容物2.0 g，加乙醚10 mL，放置1 h（不停振摇），滤过，乙醚液低温挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液。取丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取丹参对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液（缺丹参）。吸取上述四种溶液各5 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，以展开剂苯-醋酸乙酯（19∶1）展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，结果见图3。

2.4 川芎药材薄层鉴别[5]

取本品内容物5.0 g，加乙醚20 mL，超声15 min，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液（缺川芎）。吸取上述3种溶液各5 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，以展开剂正己烷-醋酸乙酯（9︰1）展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，结果见图4。

2.5 α-细辛醚含量测定[6]

2.5.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（58∶42）；检测波长：257 nm；流速：1.00 mL/min；柱温：25℃；进样量：10 μL，在此条件下理论板数以 α-细辛醚峰计应不低于4 000。见图5。

2.5.2 溶液的制备

2.5.2.1 对照品溶液的制备 精密称取α-细辛醚对照品12.00 mg于10 mL量瓶，用50%甲醇溶解并定容至刻度即得浓度为1.20 mg/mL对照品溶液，将其作为母液。

2.5.2.2 供试品溶液的制备 取本品10粒，倒出内容物，称取0.5 g，置于25 mL量瓶中，加15 mL 50%甲醇，超声处理30 min后，冷却，加50%甲醇至刻度。摇匀，滤过。精密量取续滤液10.0 mL，置于25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，作为供试品溶液。

2.5.2.3 阴性样品溶液的制备 取不含石菖蒲的菖远胶囊10粒，按供试品下方法制备得阴性样品溶液。

2.5.3 方法学考察

2.5.3.1 标准曲线绘制 分别精密量取母液0.10、0.20、0.25、0.40、0.50、1.00 mL于10 mL量瓶中，加50%甲醇到刻度，滤过（滤膜 0.45 μm），进样，测定峰面积。以横坐标（X）为浓度（mg/mL）、纵坐标（Y）为峰面积的积分值进行线性回归，得线性方程：Y=11 291 939X-6 181 679（r=0.999 8）。结果表明，α-细辛醚质量浓度线性范围为0.12～1.20 mg/mL。

2.5.3.2 精密度试验 精密量取对照品溶液（α-细辛醚0.48 mg/mL）10 μL分别注入色谱仪，连续进样5次，测定峰面积。结果峰面积的积分值RSD为0.92%（n=6），表明该方法精密度良好。

2.5.3.3 稳定性试验 取同一供试品溶液（α-细辛醚0.48 mg/mL）10 μL，分别在 0、1、2、4、8、12 h 依法测定。 结果 α-细辛醚的RSD=1.02%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.5.3.4 重复性试验 取同一批样品6份（批号：20110605），每份0.5 g，精密称定，按“2.5.2”项下方法制备溶液，测定。结果平均含量为0.36 mg/g（RSD=0.98%），表明该方法重复性良好。

2.5.3.5 加样回收率试验 取已知含量样品粉末约0.5 g（批号：20110605，含量为 0.36 mg/g），共 6份，每份 0.5 g，精密称定，分别加入对照品（取上述线性样品0.12 mg/mL对照品溶液），按“2.5.2”项下方法制备溶液，按“2.5.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率。结果α-细辛醚平均回收率为99.69%，RSD为 1.33%（n=6），结果见表 1。

表1 加样回收率试验结果

2.5.4 样品含量测定

取3批样品，每批样各3份，按“2.5.2”项下方法制备溶液，按“2.5.1”项下色谱条件进行测定。结果见表2。

表2 菖远胶囊中α-细辛醚含量测定结果（n=3）

3 讨论

上述薄层鉴别结果显示各药材均具有良好分离度，各个特征斑点在相应的位置均出现，且阴性无干扰，说明有很好的专属性。含量测定结果显示精密度与重复性良好，加样回收率高，所以该方法稳定、可靠。

石菖蒲为君药，挥发油含量较高[2]，α-细辛醚、β-细辛醚等是石菖蒲挥发油的主要有效成分，因此将含量测定指标定为α-细辛醚，经过方法学考察与3种试样品验证，本方法稳定，制剂中α-细辛醚含量稳定均一。远志也为君药，将其进行薄层鉴别，检出特征斑点，同时阴性无干扰；将臣药人参及佐药丹参、川芎等也进行了薄层鉴别，具有良好分离度，检出特征斑点且阴性无干扰。

综上所述，由于上述TLC方法可检出特征斑点，专属性强，定量定方法具有准确、稳定、可靠等优点，因此将其列入质量标准草案以控制该制剂质量。

[1]胡锦官，顾健，王志旺．石菖蒲及其有效成分对中枢神经系统作用的实验研究[J]．中药药理与临床，1999，15（3）：19-21.

[2]刘春海，刘西京，杨华生．石菖蒲挥发油的GC-MS分析[J]．中医药学刊，2006，24（7）：1280-1281.

[3]马菁菁，刘斌，罗跃娥.远志化学成分和药理活性的研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（12）：161-163.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005：6，57，123.

[5]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：38.

[6]董玉，石任兵，刘斌．石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定[J]．北京中医药大学学报，2007，30（5）：340-342.