淋必通颗粒对慢性前列腺炎细胞因子的影响

王平，袁敏

(山东省中医药研究院，山东济南250014)

淋必通颗粒处方是一位老中医在经典方五味消毒饮、滋肾通关丸及程氏萆薢消毒饮的基础上，结合多年的临床经验化裁而来。该药由蒲公英、金钱草、石韦、绵萆薢等组成，具有清热利湿、散结通淋之功效，治疗慢性细菌性前列腺炎、非细菌性前列腺炎、前列腺痛所致的尿频、尿急、尿痛、腰痛、小腹痛等症状，疗效显著［1］。通过构建非细菌性前列腺炎模型，检测模型大鼠使用淋必通颗粒后前列腺液中的IL-2、IL-8细胞因子的指数及白细胞数量变化情况，探讨淋必通颗粒治疗慢性前列腺炎的作用机理和作用效果，为开发治疗慢性前列腺炎的药物提供实验数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试药物淋必通颗粒由山东省中医药研究院中心实验室提供，批号20100413。淋必通颗粒提取物人日生药量为92 g，药液质量浓度是3.312 g/mL。使用时用水配成所需质量浓度的药液。

1.1.2 对照药物前列康片:浙江康恩贝制药股份有限公司，批号090964，每片质量0.57 g。口服，1次3～4片，1日3次。

1.1.3 受试药物与剂量设置70 kg人日服生药量92 g，按体表面积折算，确定大鼠高、中、低剂量分别为16.56、8.28、4.14 g/kg(以生药量计)，相当于70 kg人日服量的2、1、0.5倍，按1 mL/100 g体质量的体积灌胃给药。

1.1.4 受试动物Wistar种大鼠，雄性，体质量180～220 g，购自山东省实验动物中心，合格证号:鲁动质scxk(鲁)20090001号。置于不锈钢鼠笼内饲养，自由摄食饮水，室温控制在23～25℃，通风良好。

1.1.5 仪器与试剂Mettler-Toledo基本型天平(PL303，上海梅特勒公司生产);酶标仪(SANCO 318MC型，上海三科仪器有限公司生产);血细胞分析仪(BC—3000，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产)。

IL-2、IL-8细胞因子检测试剂盒细胞因子检测试剂盒:南京建成生物有限公司生产，生产批号:201006。1%角叉菜胶:自配。

1.2 方法

1.2.1 大鼠非细菌性前列腺炎模型的建立［2-6］取健康雄性大鼠，分为正常对照组、非细菌性前列腺炎模型组、淋必通颗粒高、中、低剂量组、前列康片对照组，每组10只。除正常对照组外，其余各组建立大鼠非细菌性前列腺炎模型:取健康雄性大鼠，麻醉后，剖开腹部，向其前列腺两叶分别注入1%角叉菜胶生理盐水溶液各0.1 mL，形成非细菌性前列腺炎模型［2］，术后灌胃给予复方磺胺甲基异恶唑(Co SMZ)抗感染。手术7 d后分别给药，按照淋必通颗粒高、中、低剂量组、前列康片对照组分别给大鼠淋必通颗粒提取物16.56、8.28、4.14 g/kg，前列康片0.62 g/kg，按1.0 mL/100 g体质量的体积灌胃给药，持续4周。

1.2.2 前列腺液的获取将大鼠在麻醉情况下，固定，剖开腹部，在膀胱的后部找到前列腺。结扎前列腺根部，将两叶前列腺完整取出，轻轻将游离端剪开一个小口，让前列腺液缓缓流入离心管中，密闭，待用。

1.2.3 检测指标

白细胞计数检测［7］最后一次给药后，从各组大鼠眼眶静脉取血，用Micros-60型血液生化仪检测白细胞计数，将检测结果进行统计和组间分析。

大鼠的IL-2、IL-8细胞因子检测按照试剂盒说明采用酶标仪检测大鼠的IL-2、IL-8细胞因子，将检测结果进行统计和组间分析。

1.2.4 前列腺组织病理检查将已取出的前列腺，经10%中性福尔马林48 h充分固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规HE染色。HE染色切片在光镜下观察。

2 试验结果与分析

2.1 白细胞计数结果各组大鼠白细胞计数情况见表1。

表1 各组大鼠白细胞计数情况(±s，n=10)

表1 各组大鼠白细胞计数情况(±s，n=10)

注:与正常对照组比较，*P＜0.05;与模型对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

组别剂量/(g·kg－1)白细胞数值/(109·L－1)9.96±3.02模型对照组－13.10±1.86*淋必通颗粒高剂量组16.56 10.20±1.43##淋必通颗粒中剂量组8.28 10.90±1.32##淋必通颗粒低剂量组4.14 11.40±1.63#前列康片组0.62 10.38±1.79正常对照组－##

结果表明:淋必通颗粒对非细菌性前列腺炎模型大鼠的白细胞升高有明显的降低作用，其中，与正常对照组相比，模型对照组白细胞数值有显著性差异，说明造模成功;与模型对照组相比，高、中剂量组和前列康组分别有非常显著性差异(P＜0.01)，低剂量组有显著性差异(P＜0.05)。

2.2 IL-2检测结果各组大鼠前列腺液中的IL-2检测结果见表2。

表2 各组大鼠的IL-2因子的测定结果(±s，n=10)

表2 各组大鼠的IL-2因子的测定结果(±s，n=10)

注:与正常对照组比较，＊＊＊P＜0.001;与模型对照组比较，#P＜0.05。

组别剂量/(g·kg－1)IL-2/(ng·L－1)－163.92±13.80模型对照组－115.29±12.12＊＊＊淋必通颗粒高剂量组16.56 134.86±15.57＊＊#淋必通颗粒中剂量组8.28 123.38±8.94＊＊＊淋必通颗粒低剂量组4.14 121.67±9.37＊＊＊前列康片组0.62 129.38±12.25正常对照组＊＊

结果表明:淋必通颗粒对非细菌性前列腺炎模型的IL-2水平降低有明显的升高作用，与正常对照组相比，模型对照组数值有极其显著性差异(P＜0.001)，说明造模成功;与模型对照组相比，淋必通颗粒高剂量组有显著性差异(P＜0.05)，淋必通颗粒高剂量组的数值高于前列康组。

2.3 IL-8检测结果各组大鼠前列腺液中的IL-8检测结果见表3。

结果表明:淋必通颗粒对非细菌性前列腺炎模型的IL-8水平升高有明显的降低作用，其中，与正常对照组相比，模型对照组有非常显著性差异(P＜0.01)，说明造模成功;与模型对照组相比，高剂量组和前列康组均有非常显著性差异(P＜0.01)。

表3 各组大鼠的IL-8测定结果(±s，n=10)

表3 各组大鼠的IL-8测定结果(±s，n=10)

注:与正常对照组比较，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较，##P＜0.01。

组别剂量/(g·kg－1)IL-8/(ng·L－1)－64.66±8.25模型对照组－99.59±19.31＊＊淋必通颗粒高剂量组16.56 74.17±10.41##淋必通颗粒中剂量组8.28 79.92±17.67淋必通颗粒低剂量组4.14 84.77±26.44前列康片组0.62 70.87±11.04正常对照组##

2.4 大鼠前列腺病理组织学检查结果正常对照组前列腺正常，模型对照组前列腺细胞出现萎缩、变性、坏死，细胞间质可见慢性炎细胞浸润;各组前列腺组织可见间质不同程度的水肿，腺管间隙增大，其间有大量炎性细胞浸润，腺腔缩小，腔内有炎性渗出物，部分可见结缔组织增生。见图1。淋必通颗粒高剂量组易见前列腺细胞，未见明显的萎缩、变性、坏死出现;中剂量组前列腺细胞减少，细胞轻度水肿。低剂量组前列腺细胞减少，可见细胞水肿。前列康组前列腺细胞未见变性坏死。从组织学上可见，淋必通颗粒各治疗组与模型对照组相比，病变较轻，表明淋必通颗粒对前列腺组织具有良好的保护作用。见图2。

图1 前列腺组织肉眼观察照片

3 讨论

本实验采用向雄性大鼠的前列腺两叶分别注入1%角叉菜胶生理盐水溶液，造成前列腺细胞损伤和炎症，形成非细菌性前列腺炎模型［8］。这种动物模型操作简单，实验效果好，符合临床实际病理情况，并创新性地从活体动物身上取得了洁净度高、数量多的前列腺液，为获取大鼠前列腺液探索到了一种新的方法。

目前，国内对前列腺炎治疗的考察多集中在炎性指标上，对于直接反映治“本”效果的细胞因子的研究非常少。本实验结果表明，淋必通颗粒不仅对非细菌性前列腺炎模型大鼠血液中的白细胞升高有明显的降低作用，而且对慢性前列腺炎模型大鼠前列腺液中降低的IL-2因子水平有增高作用、增高的IL-8因子水平有降低作用，提示淋必通颗粒可以恢复慢性前列腺细胞的功能，减少促炎性细胞因子的数量，重新使体内被破坏的免疫系统趋于平衡［9］;光镜下观察到对大鼠前列腺组织发生的病变均有显著的改善，表明淋必通颗粒对前列腺组织具有良好的保护作用。

图2 淋必通颗粒对非细菌性前列腺炎模型治疗病理照片

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