野金柴化学成分的分离和研究

金弘昕，赵亚，赖小平，2，陈建南，2，黄松，2*

(1.广州中医药大学新药开发研究中心，广东广州510006;2.东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东东莞523808)

野金柴，来源于壳斗科栎属植物多穗石柯Lithocarpus polystachyusRehd的干燥叶［1］，又名多穗柯。多以野生状态分布于长江以南各省区，而以江西、湖南、福建、广西、安徽等省资源最为集中［2］。黄酮为其主要成分［3］，含有量高达9.0%～14.60%。现代医学研究表明［4］，野金柴具有清热利尿、润肺镇咳、滋润肝肾等功效，可用于防治温热痢疾、痈疽恶疮、皮肤瘙痒等症，还有“三抗”、“三降”的作用。目前，野金柴在国内有多方面的成分研究［5-7］，但其分离方法多较为繁琐，且分离效果不佳。本实验介绍了分离野金柴化学成分的一种新的系统方法，最终分离得到7种化学成分，进行结构鉴定后分别确定为胡萝卜苷(1)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(2)，槲皮苷(3)，3-羟基根皮苷(4)，根皮苷(5)，山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(6)，齐墩果酸(7)。该分离方法不仅首次从野金柴中分离得到山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷，而且明显改善了其它黄酮类成分的分离效果，尤其使低含有量的黄酮类成分的分离效率显著提高，比如槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

1 仪器与材料

核磁共振波谱仪(BRUKER AV 300 MHz)，分析电子天平(佛山市华天力电子天平厂)，EYELA SB—1000旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，SHZ—D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器厂)，HWS24型电热恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)，ACO—001电磁式空气泵(广东日生集团有限公司)，VGT—2013QTD超声仪，DZF—6020型真空干燥箱(上海博讯实业有限责任公司医疗设备厂)，岛津LC—8A制备型高效液相色谱仪，岛津LC—20AT分析型高效液相仪。

100～200目聚酰胺层析粉(台州路桥四甲生化塑料厂)，AA12S50型C18反相柱层析粉(北京金欧亚科技发展有限公司)，制备液相分离用色谱甲醇，其他所有试剂均为分析纯。

野金柴药材采集于湖南涟原县，经广州中医药大学新药开发研究中心陈建南研究员鉴定为壳斗科植物Lithocarpus polystachyusRehd的干燥叶，标本存放于广州中医药大学新药开发研究中心。

2 提取分离

称取500 g干燥野金柴爆破粉，加蒸馏水混合，70℃水浴加热搅拌使其溶解完全。经乙酸乙酯充分萃取3次，弃去水层，乙酸乙酯层合并，减压浓缩回收溶剂，并用分析甲醇洗出，共得到样品100 mL左右。

样品先经过C18反相色谱柱(20%，30%，40%甲醇水液梯度洗脱)分离，用聚酰胺薄层板展开剂乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸-水(15∶2∶1∶1)，2%氯化铝乙醇溶液显色检验成分，再分别将20%甲醇洗脱部分和30%甲醇洗脱部分过聚酰胺色谱柱(条件均为20%，30%，40%乙醇水液梯度洗脱)，等分收集，同样经过聚酰胺薄层板的观察，合并相同物，再通过高效液相色谱的检验，选择有效合并物。最后采用制备液相(固相种类为ODS，流动相为40%色谱甲醇水溶液)逐一分离纯化，最终得到单体化合物1(30 mg)，2(52 mg)，3(88 mg)，4(191 mg)，5(377 mg)，6(55 mg)，7(25 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末，mp 293～294℃。紫外灯下无荧光，5%硫酸-乙醇显色为红色。其IR、Rf值与胡萝卜苷对照品一致，与胡萝卜苷对照品混合熔点不下降，故鉴定化合物1为胡萝卜苷。

化合物2:淡黄色粉末，Mg-HCl反应阳性，Molish反应阳性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:3.1～3.6(6H，m，H-2″-6″)，5.45(1H，d，H-1″)，6.19(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.84(1H，d，J=9 Hz，H-5')，7.57(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.59(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:60.97(C-6″)，69.93(C-4″)，74.10(C-2″)，76.51(C-3″)，77.57(C-5″)，93.53(C-8)，98.7(C-6)，100.86(C-1″)，103.92(C-10)，115.21(C-5')，116.18(C-2')，121.16(C-1')，121.60(C-6')，133.30(C-3)，144.82(C-3')，148.48(C-4')，156.15(C-9)，156.4(C-2)，161.24(C-5)，164.3(C-7)，177.42(C-4)。综合解析以上数据，文献［8］报道一致，故确定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3:黄色颗粒状结晶(甲醇)，Mg-HCl反应呈阳性，Molish反应阳性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.81(3H，d，J=6.0 Hz，CH3)，3.1～3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.26(1H，brs，H-1″)，6.20(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.39(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.25(1H，dd，J=8.4，2.1 Hz，H-6')，7.30(1H，d，J=2.1 Hz，H-2');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:17.5(C-6″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，70.0(C-5″)，71.2(C-4″)，93.6(C-8)，98.7(C-6)，101.8(C-1″)，104.0(C-10)，115.4(C-2')，115.6(C-5')，120.7(C-1')，121.1(C-6')，134.2(C-3)，145.2(C-3')，148.4(C-4')，156.4(C-2)，157.3(C-9)，161.3(C-5)，164.3(C-7)，177.7(C-4)。综合解析以上数据，和文献［9］报道一致，故确定该化合物为槲皮苷。

化合物4:白色晶体，Molish反应阳性。根据核磁共振波谱的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.77(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-β)，3.17～3.73(5H，m，H-2″-6″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.92(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.92(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.12(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.47(1H，dd，J=7.2，1.8 Hz，H-6)，6.58(1H，d，J=1.8 Hz，H-5)，6.61(1H，d，J=7.2 Hz，H-2);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.1(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.1(C-2″)，76.7(C-3″)，77.2(C-5″)，94.3(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.3(C-5)，115.8(C-2)，118.8(C-6)，132.3(C-1)，143.1(C-3)，144.8(C-4)，160.8(C-2')，164.4(C-6')，165.3(C-4')，204.7(C=O)。综合解析以上数据，和文献［10］报道一致，故鉴定该化合物为3－羟基根皮苷。

化合物5:白色针晶，mp 168～169℃，Molish反应阳性。根据核磁共振波谱的解析，1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:2.81(2H，t，J=7.2，7.2Hz，H-β)，3.17-3.73(5H，m，H-2″-6″)，3.71(1H，d，J=11.1 Hz，H-5″)，4.57(2H，t，J=7.2，7.2 Hz，H-α)，4.93(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，5.93(1H，d，J=2.1 Hz，H-3')，6.13(1H，d，J=2.1 Hz，H-5')，6.64(2H，dd，J=2.7，8.4 Hz，H-3，5)，7.03(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6);13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:29.0(C-β)，44.9(C-α)，60.5(C-6″)，69.4(C-4″)，73.2(C-2″)，76.7(C-3″)，77.3(C-5″)，94.4(C-3')，96.8(C-5')，100.8(C-1″)，105.1(C-1')，115.0(C-3，5)，129.2(C-2，6)，131.6(C-1)，155.3(C-4)，160.9(C-2')，164.6(C-6')，165.4(C-4')204.7(C=O)。综合解析以上数据，和文献［11］报道一致，故确定该化合物为根皮苷。

化合物6:黄色晶体，Mg-HCl反应呈阳性，Molish反应阳性。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:0.78(3H，d，J=6.0Hz，CH3)，3.1-3.9(4H，m，H-2″-5″)，5.29(1H，s，H-1″)，6.19(1H，d，J=3.0 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=3Hz，H-8)，6.91(2H，d，J=9.0Hz，H-3'，5')，7.74(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6');13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ:18.5(C-6″)，70.1(C-5″)，70.3(C-2″)，70.6(C-3″)，71.1(C-4″)，93.8(C-8)，98.9(C-6)，101.8(C-1″)，103.9(C-10)，115.4(C-3')，115.4(C-5')，120.5(C-1')，130.6(C-2')，130.6(C-6')，134.1(C-3)，156.5(C-2)，157.1(C-9)，160(C-4')，161.3(C-5)，164.9(C-7)，177.6(C-4)。以上数据与文献［12］报道一致，故鉴定该化合物为山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物7:白色针晶，mp 305～306℃。Liebermann Burchard反应呈阳性。与齐墩果酸对照品混合，共熔点不下降，它们的IR、TLC的Rf值均为一致［13］，故鉴定该化合物为齐墩果酸。

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