宁心解郁胶囊质量标准的研究

孔慧，郝丽静，邢红霞，吴黄焱，倪健*

(1.北京中医药大学中药学院，北京100102;2.河北大学，河北保定071000;3.曲阜市中医医院，山东曲阜273100)

宁心解郁胶囊为北京中医药大学东直门医院主持研发的中药第五类新药，由萱草花(百合科植物萱草Heirieroe-allis fulvaL.或黄花菜Hemerocallis citriaBaroni的干燥花蕾)提取精制而成，具有宁心解郁［1］的功效，主要用于治疗抑郁症。据报道萱草花化学成分复杂［2-3］，主要含黄酮类成分［4-6］，本试验对制剂中的萱草花进行了薄层色谱鉴别［7］;定量测定研究用紫外分光光度法［8-9］测定制剂中总黄酮，用HPLC法［10］测定制剂中芦丁，为该制剂的质量标准制定提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器TU—1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);SD—20岛津液相色谱仪(日本)，四元泵(LC—20ATvp)，SPD—M20A二极管阵列检测器，LC—液相色谱工作站。Sartorius电子分析天平(BT 125D)。KQ3200DE型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料宁心解郁胶囊样品由北京中医药大学制备;芦丁对照品购自中国食品药品检定研究院(100080-200707)。甲醇为色谱纯(Fisher公司);水为屈臣氏纯净水;其他试剂均为分析纯。

2 鉴别

萱草花的鉴别取本品胶囊内容物约0.5 g，用适量30%乙醇超声溶解，离心取上清液，作为供试品溶液。另取芦丁标准品，加甲醇制成1 mg/mL溶液，作为芦丁对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一聚酰胺板上，以甲醇-水(1∶1)为展开剂，展开，取出，喷1%三氯化铝展开剂显色，置紫外光灯(365 nm)下检视。检测色谱中，供试品在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。

图1 萱草花的鉴别图谱

3 定量测定［11-13］

3.1 紫外分光光度法测定总黄酮

3.1.1 测定波长的选择芦丁标准溶液和萱草花提取液分别按实验方法显色后，在波长400～600 nm范围内扫描，结果芦丁标准溶液显色后在510 nm处有最大吸收，萱草花提取液显色后在此波长下也有吸收，实验选用510 nm为测定波长。

3.1.2 供试品溶液的制备精密称取本品粉末20 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超声处理10 min，即得。

3.1.3 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，摇匀，即得。

3.1.4 标准曲线的制备参照郝丽静等［14］在测定萱草花总黄酮时制备标准曲线的方法进行制备。

3.1.5 测定方法取供试品溶液1 mL，置25 mL量瓶中，按照标准曲线制备项下的方法，测定吸光度，用标准曲线计算供试品溶液中含芦丁的质量浓度，即得。

3.1.6 方法学考察结果稳定性试验:结果显示样品溶液在1 h内稳定性良好，RSD值＜2.0%。精密度试验(n=6)、重复性试验(n=6)和加样回收率试验(n=6)的结果显示:RSD值均＜2.0%，符合方法学考察的要求，加样回收率平均值为101.28%，在95%～105%之间，符合要求。

3.2 HPLC法测定芦丁

3.2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.5%冰醋酸溶液(40∶60)为流动相;检测波长为254 nm。理论塔板数按芦丁峰计算应不低于3 000。

3.2.2 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，摇匀，即得。

3.2.3 供试品溶液的制备精密称取本品粉末20 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超声10 min，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

3.2.4 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，既得。

3.2.5 专属性试验取制剂辅料糊精10 mg，置10 mL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超声10 min，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得阴性样品溶液。进样10 μL，按以上色谱条件测定，结果无干扰峰出现。见图2。

图2 HPLC色谱图

3.2.6 线性关系的考察精密吸取质量浓度为0.383 0 mg/mL的芦丁对照品0、1、3、5、7、9、11 μL，分别注入高效液相色谱仪，测得峰面积。以进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程。回归方程为Y=2×106X－34 857，r=1。结果表明芦丁进样量在0～4.213 0 μg与峰面积具有良好的线性关系。

3.2.7 精密度试验取样品溶液10 μL，按以上色谱条件连续进样6次，测定峰面积，结果RSD为0.74%。

3.2.8 稳定性试验每隔2 h进样1针，结果显示，供试品溶液在10 h内稳定性良好。RSD值为0.32%。

3.2.9 重复性试验按样品定量测定项下的方法对批号20110530的样品进行测定，共测定6份，结果平均质量分数为18.60%，RSD值为1.64%。

3.2.10 加样回收率试验精密称取样品(批号20110530，芦丁质量分数18.60%)10 mg，共测定6份，置10 mL量瓶中，加入0.383 0 mg/m L的芦丁对照品溶液4 mL，按样品方法制备供试品溶液，测定含有量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率结果

3.3 样品测定精密称取3批样品，分别按供试品溶液的制备方法制备，分别按以上紫外分光光度法和高效液相色谱法测定，分别代入相应的标准曲线计算质量分数，结果见表2。

表2 样品测定结果

4 讨论

4.1 HPLC测定波长的选择分别取芦丁对照品和样品溶液进液相，DAD检测器检测，芦丁的光谱图显示在254 nm和365 nm有两个大的吸收峰，但是样品在254 nm检测出的峰个数较多，故选择254 nm作为测定波长。

4.2 色谱柱的选择采用Agilent ZORBAX SB-C18，Diamonsil ODS-C18色谱柱(均为416 mm×250 mm，5 μm)2种色谱柱对样品进行测定，流动相为甲醇-0.5%冰醋酸水(40∶60)。结果不同厂家色谱柱对测定结果影响不大。

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