不同计数法对乙肝患者白细胞检测的影响

吴树林

不同计数法对乙肝患者白细胞检测的影响

吴树林

目的 探讨不同计数法对乙肝患者白细胞检测的影响。方法 对笔者所在医院50例慢性乙型重症肝炎患者(血清胆红素150～500 μmol/L)，用血细胞分析仪计数和手工方法计数，对两种方法进行比较。结果 高胆红素血用血细胞分析仪计数与手工法计数差异有统计学意义(P＜0.001)，高胆红素血能够使血细胞分析仪白细胞计数假性增高。结论 高胆红素血对血细胞分析仪计数结果有较大影响，应用手工方法复检。

计数法; 乙肝; 白细胞

黄疸是慢性重症肝炎的主要表现之一，主要是由肝细胞受损、坏死后摄取、转化、排泄胆红素的能力下降使得血液中的胆红素浓度升高所致。近年来，随着医学科学技术突飞猛进的发展，全自动血细胞分析仪已在全国广泛应用，这不仅提高了实验结果的精密性和准确性，而且也提高了工作人员的效率。但是，各类仪器仍有其不足之处，在日常工作中笔者发现，用血细胞分析仪对重症黄疸肝炎患者进行血常规测定时，部分患者白细胞假性增高，如果检验人员不进行下一步手工复查，会发出不准确的检验结果，严重影响临床医生对患者的治疗。本文探讨不同计数法对白细胞计数分类的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 50例重症乙型肝炎患者的血常规标本均来自笔者所在医院2011年1月～2011年6月感染科患者，其中男33例，女17例，年龄19 d～72岁，其中婴儿5例。经生化检验胆红素150～500 μmol/L。

1.2 仪器与试剂 深圳迈瑞公司生产的BC－5380五分类血细胞分析仪及配套试剂和质控;日本Olympus显微镜;血清胆红素检测使用罗氏MODULE P800生化分析仪及原装配套试剂。

1.3 方法 (1)血细胞分析仪检测方法:使用迈瑞BC－5380血细胞分析仪对50份标本进行检测，操作严格按生产厂商的操作手册进行。即取患者静脉血2.0 ml，置于EDTAK2抗凝管内，充分颠倒混匀，1 h内上机检测。同种标本用相同仪器RRBC模式复检。(2)手工操作方法:严格按《全国临床检验操作规程》第2版进行［1］。即用已校正好的微量吸管吸取20 μl上述血样，放入0.38 ml WBC稀释液内，用改良牛鲍氏计数板显微镜计数。手工检测由于使用显微镜目测，能够排除红细胞及红细胞碎片的影响，此结果与有关研究［2，3］相符。体外标本去除高胆红素血浆后，不能导致仪器检测白细胞数的改变，此结果与有关研究［4］相符。

1.4 统计学处理 应用PEMS 3.1医学统计学软件对数据进行处理，数据采用单样本t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

50例重症黄疸肝炎患者的白细胞检测中，血细胞分析仪检测与手工操作方法检测的结果分别为(6.934±4.323)×109/L和(5.4±2.16)×109/L，差异有统计学意义(t=6.1264，P ＜0.001)。

3 讨论

深圳迈瑞公司生产的BC－5380型全自动五分类血细胞分析仪采用半导体激光散射技术、细胞化学染色技术和先进的流式分析装置对白细胞、红细胞、血小板系列多个参数进行精确的计数和分类分析，是目前国内能生产五分类血细胞分析仪为数不多的厂家，具有快速、准确、稳定性好等优点。白细胞计数前会自动以溶血剂先将红细胞溶解，红细胞溶解后血细胞分析仪再计数白细胞池中颗粒数量，对白细胞是否有干扰取决于红细胞在溶血素作用后的破坏程度。正常人的红细胞加入溶血素后很容易溶解，肝病患者肝细胞受损后其摄取、转化、排泄游离胆红素的能力下降，从而使患者出现高胆红素血症。高胆红素能够使红细胞膜出现异常，使红细胞对溶血素具有一定的抵抗能力，使一部分溶血素被消耗而导致溶血素相对不足，红细胞不能够被完全破坏，未破坏的红细胞和碎片由于和淋巴细胞体积大小接近使血细胞分析仪误认其为白细胞，因此导致白细胞计数假性增高和白细胞分类不准确。同时，高胆红素能够和红细胞膜结合，血小板脂质结合形成大分子物质，血细胞分析仪检测时会把这些大分子物质和未破坏的红细胞记成淋巴细胞，从而使白细胞的总数明显高于手工计数，细胞分类时淋巴细胞假性增高，中性粒细胞相对减少。另外，标本的溶血不全可能会堵塞机器。

生理性胆红素可以清除脂质过氧化物，能保持正常细胞膜脂质的流动性。但高浓度的胆红素容易形成稳定的胆红素自由基［5］，使多余的细胞膜脂不能被清除，细胞膜脂结合蛋白质后溶血剂也难以溶解，导致仪器在进行白细胞计数时出现误判，把未溶解的红细胞记成白细胞，出现白细胞的假性增高，但并不是所有的高胆红素血症的白细胞计数都假性增高。值得注意的一点是，由于胆红素会导致白细胞计数的假性增高和细胞分类时淋巴细胞假性增高，当遇到分析仪计数此两项同时增高时，应用手工方法复查是否是胆红素影响的假性增高。

有资料表明，肝病患者和新生儿红细胞膜脂类异常，具有抵抗溶血素的作用，导致红细胞溶解不全［6］，就会干扰白细胞的测定，造成白细胞假性增高。而手工方法用1%的HCL可溶解红细胞，不受上述因素的影响。有文献报道，重症黄疸患者血液标本按仪器要求稀释后，在显微镜下观察红细胞的溶解情况，需经120 s才能完全溶解红细胞，而一般的血细胞分析仪测定白细胞的时间会小于60 s。因此，溶血素的作用时间也是导致红细胞溶解不全的原因。消除胆红素对白细胞计数的影响，可采用离心洗涤，用生理盐水洗涤后重新检测。

综上所述，重症肝病患者的高胆红素血液标本能够引起血细胞分析仪白细胞计数假性增高，如果偏信血细胞分析仪的检测结果，会误导医生按合并感染处理，不仅给患者造成一定的经济负担，还会给患者的病情造成一定的影响。因此，在遇到黄疸患者血细胞分析白细胞增高时，必须使用手工方法复查，才能为临床提供更为准确，可靠的依据。

［1］叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京:东南大学出版社，1997:4.

［2］邝泳云.一种异常白细胞直方图的分析及原因初探［J］.上海医学检验杂志，2000，15(1):15.

［3］凌励，金丽茵，林紫云.肝病患者白细胞异常直方图原因初探［J］.上海医学检验杂志，2000，15(6):337 －338.

［4］吕斌斌，梁海丽，冯静霞.黄疸乳糜对血液细胞分析结果的影响［J］.江苏大学学报(医学版)，2004(1):64 －65.

［5］刘湘陶，刘慧娟.胆红素自由基对大鼠肝细胞损伤作用的研究［J］.生物化学杂志，1995，11(1):71 －75.

［6］丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学［M］.第2版.北京:中国科学技术出版社，1997:41.

10.3969/j.issn.1674 －4985.2012.06.050

466000河南省周口市中心医院

吴树林

2011－12－29)

(本文编辑:王宇)